本发明专利技术公开了属于受溢油污染海水的生物降解处理技术领域的一种从海水中驯化与筛选石油烃降解菌群的方法。向加入原油、基础培养基、微量金属液、维生素c溶液的开口玻璃瓶内加入海水进行石油烃降解菌群的富集与驯化10～12个月，然后向加入原油、基础培养基、微量金属液和维生素c溶液的锥形瓶内接入富集驯化的海水样品。在温度为10～15℃、转速为100r/min的振荡器中培养6～8天后，进行循环转接，在循环次数大于6次后即可得到高效去除溢油污染海水中石油烃的降解菌群。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于受溢油污染海水的生物降解处理
，特别涉及一种。
技术介绍
近年来，随着世界各国对石油及其制品日渐增长的需求，在海上开采、装卸、运输以及利用石油过程中溢油事故时有发生，不但造成大量的原油流失，还对环境造成严重污染，日趋严重地威胁着海洋及陆域的生态环境，对海洋环境、自然资源和养殖资源等都有长期的危害，因此，海洋溢油污染已经成为人们必须面对的重大环境问题。在海洋溢油处理技术中，生物修复技术具有高效、经济、安全、无二次污染等特点，已成为现场去除海洋溢油污染的重要选择途径，特别是对机械装置无法清除的薄油层，同时又限制使用化学药剂时，运用生物修复可显出其更大的优越性。若在海洋溢油处理修复工程中使用内源微生物进行降解，由于内源微生物生长速度慢及活性低而修复的效率不高，因此，需要接种一些降解石油烃污染物的高效菌，即通过向海洋溢油环境中加入大量的可存活的并能表现降解活性的石油烃降解菌，以提高海洋中石油污染物的降解速率和程度。然而由于缺少高效的可应用于海洋溢油处理的石油烃降解菌，制约了海洋溢油生物修复技术的进一步发展和应用。因此，需要从海水中驯化与筛选出降解速率较快的土著微生物菌群，然后再把它们应用于实际海洋溢油污染环境的生物治理，这对于治理和修复海洋溢油污染有重要的意义。但是常规驯化与筛选微生物菌群的技术无法适用于对海洋溢油污染环境处理的石油烃微生物群的驯化与筛选。而且驯化的环境条件，驯化周期，及驯化的过程参数选定等都对驯化出菌群的降解效能有密切的关系，这些都需要经过一系列的试验研究后才能确定出最佳范围。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种。其具体步骤如下(1)选取海水样品2000mL，放置于4°C冰箱中保存备用；(2)向体积为IOOOmL的开口玻璃瓶中加入4. 5 5. Og原油，加入7mL正己烷溶解后均勻平铺于玻璃瓶瓶底，为除去正己烷将玻璃瓶开口放置3天；(3)向步骤O)的开口玻璃瓶中加入500 600mL基础培养基、5. OmL微量金属液和0.5mL维生素c溶液；然后加入步骤(1)中的海水样品50mL;然后置于温度为10 15°C的环境中在转速为lOOr/min的条件下搅拌富集驯化培养10 12个月，为维持玻璃瓶内液体总量不变，每隔一周补充步骤(1)中海水样品；其中基础培养基的组成为=NH4NO3 2. Og .IANaCl 10. 5g/L, KH2PO4 :2. 5g .171 ,FeCl3 :0. IOg .171 ,MgSO4 :3. 5g ·Γ1，CaCl2 ·2Η20 0. 15g · L—1 ；微量金属液的组成为=CoCl2 · 6H20 :45mg · Λ CuCl2 :0. 25mg · Λ H3BO3 6. 5mg · ΙΛ MnCl2 · 4H20 :35mg · Λ Na2MoO4 · 2H20 :3. 5mg · Λ NiCl2 · 2H20 :2. 5mg · Λ ZnCl2 :3. 