苦瓜中的口服活性成分,其活性肽,及它们治疗糖尿病的用途制造技术

提供了苦瓜的一种水溶性提取物称为ＭＣ６，它的制备方法及在治疗高血糖症中的使用方法。有活性的ＭＣ６的特征是在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳上以单一条带形式迁移，分子量小于１０ｋＤａｌ，包含三种肽。同时提供的还有ＭＣ６的肽成分，称为ＭＣ６．１，以及ＭＣ６．１的衍生物和模拟物。活性ＭＣ６、ＭＣ６．１、ＭＣ６．２、Ｍ６．３有降血糖作用，口服给药后也有这种活性。同时提供的还有利用这些活性药物治疗高血糖疾病的方法，尤其是糖尿病，其中优选口服给予这些活性药物。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

Orally active ingredients of bitter gourd, active peptides thereof, and their use for treating diabetes

The invention provides a water soluble extract of balsam pear, called MC6, a preparation method thereof and a method for the treatment of hyperglycemia. The characteristics of active MC6 in SDS-PAGE gel electrophoresis to form a single band migration, molecular weight of less than 10kDal, contains three kinds of peptide. At the same time, there are also MC6 peptide components, called MC6.1, as well as derivatives and analogs of MC6.1. The activity of MC6, MC6.1, MC6.2 and M6.3 had hypoglycemic effect, and this activity was also observed after oral administration. Also provided are methods of using these active agents for the treatment of hyperglycemia disorders, particularly diabetes, in which oral administration of these active agents is preferred.

【技术实现步骤摘要】
本专利
是糖尿病。
技术介绍
非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM或II型糖尿病)是居美国第四位导致死亡的原因，在全世界有5-7％的人口受它的困扰，并且在西方国家中它的影响日渐严重。患糖尿病时，或者身体不能产生足够的胰岛素，或者产生的胰岛素无效，导致血液中葡萄糖水平升高，这种疾病医学上称为高血糖症。尽管任何年龄的人都有可能患糖尿病，但多数糖尿病患者的年龄超过45岁。此病似乎有家族性，并且体重超标的个体发病的危险率增加。糖尿病是一种慢性病，无法根治并且伴发其它几种疾患。它是导致25-74岁年龄段人失明的主要原因。10％的糖尿病患者并发肾病。糖尿病是导致非创伤性下肢切除最常见的原因。糖尿病患者腿切除的危险率增加30倍。糖尿病患者并发心脏疾病的危险率增加2-4倍，并且中风的可能性增加5倍。导致糖尿病的原因还不清楚，遗传因素和环境因素似乎均起作用。有两种糖尿病胰岛素依赖性(I型)和非胰岛素依赖性(II型)。I型糖尿病是自身免疫疾病，常发生于儿童和青年。导致I型糖尿病的自身抗原还不知道，患者的存活依赖每日静脉注射胰岛素。II型糖尿病是由于机体不能产生足够量的胰岛素或者虽然能产生胰岛素但是不能恰当地使用从而导致的新陈代谢疾病，它被认为是最常见的糖尿病类型。尽管知道缺乏胰岛素的分泌和对胰岛素的抗性是导致II型糖尿病的主要原因，但是其中的精确的遗传因素目前还不清楚。糖尿病患者通常有下列一种或几种缺陷。它们是胰脏产生的胰岛素过少；肝脏分泌的葡萄糖过量；骨骼肌利用葡萄糖功能障碍；葡萄糖转运蛋白(Glut-1，Glut-2)功能障碍；胰岛素受体失敏和多糖代谢分解功能障碍。目前临床除了静脉注射胰岛素外还应用四类口服降血糖药。简述如下 上表清楚地表明目前可用于治疗糖尿病的每种药物都有一定的缺陷。因此人们一直有兴趣鉴定和研制用于治疗糖尿病的新药。苦瓜是一种果实可作为蔬菜的热带植物。一些研究小组已经报道了苦瓜在哺乳动物模型(Shibib等，生物化学杂志，292，267-270(1993)；Ali等，植物医学，59408-412(1993)；Akhtar等，植物医学，42205-212(1981))和人体(Leatherdale等，英国医学杂志，2821823-1824(1981)；Aslam等，Lancet，I.607(1979))中的降血糖活性。但是其中的降血糖成分及作用机理还不清楚。从苦瓜中分离出一种具有类胰岛素活性的11kDal肽的报道见于Khanna等，“植物来源的多肤P的降血糖活性”，美国药学会第20届年会，Purdue University，West Lafayette，1979年7月29日-8月3日；Baldwa等，Upsala J.Med.Sci.(1977)8239-41和美国专利第3945988号。在所有这些报道中，这种类胰岛素多肽都不是口服给药，即是静脉注射或皮下注射。最近的一篇报道指出，苦瓜的乙醇粗提取物能够通过刺激肝脏中的糖原合成而部分地降低血浆中葡萄糖水平，而不象是作为刺激胰岛素分泌的药物(Sarkar等，药学研究(Pharmacol.Res.)，33，1-4(1996))。专利技术概述提供了一种苦瓜的水溶性组分(MC6)和它的制备方法及在治疗高血糖症中的用途。MC6的特征是在SDS-PAGE凝胶电泳上以单一条带形式泳动，分子量小于10kDal，小于重组胰岛素。它含三种肽，无高分子量蛋白质污染。同时提供的还有MC6的一种特定肽成分，标为MC6.1，还提供了MC6.1的肽衍生物MC6.2和MC6.3，它们的长度小于MC6.1，表现出降血糖活性，可以口服给药来治疗多种高血糖症。附图简述附图说明图1A显示了苦瓜的各种水溶性成分在SDS-20％-PAGE凝胶电泳中的结果；图1B显示纯化过的MC6制备物；图1C显示了MC6的HPLC分析结果。图2A图示了未纯化的苦瓜含水提取物和对照组在一段时间内对SD大鼠血糖水平的作用；图2B图示了口服给药的MC6在一段时间内对SD大鼠血糖水平的作用。图3A-B图示了MC6对SZC诱导患糖尿病的大鼠血糖水平的作用。图4图示了口服给药的MC6不使血清中胰岛素的水平升高。图5图示了口服给药的MC6与静脉注射的重组胰岛素有着相同的降血糖效果。图6(a)-(b)显示了MC6.1在4-20％tris-甘氨酸梯度凝胶上的SDS-PAGE分析结果(分别用考马斯亮兰和银染染色)。图7图示了用C18 RP-HPLC柱纯化MC6.1的结果。图8(a)-(b)显示了MC6.1的等电点分析结果。图9显示了MC6.1的核磁共振分析结果。图10图示了MC6.1对血糖水平的作用。图11图示了MC6.1、MC6.2和MC6.3在正常大鼠口服葡萄糖耐受实验中的降血糖活性。图12图示了MC6.2对糖尿病大鼠的降血糖作用。图13图示了MC6.2对非肥胖型糖尿病大鼠的降血糖作用。具体实施方案的详述本专利技术提供了苦瓜的一种水溶性成分MC6，MC6的一种活性肽成分MC6.1以及MC6.1的肽衍生物MC6.2和MC.3，它们的制备方法及在治疗高血糖症中的用途。MC6的特征是它含三种肽，在SDS-PAGE凝胶电泳上以单一条带形式一起泳动，分子量10kDal，比重组胰岛素小。MC6和MC6.1表现出降血糖活性并且具有口服活性。在对本专利技术后面的叙述中，将对MC6和MC6.1的特性，以及它的制备方法及在治疗高血糖症中的用途，尤其是在治疗人糖尿病患者中的用途作具体描述。MC6.2和MC6.3分别是MC.1这种18氨基酸肽的11氨基酸和7氨基酸肽衍生物。在进一步叙述本专利技术之前，应当说明，本专利技术并不仅限于下面叙述的实施特例，因为实施特例可以有一些变化但仍然在下面所附的权利要求范围内。还需要说明的是在此用到的术语只是为了描述实施特例，并非为了限制。所以本专利技术的范围以所附的权利要求书为准。应当说明的是在本实施特例和权利要求书中，除非上下文清楚指明，单数形式“一个(种)”，“这个(种)”均有其复数对应形式。除非指明，所有的科学和技术术语都具有本专利技术所属领域普通技术人员的理解相同的含义。本专利技术中的MC6是植物品种苦瓜中的一种水溶性成分或提取物。尽管MC6可以从苦瓜的一种或多种组织或组成中得到，包括叶、茎、根、果实、种子及其它组织，甚至整株苦瓜，但MC6通常从苦瓜果实、尤其是已与种子分离的未成熟果实中得到。MC6的特征是在SDS-20％PAGE凝胶电泳上呈单一条带，该单一条带分子量小于10kDal(SDS-20％PAGE凝胶的电场强度100V)。MC6比重组胰岛素小，因此应小于约6kDal。MC6的进一步特征在于，经过C8或C18进行反相高效液相色谱(HPLC)柱层析，MC6洗脱为三个峰。在此条件下，第一峰在11.33分钟时流出，第二峰在25.35分钟时流出，第三峰在34.67分钟时流出。本专利技术中的MC6是不包含高分子量污染物(如蛋白质)的制剂，在本申请中高分子量污染物指分子量大于约50kDal的分子。通常MC6中不包含分子量大于10kDal的任何污染物。MC6对哺乳动物有降血糖活性。降血糖活性是指哺乳动物经MC6处理后血糖的水平下降，并且血糖水平下降的量与处理哺乳动物的MC6的量成比例。口服给药和静脉内给药均有降血糖的活性，也就是本文档来自技高网...

