一种萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，该方法是将灵芝子实体干燥、粉碎后，放置于萃取釜中，再加入乙醇，进行超临界CO2萃取；收得萃取物，减压浓缩蒸干。该方法能提高提取物中的有效成分含量，增强其活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食用菌有效成分提取领域，具体地说涉及一种萃取具有抗肿瘤活性的灵芝子实体三萜类化合物的方法。
技术介绍
mXGanodenm是一种保健价值极高的大型担子菌，素有“仙草”之誉， 是中医药学宝库中的珍品，在我国已有悠久的应用历史。东汉时期(约2000年前)的《神农本草经》已把灵芝列为上品药物，主养命以应天，无毒，多服、久服不伤人。可“补五脏之气”、 “安神”、“增智慧”、“久食轻身不老，延年神仙”。《中华人民共和国药典》2000版，2005版， 均收载灵芝，作为法定中药材。灵芝化学成分复杂，主要有多糖类，三萜类，呋喃类，生物碱， 氨基酸多肽类和呋喃衍生物等成分。其中三萜类化合物是灵芝中公认的抗肿瘤的有效成分。在高度竞争的现代社会中，过度紧张的工作、生活方式的改变或环境污染都会对人体健康造成严重损害，癌症也成为了困扰人类的主要疾病之一，因此三萜类化合物有巨大的应用价值。但是由于三萜类化合物在天然产物中含量很低而且不易分离，给三萜的深入研究和临床应用带来很大的限制。醇提法是工业上从灵芝子实体中提取三萜类成分的常用方法，方法简单，易于操作，但其有提取时间长、提取次数多，浪费有机溶剂并有残留等诸多缺点。CO2超临界萃取技术安全、无毒，流程简单，耗时短，提取效率高，能避免被萃取物在高温下的热裂解、能最大限度的保护生理活性物质的活性，并且(X)2流体只对溶质起作用，不改变溶质之外的任何成分或原料机体，用纯(X)2提取后的料渣还能得到很好的综合利用，因此不会产生任何新的“三废”物质，对环境保护极为有利，是当今世界上能够用于规模生产的先进分离萃取技术。中国专利200510047263. 9公开了(X)2超临界萃取在提取灵芝子实体中三萜类物质上的应用，但是只提及了压力、温度和时间对提取效率的影响，并没有对影响提取率的各个因素以及提取物的活性作一个全面的公开。
技术实现思路
本专利技术公开了，本专利技术采用的技术方案为以超临界CO2为萃取介质，以乙醇为夹带剂，一定的压力、温度、时间下，实现对三萜类化合物的提取。本专利技术公开的，具体的技术方案为 ，包括如下步骤(1)将灵芝子实体干燥，粉碎到粒度为10 80目；(2)将粉碎后的灵芝子实体放置于萃取釜中，再加入乙醇，乙醇的体积与灵芝子实体重量的比例为3 6:1 (乙醇的体积为毫升，灵芝子实体的重量为克)，进行超临界CO2萃取；(3)收得萃取物，减压浓缩蒸干得到产品。其中乙醇是作为夹带剂，所述的乙醇浓度为30 100% ；所述的(X)2的纯度为 99. 9%ο其中所述的萃取压力为20 35 Mpa，萃取温度为40 55°C，萃取时间为1 2. 5h, CO2 流量为 30 45 g/min。其中优选的萃取压力35 Mpa，温度40°C，时间为2. 5h，CO2流量为35g/min。 优选的乙醇浓度为85 95% ；优选的(X)2的纯度为99. 99%。进一步优选的乙醇浓度为95%。优选的灵芝子实体的粒度为10目。其中所述的减压浓缩蒸干的温度为50°C 60°C。优选的为60°C。使用本专利技术的方法，CO2超临界萃取灵芝子实体的萃取率可达0.87%，提取物中总三萜的含量可达40%。CO2超临界萃取的萃取率稍低于乙醇的提取率，但是CO2超临界萃取的萃取物中三萜的种类比乙醇萃取物中多，并且其萃取物对肿瘤细胞K562的抑制作用要高于乙醇萃取物。CO2超临界萃取安全、无毒，流程简单，耗时短，效率高，具有良好的应用前景和经济效益，因此，适合于放大到规模化生产。具体实施例方式下面结合实例对本专利技术做进一步详细的说明。实施例1将灵芝子实体粉碎后分别过10目、60目、80目筛，分别取IOOg置于CO2超临界萃取的萃取釜中，设定萃取压力为25Mpa、温度为45°C、0)2流量为30g/min、萃取时间1.证、夹带剂(95%乙醇)500mL,使(X)2超临界流体在上述的条件下进行萃取，当达到实验设定的时间后，从分离釜的出料口收集萃取液，60°C减压回收溶剂，得灵芝子实体粗提物，60°C烘箱中干燥后称定提取物的重量，结果如表1所示。本专利技术萃取物中三萜类成分的含量测定精密称取(X)2超临界萃取干物质0. 03g于25mL的量瓶中，加乙醇溶解、定容，摇勻，即得待测液。