本发明专利技术公开了一种ZnSe量子点标记牛血清蛋白荧光探针的制备方法，其步骤：A、制备KH4Se溶液：通过硼氢化钾还原硒粉制备；B、分别称取硼氢化钾和硒粉于具塞试管中，向其中加入高纯水，塞上塞子，得无色透明液体，为硒氢化钾；C、称取醋酸锌晶体和还原型谷胱甘肽，溶解于无氧高纯水中；D、在搅拌和不断通入高纯氩气的条件下，加入硒氢化钾，用氢氧化钠溶液调节pH值，待其混合；E、分装于聚四氟乙烯消解罐中，加热，KH4Se、Zn(Ac)2·2H2O，还原型谷胱甘肽的摩尔比率；F、取ZnSe量子点，牛血清蛋白，加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐于恒温振荡，得量子点标记牛血清蛋白荧光探针。工艺简单，易控制；具有很好的生物相容性和检测性能，能很好地进行荧光检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及量子点的生物应用
，更具体涉及一种量子点标记牛血清蛋白荧光探针的制备方法，该探针可用于检测污染物、毒物及与蛋白质的作用效应。
技术介绍
有机相合成的量子点不具备亲水性，因此不能直接应用于生物体系，必须对其进行表面修饰，其操作过程复杂，条件要求高。水相合成法制备的量子点能够直接用于生物探针， 对其研究愈来愈受到重视，有关这方面的研究进展很快。但由于水相合成的量子点所选用的配体多为简单的巯基化合物，表面的活性基团比较少且表面积很小，难以与目标物质结合，因此水相量子点的直接应用存在局限性。因此，将量子点与生物大分子结合既增大了量子点的表面积，又增加了量子点表面活性基团，克服了水相量子点的应用局限性。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了一种量子点标记牛血清蛋白荧光探针的制备方法， 方法易行，操作方便，快速简单，工艺参数易控制。该探针水溶性和生物相容性好，检测功能应用广泛，性价比高，牛血清蛋白(BSA)很好的修饰了量子点表面，使其具有更高的荧光强度。为了实现上述的目的，本专利技术采用以下技术措施其技术构思是一种量子点标记牛血清蛋白荧光探针，它包括量子点(自制，请见A E步骤)、牛血清蛋白(Bovine Serum Albumin简称BSA，> 99%武汉天源生物技术有限公司)、乙基碳二亚胺盐酸盐(l-Ethyl-3-(3-dimethylam inopropyl)-carbodiimide hydroehloide 简称EDC，99% 上海共价化学)；2-巯基乙醇(化学纯，中国医药集团上海化学试剂公司)；其余为Tris缓冲溶液。所述的量子点中，醋酸锌(Si(Ac)2 · 2H20，上海美兴化工有限公司)、硒氢化钾(KH4Se,请见A，B步骤)、还原型谷胱甘肽(GSH，Japan)的摩尔比率分别为1: 1/15 1/10 1. 6 1. 8，95°C条件下加热 45 60min。所述的Tris缓冲溶液pH值为6. 8-7. 6。—种量子点标记牛血清蛋白荧光探针的制备方法，其步骤如下A、制备硒氢化钾(KHJe)溶液通过硼氢化钾(KBH4，天津市天大化学试剂厂)还原硒粉(Se，天津市科密欧化学试剂开发中心)制备，反应方程式如下4KBH4 + 2Se + 7H20 — 2KH4Se + K2B4O7 +IlH2 B、分别称取0.03006g硼氢化钾和0. 00789g硒粉于具塞试管中，向其中加入2mL高纯水，塞上塞子，于广5°C下反应0. 5 1.证，得无色透明液体，为0. 05mol/L的硒氢化钾；C、分别称取0.10975 0. 16463g醋酸锌晶体和0. 24586^0. 41489g还原型谷胱甘肽，溶解于200mL无氧高纯水中；D、在15(Γ300转/min的搅拌和不断通入高纯氩气的条件下，加入ImLO.05mol/L的硒氢化钾，用5mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为10-11，待其混合，得到一种混合液；E、将步骤D的混合液以每罐50ml分装于聚四氟乙烯消解罐中，于93-97°C下微波加热6(T75min，KH4Se, Zn(Ac)2 · 2H20，还原型谷胱甘肽的摩尔比率分别为1/15 1/10 1 1. 6 1. 8。F、取E步骤ImL制备好的浓度为1 mmol/L S^e量子点，Iml配制好的1 X 10_5mol/ L的牛血清蛋白溶液，再加入0. 2mL0. 24g/L的乙基碳二亚胺盐酸盐于40°C恒温振荡1-1. 5h,使量子点通过偶联剂乙基碳二亚胺盐酸盐与牛血清蛋白溶液进行充分反应，加入0. 3mL、0. lmol/L的2-巯基乙醇终止交联，制得量子点标记牛血清蛋白荧光探针。该探针将牛血清蛋白很好的修饰到了量子点表面，使量子点的荧光强度得到了很大的提高。所述的量子点如何制备的过程请见步骤A E。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果1.该探针主要原料大部分来源丰富，价格低廉，还原型谷胱甘肽虽然较贵，但其用量较少，不影响总体价格(0. 81953 1. 