本发明专利技术属于医药技术领域，具体为一种疏水药物-白蛋白-葡聚糖纳米乳液及其制备方法和应用。本发明专利技术的纳米乳液中乳滴的结构是以包含疏水药物的油相为内核，白蛋白为油水界面膜，葡聚糖位于油滴外部以保持油滴在水相中的稳定性。制备方法包括利用Maillard反应制备白蛋白-葡聚糖共价复合物，将白蛋白-葡聚糖复合物溶解在水溶液中，将疏水药物溶解或者分散在大豆油中；将两种溶液混合，通过高压均质方法制得水包油纳米乳液；再加热制得的水包油纳米乳液，形成稳定的白蛋白油水界面膜，从而得到稳定的载药纳米乳液。本发明专利技术纳米乳液中蛋白质油-水界面膜稳定，乳滴不易聚集，因而能满足注射制剂要求，可以作为疏水药物注射制剂予以应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体涉及一种水包油型纳米乳液及其制备方法，以及该乳液在制备疏水药物注射制剂中应用。
技术介绍
大多数抗肿瘤药物在水中的溶解性很小。例如紫杉醇几乎不溶于水，目前临床常用的紫杉醇制剂是用聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor)制成的紫杉醇制剂。虽然聚氧乙烯蓖麻油对紫杉醇有良好的增溶作用，但会引起过敏反应以及在稀释后容易形成沉 淀(Constantinides，P. P.，et al.，Pharmaceutical Research, 2000. 17: p. 175-182.)。为了解决这些问题，很多学者制备了紫杉醇乳剂。如陈建明等人利用注射油和乳化剂(注射用大豆磷脂，卵磷脂，波洛沙姆188，或单油酸甘油酯中的一种或一种以上的混合物)等通过PH调节和高压均质方法制备了静脉注射用紫杉醇乳剂(中国专利号 200410068134. 3 ；200810100234. 8)。由美国生命科学(American Bioscience)公司开发的白蛋白结合紫杉醇纳米粒注射混悬液(ABRAXANE)，在转移性乳腺癌的临床治疗中有很好的疗效(Stinchcombe, Τ. E.，Nanomedicine, 2007. 2: p. 415-423.)。研究表明，白蛋白可利用细胞膜上的白蛋白受体Gp60及细胞膜穴样内凹(caveolae)，以及肿瘤组织中富含的半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)的作用，促使药物进入肿瘤细胞内，增加化疗作用 (Hawkins, Μ. J. , et al. , Advanced Drug Delivery Reviews, 2008. 60: p. 876-885·)。 目前，疏水药物-白蛋白体系已有很多报道(专利号US 2006121119, WO 9814174，US 2001046961)。在载药纳米粒子的表面修饰多糖，如茁霉多糖，壳聚糖，葡聚糖等可以增加纳米粒子在体内的循环时间，使得载药纳米粒子避免被巨噬细胞吞噬而成功地输送到靶向病灶(Liu, Ζ.G. , et al., Journal of Biomedical Materials Research Part A, 2007. 83A: p. 806-812. ； Couvreur, P. , et al. , European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2004. 58: p. 327-341. ； Labarre, D., et al. , Pharmaceutical Research, 1998. 15: p. 1046-1050.)。除此而外，在载药纳米粒子的表面修饰多糖还可以增加纳米粒子在水溶液中的稳定性。利用蛋白质-多糖接枝复合物制备乳液已经有很多研究。由于蛋白质具有两亲性质，在乳化过程中分布在油水界面，稳定水包油乳滴，位于乳滴外部的亲水多糖使得乳滴在水溶液中均勻分散。但是到目前为止，还没有一个蛋白质_多糖乳液体系能够满足注射制剂的要求。一个主要问题是多糖的接枝效率不高，在制备蛋白质-多糖复合物的反应中，多糖的质量必须大大高于蛋白质的质量才能使一定数目的多糖接枝到蛋白质表面，达到乳化以后稳定乳液的目的(专利号 WO 2006/090110 Al, K. K. Xu., et al.，Langmuir, 2009. 25: p. 9714-9720.)。因此，所报道的蛋白质-多糖复合物乳液中自由多糖含量很高，只适合于食品工业的应用(McClements, D. J. et al.，Advances in Colloid and Interface Science, 2010. 159: p. 213-228.)，不适合于疏水药物注射制剂的应用。另一个主要问题是所形成的蛋白质油-水界面膜不稳定，乳滴会发生融合，尺寸逐渐增加，从而导致乳液分层和油水分离。还有一个主要问题是乳滴的粒径过大，不能通过滤膜除菌，而加热除菌会导致乳滴聚集，因此不能满足注射制剂的要求
