气单胞菌及在(R)-α-羟基苯乙酸生物转化中的应用，涉及(R)-α-羟基苯乙酸。提供一种豚鼠气单胞菌Aeromonas?caviaeB18及其在(R)-α-羟基苯乙酸生物转化中的应用。豚鼠气单胞菌Aeromonas?caviaeB18是以苯乙酮酸为底物，经初筛、诱变及分离纯化获得，该菌株能选择性转化(R)-α-羟基苯乙酸。将豚鼠气单胞菌接入转化培养基中，加底物苯乙酮酸，催化底物苯乙酮酸中羰基的不对称还原，然后从发酵液中分离纯化反应产物(R)-α-羟基苯乙酸。利用提供的菌株转化(R)-α-羟基苯乙酸专一性强、产率高、工艺操作简单、成本低廉、目标产物容易分离。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及00-α-羟基苯乙酸，尤其是涉及一种豚鼠气单胞菌Aeromonas caviae B18及其在(R) - α -羟基苯乙酸生物不对称转化中的应用。
技术介绍
(R)-Ci-羟基苯乙酸是一种重要的药物中间体，广泛地应用于多种药物的合成，如青霉素、头孢菌素、抗肥胖药物、抗肿瘤制剂、光学纯的氨基酸、辅酶Α、血管紧张肽转化酶抑制剂等，还可以用来制成手性拆分试剂。目前，国际市场上光学活性的α-羟基苯乙酸需求量约以年均10%以上的速度增长，已成为重要的药物与精细化工中间体。辛梅华(辛梅华，分析化学，2001,29 (8) :990)报道了色谱柱直接拆分制备α -羟基苯乙酸的方法，该方法具有简便、快速、产品纯度高等优点，但需采用手性分离介质，并且处理量小、成本高，仅限于检测及实验室制备。Tanaka K (Tanaka K,. J Chem Research, 2002 (9) :446-447)利用手性拆分剂麻黄碱、二-甲基节胺、辛可宁以及苯甘氨酸丁酯等与α -羟基苯乙酸的两种对映体形成非对映体盐类增加物理性质差异，然后结晶分离。但该法不仅存在产率低、手性拆分剂价格昂贵等缺点，而且拆分后的S对映体无法利用，对环境将造成较大的污染。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种豚鼠气单胞菌Aeromonas caviaeB18。本专利技术的另一目的是提供豚鼠气单胞菌Aeromonas caviaeBW在(R) - α -羟基苯乙酸生物转化中的应用。所述豚鼠气单胞菌Aeromonas caviaeB18已于2010年11月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该中心的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院 3号，中国科学院微生物研究所，该中心登记入册编号为CGMCC No. 4382。所述豚鼠气单胞菌Aeromonas caviaeB18是以苯乙酮酸为底物，经初筛、诱变及分离纯化获得，该菌株能选择性转化(R) - α -羟基苯乙酸。所述豚鼠气单胞菌Aeromonas caviaeB18的16SrRNA的序列如下所示cgcctgcagtcgagcggcagcgggaaagtagcttgctacttttgccggcgagcggcggac60gggtgagtaatgcctgggaaattgcccagtcgagggggataacagttggaaacgactgct120aataccgcatacgccctacgggggaaagcaggggaccttcgggccttgcgcgattggata180tgcccaggtgggattagctagttggtgaggtaatggctcaccaaggcgacgatccctagc240tggtctgagaggatgatcagccacactggaactgagacacggtccagactcctacgggag300gcagcagtggggaatattgcacaatgggggaaaccctgatgcagccatgcCgCgtgtgtg360aagaaggccttcgggttgtaaagcactttcagcgaggaggaaaggtcagtagctaatatc420tgctgactgtgacgttactcgcagaagaagcaccggctaactccgtgccagcagccgcgg480taatacggagggtgcaagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcgcacgcaggcggtt540ggataagttagatgtgaaagccccgggctcaacctgggaattgcatttaaaactgtccag600ctagagtcttgtagaggggggtagaattccaggtgtagcggtgaaatgcgtagagatctg660gaggaataccggtggcgaaggcggccccctggacaaagactgacgctcaggtgcgaaagc720gtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgtcgatttgg780aggctgtgtccttgagacgtggcttccggagctaacgcgttaaatcgaccgcctggggag840tacggccgcaaggttaaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcat900gtggtttaattcgatgcaacgcgaagaaccttacctggccttgacatgtctggaatcctg960tagagatacgggagtgccttcgggaatcagaacacaggtgctgcatggctgtcgtcagct1020cgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccctgtcctttgttgcca1080gcacgtaatggtgggaactcaagggagactgccggtgataaaccggaggaaggtggggat1140gacgtcaagtcatcatggcccttacggccagggctacacacgtgctacaatggcgcgtac1200agagggctgcaagctagcgatagtgagcga3- C C CQ-Q-Q-Q-Q-gcgcgtcgtagtccggattg1260gagtctgcaactcgactccatgaagtcggaatcgctagtaatcgcaaatcagaatgttgc1320ggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagtgggttgcac1380cagaagtagatagcttaaccttcggagggcgtact1415所述豚鼠气单胞菌Aeromonas caviaeBW在制备(R) - α -羟基苯乙酸中的应用。所述制备(R)-α-羟基苯乙酸的方法为将豚鼠气单胞菌Aeromonas caviaeB18 接入转化培养基中，加入底物苯乙酮酸，催化底物苯乙酮酸中羰基的不对称还原，然后从发酵液中分离纯化反应产物(R)-Q-羟基苯乙酸；所述底物苯乙酮酸的浓度可为5 165mmolο所述转化培养基为淀粉12. 81g，酪蛋白胨 12. 74g，KH2PO4 2. 97g，K2HPO4 1. 2g， MgSO4O. 15g, CaCl2 0. 125g, MnSO4 0. 015g, ZnSO4 0. Olg，定容至 1L，ρΗ7· 2 ；所述转化培养基中，细胞浓度湿重可为75 100g/L。所述豚鼠气单胞菌Aeromonas caviaeB18的接种量可按体积比4%的接种量转接至转化培养基；所述不对称还原的条件可为将转化培养基于30 36°C，最好为32°C，摇床转速200r/min的条件下，反应时间为19h，转化培养基pH7. 2，离心除去菌体，得(R) - α -羟基苯乙酸发酵液，调节PH为1.0，乙酸乙酯萃取，经微波真空干燥得(R)-a-羟基苯乙酸； 所述微波真空干燥的条件可为微波功率5kW，干燥温度为45°C，真空度为-0. 08MPa，干燥时间为Ih。本专利技术的显著优点是本专利技术所用的发酵工艺，不仅能获得高纯度的(R)-Ci-羟基苯乙酸，而且生产成本比现有本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．豚鼠气单胞菌Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅＢ１８，其特征在于所述豚鼠气单胞菌Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅＢ１８已于２０１０年１１月３０日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该中心的地址为北京市朝阳区北辰西路１号院３号，中国科学院微生物研究所，该中心登记入册编号为ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．