5mg · L-1 ；(4)向体积为100 200mL的锥形瓶中加入0. 5g原油，加入2mL正己烷溶解后均勻平铺于锥形瓶瓶底，为除去正己烷将玻璃瓶开口放置2天；(5)按水与有机大孔吸附剂DlOl的质量比为5 1的比例用去离子水将吸附剂清洗5次，然后按乙醇与吸附剂的质量比为3 1的比例用99%的乙醇将吸附剂清洗3次，为彻底除去吸附剂中的乙醇将清洗后的吸附剂在温度为60°C的烘箱中放置2天；(6)向步骤中的锥形瓶中入50mL基础培养基、0. 5mL微量金属液和0. ImL维生素c溶液；(7)向步骤(6)中的锥形瓶内加入步骤(5)处理后的吸附剂0. 50g，将其密封后放置在转速为lOOr/min的振荡器中平衡2天；(8)向步骤(7)中的锥形瓶内接入步骤(3)驯化结束后的水样lmL，然后置于温度为10 15°C转速为lOOr/min的振荡器中培养6 8天，每天打开瓶口一次以恢复锥形瓶内的溶解氧；按接种体积比为50 1的比例转入另一按步骤(4)至(7)处理后的锥形瓶内，当转接次数大于6之后即可获得高效去除溢油污染海水中石油烃的降解菌群。本专利技术的有益效果是所述的方法能够富集与驯化筛选到高效去除溢油污染海水中石油烃的降解菌群。具体实施例方式本专利技术提供一种。向加入原油、基础培养基、微量金属液、维生素c溶液的开口玻璃瓶内加入海水样品进行石油烃降解菌群的富集与驯化10 12个月，然后向加入原油、基础培养基、微量金属液和维生素c溶液的锥形瓶内接入富集驯化的海水样品。在温度为10 15°C、转速为lOOr/min的振荡器中培养 6 8天后，进行循环转接，在循环次数大于6次后即可得到高效去除溢油污染海水中石油烃的降解菌群。下面是以运用驯化的石油烃的降解菌群进行了溢油污染海水中石油烃的降解试验，进一步说明本专利技术。实施例运用本专利技术方法驯化与筛选得到的石油烃降解菌群进行了溢油污染海水中石油烃的降解试验，结果表明该菌群能够对石油烃进行有效的降解当石油烃的初始浓度为 6. 9g/L时，6天后能降解到2. lg/L，对石油烃的降解率可达到69. 56%。权利要求1. 一种，其特征在于，该方法的具体步骤如下(1)选取海水样品2000mL，放置于4°C冰箱中保存备用；(2)向体积为IOOOmL的开口玻璃瓶中加入4.5 5. Og原油，加入7mL正己烷溶解后均勻平铺于玻璃瓶瓶底，为除去正己烷将玻璃瓶开口放置3天；(3)向步骤⑵的开口玻璃瓶中加入500 600mL基础培养基、5.OmL微量金属液和 0.5mL维生素c溶液；然后加入步骤(1)中的海水样品50mL;然后置于温度为10 15°C 的环境中在转速为lOOr/min的条件下搅拌富集驯化培养10 12个月，为维持玻璃瓶内液体总量不变，每隔一周补充步骤⑴中海水样品；其中基础培养基的组成为=NH4NO3: 2. Og .IANaCl 10. 5g/L, KH2PO4 :2. 5g .171 ,FeCl3 :0. IOg .171 ,MgSO4 :3. 5g ·Γ1，CaCl2 ·2Η20 0. 15g · L—1 ；微量金属液的组成为=CoCl2 · 6H20 :45mg · Λ CuCl2 :0. 25mg · Λ H3BO3 6. 5mg · ΙΛ MnCl2 · 4H20 :35mg · Λ Na2MoO4 · 2H20 :3. 5mg · Λ NiCl2 · 2H20 :2. 5mg · Λ ZnCl2 :3. 