本发明专利技术提供了十七个与大鼠坐骨神经离断过程相关的miRNA序列、其前体序列和反义寡核苷酸序列，以及其在制备治疗周围神经损伤药物中的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学专业领域，涉及属于大鼠源miRNA的十七个新miRNA、miRNA 前体和其反义寡核苷酸序列，以及在制备治疗神经再生药物中的用途。
技术介绍
周围神经损伤是常见的临床病症，而周围神经损伤后能够再生。miRNACmicroRNA, 微RNA)是一类具有19 25nt的RNA分子，由其前体分子在酶的作用下加工生成，其前体序列一般为70 120nt，广泛存在于生物体中。由于miRNA在各种生物体中具有保守性， 因此普遍认为miRNA的功能是参与生命的一些基本过程；在动物机体，miRNA通过转录后调控许多基因和蛋白的表达，在发育、分化、增殖、细胞的存活与癌变以及神经系统等发挥重要作用。基础和临床研究表明，miRNA无论在正常生理过程还是在疾病过程中都是重要的调节因子。许多miRNA呈现组织特异性表达，因此在调控组织特异性和组织特异性基因的功能中发挥重大作用。近年来的研究发现miRNA与神经再生有着极为密切的关系，例如， miRNA在轴突生长及突触功能和可塑性等方面具有调控作用。虽然已经在各种生物发现了相当数量的miRNA，但仍不断有许多新的miRNA被挖掘，特别是那些在特定组织或特定阶段表达的miRNA。周围神经损伤和再生过程中，许多基因和蛋白的表达水平发生改变，而单个miRNA能够调控成千上百个靶基因的表达，因此作为转录后调控的miRNA的发现和功能鉴定对基于miRNA的周围神经损伤的修复具有十分重要的意义。
技术实现思路
由于各种意外造成的神经损伤的发病率逐年增加；而神经损伤后，再生能力差，致残率高，因此本专利技术针对神经损伤和治疗的生物分子的发现具有重要的应用价值。本专利技术以大鼠坐骨神经离断后的L4-6背根神经节和近端神经为材料进行miRNA 的Solexa测序。测序结果经过SOAP软件与大鼠基因组序列比对，MIREAP软件分析miRNA 前体的发夹结构，滤掉自由能大于-20 kcal/mol的候选miRNA，基于miRBaSel7.0过滤掉已报道的miRNA，MiPred软件进一步过滤掉功能上非保守的虚拟的miRNA前体等生物信息学分析，并进一步通过RT-PCR验证。然后对这些新的miRNA进行功能筛选，结果发现了十七个与增殖和迁移有关的miRNA。本专利技术所提供的miRNA克隆自大鼠坐骨神经离断后的L4-6 背根神经节和近端神经，成熟miRNA序列长度约为22nt，其前体序列具有miRNA前体典型的二级结构，符合miRNA的结构特征。本专利技术的目的是提供十七个新的miRNA、miRNA前体和其反义寡核苷酸序列，以及该专利技术所涉及的miRNA、miRNA前体和其反义寡核苷酸在制备神经损伤药物中的用途。本专利技术的具体技术方案如下本专利技术所提供的十七个大鼠源miRNA包含如下任一种序列(l)miRNA-sxl 5' AACAG⑶GAUCUUCAAGUAGA ，染色体定位 xq215(2)miRNA-sx2(3)miRNA-sx3(4)miRNA-sx4(5)miRNA-sx5(6)miRNA-sx6(7)miRNA-sx7(8)miRNA-sx8(9)miRNA-sx9(10)miRNA-sxlO(11)miRNA-sxll(12)miRNA-sxl2(13)miRNA-sxl3(14)miRNA-sxl4(15)miRNA-sxl5(16)miRNA-sxl6(17)miRNA-sxl75' UGGGGGACAGGGCAAGGUGG ,染色体定位 lql2 5' UGUGGGUAGAAUGACAGAGCAGA ，染色体定位 19p 11 5' AUGUAAGUGUGUAUGUAUAUG，染色体定位 17ql2. 3 5' UAGGCUAGAAAGAGGUUGGGGA，染色体定位 lql2 5' UGAGGAUUACGAAGAGGAUGGU，染色体定位 5q35 5' GGUGGUGCAGGCAGGAGAGC，染色体定位lq325 ‘ ACCCGUCCCGUUCGUCCCCGGA,染色体定位 6ql 1 5' GGAGUUGGAGGUGAUCGUGAGC，染色体定位 10q24 5 ‘ UGGGGCACUCAGGAGGCUGCAG,染色体定位 1 lq23 5 ‘ UUGGGAGGAGCAGCUGAGGGA,染色体定位 2q34 5' UUGUGGCAACAAUGGCACGGCA，染色体定位 3q35 5' CAGGGUUACCUGUUGAGCUGC，染色体定位 3q35 5' CACAGCGGAGCUGGGCACUGGCGU，染色体定位 5q36 5' AUGGUAAUGGUGGUGGUGAUGG，染色体定位 8q24 5' AAUGUGACUCAGCUAUCUGAAC，染色体定位 8q24 5' UGGGGGCAGGCCGGAUCUA⑶G，染色体定位 xq21。 据此，本专利技术所提供的十七个大鼠源miRNA的前体RNA包含如下序列(1)miRNA-sxl前体5 ‘ CAAUUCUGAAAACAG⑶GAUCUUCAAGUAGAAAAAACACAAAAAAGG CA ⑶ UUUCUAUUUGAA ⑶ CAUCUCUUCUCCCUUUAA(2)miRNA-sx2前体5 ‘ GAGGCCA⑶UUGGGGGACAGGGCAAGGUGGGCAGUAGCUGACAGCCU GUUUACACUUGCCCUUUUUUCCCCAGGCUAUA⑶UCGGUU⑶GGCAGA(3)miRNA-sx3前体5 ‘ CGGAAUUCACUGUGGGUAGAAUGACAGAGCAGACAGGAGACUAGAGAGU CUGCUUUGCCAUCUCUCUUGCAGGCAUGUGCCU(4)miRNA-sx4前体5 ‘ AUGUGUGUAUAUGUAAGUGUGUAUGUAUAUGUGUUUAUAUGAAUAUAC AUAUACAUACUCACGCACACAUACACGCAA(5)miRNA-sx5前体5 ‘ AUCGAUCCCCAUCCCAGCUUCCUUCCAGCCCUUGAU⑶UUCAGUAUG CACAUAGGCUAGAAAGAG⑶UGGGGAUGGGGAAAGA(6)miRNA-sx6前体5 ‘ UAAAACGGA⑶GAGGAUUACGAAGAGGAUGGUGUGGCUUUAAUAUUAG AACUUUACAGCAUCCUCUUCAUAAUCUUUACUCC⑶UUUAC(7)miRNA-sx7前体5 ‘ G⑶GGGGCUGG⑶GGUGCAGGCAGGAGAGCCAUUGAUCUAUUGC GGGCUCUACUCCCUGCCCCAGCCAGAGCACCCC(8)miRNA-sx8前体5 ‘ CGCCGGGCGCACCC⑶CCCGUUCGUCCCCGGAC⑶UGCUCUCUG CCCCGGGAACGUCGAGACUGGAGCGCCCGAACUG(9)miRNA-sx9前体5 ‘ AGC⑶GAGCUGGA⑶UGGAG⑶GAUC⑶GAGC⑶GAAGACUGU GGUUGCCACAAGCACUUCCAACUGCAGAGCCACGCUC(10)miRNA-sxlO前体5 ‘ G⑶GGCCGA⑶GGGGCACUCAGGAGGCU本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．十七个大鼠源ｍｉＲＮＡ，其特征在于包含如下任一个ｍｉＲＮＡ序列：（１）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１ ５′ＡＡＣＡＧＧＵＧＡＵＣＵＵＣＡＡＧＵＡＧＡ ，染色体定位ｘｑ２１（２）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ２ ５′ＵＧＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＡＧＧＵＧＧ，染色体定位１ｑ１２（３）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ３ ５′ＵＧＵＧＧＧＵＡＧＡＡＵＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＡ ，染色体定位１９ｐ１１（４）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ４ ５′ＡＵＧＵＡＡＧＵＧＵＧＵＡＵＧＵＡＵＡＵＧ，染色体定位１７ｑ１２．３（５）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ５ ５′ＵＡＧＧＣＵＡＧＡＡＡＧＡＧＧＵＵＧＧＧＧＡ，染色体定位 １ｑ１２（６）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ６ ５′ＵＧＡＧＧＡＵＵＡＣＧＡＡＧＡＧＧＡＵＧＧＵ，染色体定位 ５ｑ３５（７）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ７ ５′ＧＧＵＧＧＵＧＣＡＧＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣ，染色体定位 １ｑ３２（８）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ８ ５′ＡＣＣＣＧＵＣＣＣＧＵＵＣＧＵＣＣＣＣＧＧＡ，染色体定位６ｑ１１（９）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ９５′ＧＧＡＧＵＵＧＧＡＧＧＵＧＡＵＣＧＵＧＡＧＣ，染色体定位 １０ｑ２４（１０）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１０ ５′ＵＧＧＧＧＣＡＣＵＣＡＧＧＡＧＧＣＵＧＣＡＧ，染色体定位１１ｑ２３（１１）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１１ ５′ＵＵＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＣＵＧＡＧＧＧＡ，染色体定位２ｑ３４（１２）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１２ ５′ＵＵＧＵＧＧＣＡＡＣＡＡＵＧＧＣＡＣＧＧＣＡ，染色体定位 ３ｑ３５（１３）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１３ ５′ＣＡＧＧＧＵＵＡＣＣＵＧＵＵＧＡＧＣＵＧＣ，染色体定位 ３ｑ３５（１４）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１４ ５′ＣＡＣＡＧＣＧＧＡＧＣＵＧＧＧＣＡＣＵＧＧＣＧＵ，染色体定位 ５ｑ３６（１５）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１５ ５′ＡＵＧＧＵＡＡＵＧＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＧＧ，染色体定位 ８ｑ２４（１６）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１６ ５′ＡＡＵＧＵＧＡＣＵＣＡＧＣＵＡＵＣＵＧＡＡＣ，染色体定位 ８ｑ２４（１７）ｍｉＲＮＡ－ｓｘ１７ ５′ＵＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＣＧＧＡＵＣＵＡＧＵＧ，染色体定位 ｘｑ２１。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王勇军，李石营，顾晓松，丁斐，于彬，顾芸，周松林，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：32
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