一种改造的sacB基因及其衍生的整合型载体制造技术

本发明专利技术公开了改造的sacB基因及其衍生的整合型载体，属于基因工程技术领域。本发明专利技术提供的整合型载体含有一个人工合成的强启动子PlacM启动的能在棒状杆菌中良好转录表达并具有条件致死功能的基因sacB；一个用于棒状杆菌转化子选择的抗性标记卡那霉素标记抗性基因；还含有一个多克隆位点MCS。SacB处于强启动子PlacM和优化的SD下，表达更加良好；此外，由于sacB自身的启动子、sacR和SD序列均被去除，应用时几乎不会出现蔗糖抗性、抗生素抗性的菌落，大大减少应用中不必要的麻烦。该载体能在大肠杆菌中复制并稳定存在而不能在棒状杆菌中复制，适用于棒状杆菌染色体基因敲除和替代。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种改造的基因及依托其构建的整合型载体，特别是一种改造的sacB 基因及其衍生的整合型载体。
技术介绍
随着棒状杆菌生理学，生物化学和遗传学知识的大量累积，基于理性设计的代谢工程育种在氨基酸高产菌株选育中的地位越来越重要。基因敲除和替代技术是棒状杆菌代谢工程育种研究中主要分子生物学技术之一。基因敲除和替代技术是自80年代未以来发展起来的一种分子生物学技术，通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失或被其他替代的。一般是利用微生物体内的同源重组系统，在一定选择压力下使体外改造的DNA片段与受体细胞染色体上的功能基因之间发生同源重组，从而改变细胞的遗传特性。利用基因敲除技术可阻断细胞的代谢旁路，或通过引入突变位点来调节代谢流，优化代谢途径，最终达到微生物育种的目的。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) sacB基因编码的果聚糖蔗糖酶，是枯草芽孢杆菌的一种外分泌酶，它受蔗糖诱导表达，能将蔗糖分解成葡萄糖和果糖，还可进一步将果糖聚合成果聚糖。在培养基中存在蔗糖的条件下，细胞内果聚糖蔗糖酶的表达对革兰氏阴性菌有致死作用(Gay, P.，Le Coq, D, Stei本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种改造的ｓａｃＢ基因，其核苷酸序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王小元，谭延振，徐大庆，李烨，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32