5mg · L-1 ；(4)向体积为100 200mL的锥形瓶中加入0.5g原油，加入2mL正己烷溶解后均勻平铺于锥形瓶瓶底，为除去正己烷将玻璃瓶开口放置2天；(5)按水与有机大孔吸附剂DlOl的质量比为5 1的比例用去离子水将吸附剂清洗5 次，然后按乙醇与吸附剂的质量比为3 1的比例用99%的乙醇将吸附剂清洗3次，为彻底除去吸附剂中的乙醇将清洗后的吸附剂在温度为60°C的烘箱中放置2天；(6)向步骤中的锥形瓶中入50mL基础培养基、0.5mL微量金属液和0.ImL维生素 c溶液；(7)向步骤(6)中的锥形瓶内加入步骤( 处理后的吸附剂0.50g，将其密封后放置在转速为lOOr/min的振荡器中平衡2天；(8)向步骤本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种从海水中驯化与筛选石油烃降解菌群的方法，其特征在于，该方法的具体步骤如下：（１）选取海水样品２０００ｍＬ，放置于４℃冰箱中保存备用；（２）向体积为１０００ｍＬ的开口玻璃瓶中加入４．５～５．０ｇ原油，加入７ｍＬ正己烷溶解后均匀平铺于玻璃瓶瓶底，为除去正己烷将玻璃瓶开口放置３天；（３）向步骤（２）的开口玻璃瓶中加入５００～６００ｍＬ基础培养基、５．０ｍＬ微量金属液和０．５ｍＬ维生素ｃ溶液；然后加入步骤（１）中的海水样品５０ｍＬ；然后置于温度为１０～１５℃的环境中在转速为１００ｒ／ｍｉｎ的条件下搅拌富集驯化培养１０～１２个月，为维持玻璃瓶内液体总量不变，每隔一周补充步骤（１）中海水样品；其中基础培养基的组成为：ＮＨ４ＮＯ３：２．０ｇ·Ｌ－１，ＮａＣｌ：１０．５ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４：２．５ｇ·Ｌ－１，ＦｅＣｌ３：０．１０ｇ·Ｌ－１，ＭｇＳＯ４：３．５ｇ·Ｌ－１，ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ：０．１５ｇ·Ｌ－１；微量金属液的组成为：ＣｏＣｌ２·６Ｈ２Ｏ：４５ｍｇ·Ｌ－１，ＣｕＣｌ２：０．２５ｍｇ·Ｌ－１，Ｈ３ＢＯ３：６．５ｍｇ·Ｌ－１，ＭｎＣｌ２·４Ｈ２Ｏ：３５ｍｇ·Ｌ－１，Ｎａ２ＭｏＯ４·２Ｈ２Ｏ：３．５ｍｇ·Ｌ－１，ＮｉＣｌ２·２Ｈ２Ｏ：２．５ｍｇ·Ｌ－１，ＺｎＣｌ２：３．５ｍｇ·Ｌ－１；（４）向体积为１００～２００ｍＬ的锥形瓶中加入０．５ｇ原油，加入２ｍＬ正己烷溶解后均匀平铺于锥形瓶瓶底，为除去正己烷将玻璃瓶开口放置２天；（５）按水与有机大孔吸附剂Ｄ１０１的质量比为５∶１的比例用去离子水将吸附剂清洗５次，然后按乙醇与吸附剂的质量比为３∶１的比例用９９％的乙醇将吸附剂清洗３次，为彻底除去吸附剂中的乙醇将清洗后的吸附剂在温度为６０℃的烘箱中放置２天；（６）向步骤（４）中的锥形瓶中入５０ｍＬ基础培养基、０．５ｍＬ微量金属液和０．１ｍＬ维生素ｃ溶液；（７）向步骤（６）中的锥形瓶内加入步骤（５）处理后的吸附剂０．５０ｇ，将其密封后放置在转速为１００ｒ／ｍｉｎ的振荡器中平衡２天；（８）向步骤（７）中的锥形瓶内接入步骤（３）驯化结束后的水样１ｍＬ，然后置于温度为１０～１５℃转速为１００ｒ／ｍｉｎ的振荡器中培养６～８天，每天打开瓶口一次以恢复锥形瓶内的溶解氧；按接种体积比为５０∶１的比例转入另一按步骤（４）至（７）处理后的锥形瓶内，当转接次数大于６之后即可获得高效去除溢油污染海水中石油烃的降解菌群。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：豆俊峰，马梦娇，程莉蓉，丁爱中，郑蕾，李帅冉，王鸿婷，范福强，
申请(专利权)人：北京师范大学，
类型：发明
国别省市：11
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