【技术保护点】
水溶性组分ＭＣ６。

【技术特征摘要】
US 1997-4-1 08/831,039;US 1997-5-2 08/850,8551.水溶性组分MC6。2.按照权利要求1的组分，其特征在于在SDS-20％-PAGE凝胶电泳中迁移为单一条带。3.按照权利要求2的组分，其中所说的单一条带分子量小于10kDal，并且比重组胰岛素更小。4.按照权利要求1的组分，其中包括三种肽。5.按照权利要求1的组分，其有降血糖活性，且口服给药具有活性。6.水溶性组分MC6，其特征在于在SDS-20％-PAGE凝胶电泳中迁移为分子量小于10kDal的单一条带，其中包括三种肽，有降血糖活性，口服给药有活性。7.包含存在于生理学上可接受载体内的MC6的药物组合物。8.按照权利要求7的药物组合物，其中所说的生理学上可接受载体是一种能口服的载体。9.按照权利要求8的药物组合物，其中所说的能口服的载体包括去离子水或磷酸盐缓冲液。10.降低宿主血糖水平的方法，所述方法包括给该宿主施用MC6。11.按照权利要求10的方法，其中所说的MC6存在于生理学上可接受载体内。12.按照权利要求10的方法，其中所说的施用是口服或者静脉内注射给药。13.按照权利要求10的方法，其中所说的宿主患有高血糖疾病。14.按照权利要求13的方法，其中所说的高血糖疾病是糖尿病。15.按照权利要求14的方法，其中所说的糖尿病是I型糖尿病。16.按照权利要求14的方法，其中所说的糖尿病是II型糖尿病。17.降低患有高血糖疾病的哺乳动物宿主内血糖水平...

【专利技术属性】
技术研发人员：B纳格，S麦迪彻拉，SD沙玛，
申请(专利权)人：卡里克斯治疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]