４３８２；所述豚鼠气单胞菌Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅＢ１８的１６Ｓ ｒＲＮＡ的序列如下所示：ｃｇｃｃｔｇｃａｇｔ ｃｇａｇｃｇｇｃａｇ ｃｇｇｇａａａｇｔａ ｇｃｔｔｇｃｔａｃｔ ｔｔｔｇｃｃｇｇｃｇ ａｇｃｇｇｃｇｇａｃ ６０ｇｇｇｔｇａｇｔａａ ｔｇｃｃｔｇｇｇａａ ａｔｔｇｃｃｃａｇｔ ｃｇａｇｇｇｇｇａｔ ａａｃａｇｔｔｇｇａ ａａｃｇａｃｔｇｃｔ １２０ａａｔａｃｃｇｃａｔ ａｃｇｃｃｃｔａｃｇ ｇｇｇｇａａａｇｃａ ｇｇｇｇａｃｃｔｔｃ ｇｇｇｃｃｔｔｇｃｇ ｃｇａｔｔｇｇａｔａ １８０ｔｇｃｃｃａｇｇｔｇ ｇｇａｔｔａｇｃｔａ ｇｔｔｇｇｔｇａｇｇ ｔａａｔｇｇｃｔｃａ ｃｃａａｇｇｃｇａｃ ｇａｔｃｃｃｔａｇｃ ２４０ｔｇｇｔｃｔｇａｇａ ｇｇａｔｇａｔｃａｇ ｃｃａｃａｃｔｇｇａ ａｃｔｇａｇａｃａｃ ｇｇｔｃｃａｇａｃｔ ｃｃｔａｃｇｇｇａｇ ３００ｇｃａｇｃａｇｔｇｇ ｇｇａａｔａｔｔｇｃ ａｃａａｔｇｇｇｇｇ ａａａｃｃｃｔｇａｔ ｇｃａｇｃｃａｔｇｃ ｃｇｃｇｔｇｔｇｔｇ ３６０ａａｇａａｇｇｃｃｔ ｔｃｇｇｇｔｔｇｔａ ａａｇｃａｃｔｔｔｃ ａｇｃｇａｇｇａｇｇ ａａａｇｇｔｃａｇｔ ａｇｃｔａａｔａｔｃ ４２０ｔｇｃｔｇａｃｔｇｔ ｇａｃｇｔｔａｃｔｃ ｇｃａｇａａｇａａｇ ｃａｃｃｇｇｃｔａａ ｃｔｃｃｇｔｇｃｃａ ｇｃａｇｃｃｇｃｇｇ ４８０ｔａａｔａｃｇｇａｇ ｇｇｔｇｃａａｇｃｇ ｔｔａａｔｃｇｇａａ ｔｔａｃｔｇｇｇｃｇ ｔａａａｇｃｇｃａｃ ｇｃａｇｇｃｇｇｔｔ ５４０ｇｇａｔａａｇｔｔａ ｇａｔｇｔｇａａａｇ ｃｃｃｃｇｇｇｃｔｃ ａａｃｃｔｇｇｇａａ ｔｔｇｃａｔｔｔａａ ａａｃｔｇｔｃｃａｇ ６００ｃｔａｇａｇｔｃｔｔ ｇｔａｇａｇｇｇｇｇ ｇｔａｇａａｔｔｃｃ ａｇｇｔｇｔａｇｃｇ ｇｔｇａａａｔｇｃｇ ｔａｇａｇａｔｃｔｇ ６６０ｇａｇｇａａｔａｃｃ ｇｇｔｇｇｃｇａａｇ ｇｃｇｇｃｃｃｃｃｔ ｇｇａｃａａａｇａｃ ｔｇａｃｇｃｔｃａｇ ｇｔｇｃｇａａａｇｃ ７２０ｇｔｇｇｇｇａｇｃａ ａａｃａｇｇａｔｔａ ｇａｔａｃｃｃｔｇｇ ｔａｇｔｃｃａｃｇｃ ｃｇｔａａａｃｇａｔ ｇｔｃｇａｔｔｔｇｇ ７８０ａｇｇｃｔｇｔｇｔｃ ｃｔｔｇａｇａｃｇｔ ｇｇｃｔｔｃｃｇｇａ ｇｃｔａａｃｇｃｇｔ ｔａａａｔｃｇａｃｃ ｇｃｃｔｇｇｇｇａｇ ８４０ｔａｃｇｇｃｃｇｃａ ａｇｇｔｔａａａａｃ ｔｃａａａｔｇａａｔ ｔｇａｃｇｇｇｇｇｃ ｃｃｇｃａｃａａｇｃ ｇｇｔｇｇａｇｃａｔ ９００ｇｔｇｇｔｔｔａａｔ ｔｃｇａｔｇｃａａｃ ｇｃｇａａｇａａｃｃ ｔｔａｃｃｔｇｇｃｃ ｔｔｇａｃａｔｇｔｃ ｔｇｇａａｔｃｃｔｇ ９６０ｔａｇａｇａｔａｃｇ ｇｇａｇｔｇｃｃｔｔ ｃｇｇｇａａｔｃａｇ ａａｃａｃａｇｇｔｇ ｃｔｇｃａｔｇｇｃｔ ｇｔｃｇｔｃａｇｃｔ １０２０ｃｇｔｇｔｃｇｔｇａ ｇａｔｇｔｔｇｇｇｔ ｔａａｇｔｃｃｃｇｃ ａａｃｇａｇｃｇｃａ ａｃｃｃｃｔｇｔｃｃ ｔｔｔｇｔｔｇｃｃａ １０８０ｇｃａｃｇｔａａｔｇ ｇｔｇｇｇａａｃｔｃ ａａｇｇｇａｇａｃｔ ｇｃｃｇｇｔｇａｔａ ａａｃｃｇｇａｇｇａ ａｇｇｔｇｇｇｇａｔ １１４０ｇａｃｇｔｃａａｇｔ ｃａｔｃａｔｇｇｃｃ ｃｔｔａｃｇｇｃｃａ ｇｇｇｃｔａｃａｃａ ｃｇｔｇｃｔａｃａａ ｔｇｇｃｇｃｇｔａｃ １２００ａｇａｇｇｇｃｔｇｃ ａａｇｃｔａｇｃｇａ ｔａｇｔｇａｇｃｇａ ａｔｃｃｃａａａａａ ｇｃｇｃｇｔｃｇｔａ ｇｔｃｃｇｇａｔｔｇ １２６０ｇａｇｔｃｔｇｃａａ ｃｔｃｇａｃｔｃｃａ ｔｇａａｇｔｃｇｇａ ａｔｃｇｃｔａｇｔａ ａｔｃｇｃａａａｔｃ ａｇａａｔｇｔｔｇｃ １３２０ｇｇｔｇａａｔａｃｇｔｔｃｃｃｇｇｇｃｃ ｔｔｇｔａｃａｃａｃ ｃｇｃｃｃｇｔｃａｃ ａｃｃａｔｇｇｇａｇ ｔｇｇｇｔｔｇｃａｃ １３８０ｃａｇａａｇｔａｇａ ｔａｇｃｔｔａａｃｃ ｔｔｃｇｇａｇｇｇｃ ｇｔａｃｔ１４１５。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李忠琴，关瑞章，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：92
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。