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蛋白质油-水界面膜稳定，乳滴不易聚集，因而能满足注射制剂要求的水包油型纳米乳液及其制备方法，以及该乳液在制备疏水药物注射制剂中应用。本专利技术提供的水包油型纳米乳液，是一种疏水药物-白蛋白-葡聚糖纳米乳液。该纳米乳液中乳滴的结构是以包含疏水药物的油相为内核，白蛋白为油水界面膜，葡聚糖位于油滴外部以保持油滴在水相中的稳定性。本专利技术中，所述的白蛋白是人血清白蛋白、牛血清白蛋白或其他动物血清白蛋白。本专利技术中，所述的葡聚糖的分子量在2000-70000之间。本专利技术中，所述的药物是可以溶解在油相中的疏水药物。包括紫杉醇、阿霉素、喜树碱等等，但不限于这些。本专利技术提供的水包油型纳米乳液(疏水药物-白蛋白-多糖纳米乳液)的制备方法，是利用Maillard反应制备白蛋白-葡聚糖共价复合物；再将白蛋白-葡聚糖复合物溶解在水溶液中，将疏水药物溶解或者分散在大豆油中；将上述制备的水性溶液和油性溶液混合，通过高压均质方法制得水包油纳米乳液；再加热制得的水包油纳米乳液，形成稳定的白蛋白油水界面膜，从而得到稳定的载药纳米乳液。其中，制备条件是(1)白蛋白与葡聚糖的质量比在1:0.4到1:2之间，通过Maillard反应制备白蛋白-葡聚糖共价接枝复合物；(2)白蛋白-葡聚糖复合物溶解在水中，其中白蛋白浓度为1-50mg/ml，调节溶液pH 在3. 0-8. 0区间；(3)将疏水药物溶解于大豆油中，浓度为1-500mg/ml ；(4)混合白蛋白-葡聚糖复合物水溶液和疏水药物油溶液，油溶液与水溶液的体积比在1: 2到1:15之间；(5)通过高压均质制备纳米乳液，其中高压均质的压力大于500bar，高压均质时间大于2分钟；(6)加热制得的水包油纳米乳液，温度在80°C以上，加热时间至少30分钟。本专利技术中，所述Mai Ilard反应制备白蛋白-葡聚糖共价复合物，具体可参见中国专利:200710040028ο本专利技术中，所述高压均质是高效制备纳米乳液的方法，可参见Donsi，F., et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2010. 58: p. 10653-10660.。在高压下所产生的强烈剪切，撞击和空穴作用，使液态物质得到超细微化。两亲性的白蛋白在高压均质的过程中发生二硫键交换、氢键重排及疏水相互作用使得白蛋白在乳滴表面形成油水界面膜，从而将油滴固定并同时实现了疏水药物的高效负载。连接在白蛋白上的葡聚糖由于其亲水性而在乳滴表面伸展，避免乳滴聚集。加热可以使蛋白质变性，形成分子间疏水聚集和二硫键交联。对蛋白质乳液进行加热，位于油水界面的蛋白质会进一步发生分子间相互作用，从而形成高度交联的蛋白质膜，达到乳液长期稳定和将疏水药物固定在油相中的目的。加热还可以达到灭菌的目的。通过 动态光散射分析，可以得到纳米乳液的粒径和多分散系数。本专利技术的载药纳米乳液的粒径为200 nm左右。乳液可以通过450 nm滤膜达到除菌的目的。透射电镜实验表明(附图1)乳滴的粒径较为均一。电位分析(附图2)表明多糖位于乳滴的表面。本专利技术制备本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种疏水药物－白蛋白－葡聚糖纳米乳液，其特征在于该纳米乳液中乳滴的结构是以包含疏水药物的油相为内核，白蛋白为油水界面膜，葡聚糖位于油滴外部以保持油滴在水相中的稳定性。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姚萍，戚佳宁，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31
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