对照品溶液的制备取齐敦果酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成lmg/lml的溶液，即得。标准曲线的制备精密量取对照品溶液0. 02ml、0. (Mml、0. 06 ml ,0.08 ml, 0. 1ml，置IOml具塞试管中，加乙醇至0. 1ml，加5%香草醛冰醋酸溶液0. ^iil，高氯酸0.5 ml，混勻后于60°C水浴中保温20分钟，取出后立即冷却至室温，加冰醋酸5 ml，摇勻；以相应的的溶液为空白。照紫外一可见分光光度法，在^Onm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。线性方程为Y=0. 0141Χ+0. 0774，R2=O. 09989，结果表明齐敦果酸在0. 18 17. 2 μδ呈现良好的线性关系。含量测定法精密量取待测溶液0. 1ml，置IOml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入5%香草醛冰醋酸溶液0. 2ml ”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含灵芝三萜的量，计算，即得。结果如表1所示，从数据中可以看出粒度为10 目的子实体萃取效果更好。表1萃取物的重量、萃取物中总三萜的含量以及提取率权利要求1.，其特征在于包括如下步骤将灵芝子实体干燥，粉碎到粒度为10 80目；将粉碎后的灵芝子实体放置于萃取釜中，再加入乙醇，乙醇的体积与灵芝子实体重量的比例为3 6:1，进行超临界CO2萃取；收得萃取物，减压浓缩蒸干得到产品。2.根据权利要求1所述的萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，其特征在于所述的乙醇浓度为30 100% ；所述的(X)2的纯度为99 100%。3.根据权利要求1或2所述的萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，其特征在于所述的萃取压力为20 35 Mpa,萃取温度为40 55°C，萃取时间为1 2. 5h，CO2流量为30 45 g/min。4.根据权利要求3所述的萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，其特征在于所述的萃取压力35 Mpa，温度40°C，时间为2. 5h，CO2流量为35g/min。5.根据权利要求3所述的萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，其特征在于所述的乙醇浓度为85 95% ；所述的(X)2的纯度为99. 99%。6.根据权利要求3所述的萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，其特征在于所述的乙醇浓度为95%。7.根据权利要求3所述的萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，其特征在于所述的灵芝子实体的粒度为10目。8.根据权利要求1所述的萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，其特征在于所述的减压浓缩蒸干的温度为50°C 60°C。全文摘要本专利技术公开了，该方法是将灵芝子实体干燥、粉碎后，放置于萃取釜中，再加入乙醇，进行超临界CO2萃取；收得萃取物，减压浓缩蒸干。该方法能提高提取物中的有效成分含量，增强其活性。文档编号A61K36/074GK102293789SQ201110261149公开日2011年12月28日 申请日期2011年9月6日 优先权日2011年9月6日发本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种萃取灵芝子实体三萜类化合物的方法，其特征在于包括如下步骤：将灵芝子实体干燥，粉碎到粒度为１０～８０目；将粉碎后的灵芝子实体放置于萃取釜中，再加入乙醇，乙醇的体积与灵芝子实体重量的比例为３～６：１，进行超临界ＣＯ２萃取；收得萃取物，减压浓缩蒸干得到产品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张劲松，章慧，骆军鑫，唐传红，贾薇，杨焱，刘艳芳，唐庆九，冯娜，周帅，汪雯翰，吴迪，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：31