高效分泌表达AcAPc2的中国仓鼠卵巢基因工程细胞株制造技术

高效分泌表达AcAPc2的中国仓鼠卵巢基因工程细胞株，涉及一种高效分泌表达AcAPc2的CHO细胞株。本发明专利技术是要解决目前用CHO表达外源基因产物的表达量低，且无法满足工业化生产的问题。高效分泌表达AcAPc2的中国仓鼠卵巢基因工程细胞株，利用二氢叶酸还原酶缺陷型中华仓鼠卵巢细胞作为宿主细胞，经筛选、扩增后得到稳定、高效表达AcAPc2的细胞株。本发明专利技术的CHO细胞株可以高效表达AcAPc2，表达量最高达到10mg/L·72h，且可以工业化生产。用于抗凝血，治疗肿瘤、败血症等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种高效分泌表达AcAPc2的CHO细胞株。
技术介绍
犬钩虫吸血时，其头腺分泌一种具有抗凝血活性的物质，被称作犬钩虫抗凝血肽 (anticoagulant ρ印tide，AcAPs)。该物质本质是一种蛋白水解酶，具有延长血浆凝血酶原时间(Pt)、抑制血液凝固以及促进纤维蛋白溶解的作用。AcAPs目前已有AcAP5、AcAP6、 AcAPc2三种重组蛋白。AcAPc2 (10KD)是fci因子的高效特异抑制剂。据报道)(a抑制剂的抗血栓效果优越于凝血酶抑制剂，AcAPs作为因子的高效特异抑制剂对血小板聚集功能影响甚小，用于抗血栓治疗时引发出血的危险性小。1998年，Donnelly等报道AcAI^s在体内还具有抗肿瘤细胞转移的作用。AcAPs的抗凝血、抗血栓作用，有可能成为临床上一种新的抗凝剂、抗血栓和抗肿瘤治疗药物。目前用CHO表达AcAPc2的最高表达量是6mg/L，且无法满足工业化生产。
技术实现思路
本专利技术是要解决目前用CHO表达外源基因产物的表达量低，且无法满足工业化生产的问题，提供高效分泌表达AcAPc2的中国仓鼠卵巢基因工程细胞株。本专利技术高效分泌本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．高效分泌表达ＡｃＡＰｃ２的中国仓鼠卵巢基因工程细胞株，其特征在于利用二氢叶酸还原酶缺陷型中华仓鼠卵巢细胞作为宿主细胞，经筛选、扩增后得到稳定、高效表达ＡｃＡＰｃ２的细胞株，具体方法按以下步骤进行：一、目的片段双酶切：由上海生工公司合成带有信号肽的ＡｃＡＰｃ２基因序列克隆到Ｔ载体上，将Ｔ载体用ＢａｍＨＩ和ＮｏｔＩ进行双酶切，反应体系如下：酶切反应条件为３７℃放置３小时，然后将酶切产物用１．５％琼脂糖凝胶电泳，目的片段用ＤＮＡ　ＧＥＬ　ＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮ　ＫＩＴ纯化回收，得到插入片段；二、质粒载体双酶切：用ＢａｍＨＩ和ＮｏｔＩ双酶切消化质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５－Ｈｉｓ－Ｃ，反应体系如下...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余琼，马龙彪，丁海燕，张巍，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93