38296X 10_3g谷胱甘肽/ImL荧光探针)。2.该探针制备工艺快速简单(125min 150min)，工艺参数易控制(pH值为 6. 8 7. 6，温度为35 43°C )。3.该探针水溶性和生物相容性好(表面带有氨基羧基等亲水基团)，检测功能应用广泛(可检测无机重金属离子和部分有机化合物)，性价比高。4.该探针采用无毒或低毒原料制备(硒粉，谷胱甘肽，醋酸锌，牛血清蛋白)，可更好的应用于生物活体研究，且环境友好。具体实施例方式下面通过实施例，进一步阐明本专利技术的突出特点，仅在于说明本专利技术而决不限制本专利技术。实施例1 一种量子点标记牛血清蛋白荧光探针，它包括量子点(自制，请见A E步骤)、牛血清蛋白(Bovine Serum Albumin简称BSA，>99%武汉天源生物技术有限公司)、 乙基碳二亚胺盐酸盐(l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-car bodiimide hydroehloide简称EDC，99%上海共价化学)；2_巯基乙醇(化学纯，中国医药集团上海化学试剂公司)；其余为Tris缓冲溶液。所述的量子点中，醋酸锌(Si(Ac)2 · 2H20，上海美兴化工有限公司)、硒氢化钾(KH4Se,请见A，B步骤)、还原型谷胱甘肽(GSH，Japan)的摩尔比率分别为1: 1/15 1/10 1. 6 1. 8，95°C条件下加热 45 60min。所述的Tris缓冲溶液pH值为6. 8-7. 6。一种量子点标记牛血清蛋白荧光探针的制备方法，其步骤如下A、制备硒氢化钾(KHJe)溶液通过硼氢化钾(KBH4，天津市天大化学试剂厂)还原硒粉(Se，天津市科密欧化学试剂开发中心)制备，反应方程式如下4KBH4 + 2Se + 7H20 — 2KH4Se + K2B4O7 +IlH2 B、分别称取0.03006g硼氢化钾和0. 00789g硒粉于具塞试管中，向其中加入2mL高纯水，塞上塞子，于5或4或3或2或1 °C下反应0. 5或1或1. 5h,得无色透明液体，为0. 05mol/ L的硒氢化钾；C、分别称取0.10975 0. 16463g醋酸锌晶体和0. 24586^0. 41489g还原型谷胱甘肽，溶解于200mL无氧高纯水中；D、在15(Γ300转/min的搅拌和不断通入高纯氩气的条件下，加入ImLO.05mol/L的硒氢化钾，用5mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为10或10. 3或10. 5或10. 8或11，待其混合，得到一种混合液；E、将步骤D的混合液以每罐50ml分装于聚四氟乙烯消解罐中，于93或94或95或96 或97°C下微波加热60或64或68或71或75min，KH4SeJn (Ac) 2 · 2H20，还原型谷胱甘肽的摩尔比率分别为1/15 1/10 1 1. 6 1. 8。F、取步骤ElmL制备好的浓度为1 mmol/L ZnSe量子点，ImL配制好的1 X 10_5mol/ L的牛血清蛋白溶液，再加入0. 2mL0. Mg/L的乙基碳二亚胺盐酸盐于35或37或39或41或43°C恒温振荡80或85或90或95或IOOmin后，使本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种ＺｎＳｅ量子点标记牛血清蛋白荧光探针的制备方法，其步骤是：Ａ、制备硒氢化钾溶液：通过硼氢化钠还原碲粉制备，反应方程式如下： ４ＫＢＨ４ ＋ ２Ｓｅ ＋ ７Ｈ２Ｏ → ２ＫＨ４Ｓｅ ＋ Ｋ２Ｂ４Ｏ７ ＋１１Ｈ２↑Ｂ、 分别称取０．０３００６ｇ硼氢化钾和０．００７８９ｇ硒粉粉于具塞试管中，向其中加入２ｍＬ高纯水，塞上塞子，于１～５℃下反应０．５～１．５ｈ，得无色透明液体，为０．０５ｍｏｌ／Ｌ的硒氢化钾；Ｃ、分别称取０．１０９７５～０．１６４６３ｇ醋酸锌晶体和０．２４５８６～０．４１４８９ｇ还原型谷胱甘肽，溶解于２００ｍＬ无氧高纯水中；Ｄ、在１５０～３００转／ｍｉｎ的搅拌和不断通入高纯氩气的条件下，加入１ｍＬ０．０５ｍｏｌ／Ｌ的硒氢化钾，用５ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠溶液调节溶液ｐＨ值为１０－１１，待其混合；Ｅ、以每罐５０ｍＬ分装于聚四氟乙烯消解罐中，于９３－９７℃下微波加热６０～７５ｍｉｎ，ＫＨ４Ｓｅ、Ｚｎ（Ａｃ）２·２Ｈ２Ｏ，还原型谷胱甘肽的摩尔比率分别为 １／１５～１／１０：１：１．６～１．８；Ｆ、取１ｍＬ制备好的浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ ＺｎＳｅ量子点，１ｍＬ配制好的１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的牛血清蛋白溶液，再加入０．２ｍＬ０．２４ｇ／Ｌ的乙基［３－（二甲胺基）丙基］碳二亚胺盐酸盐于４０℃恒温振荡１－１．５ｈ，使ＺｎＳｅ量子点通过偶联剂乙基［３－（二甲胺基）丙基］碳二亚胺盐酸盐与牛血清蛋白溶液进行充分反应，加入０．３ｍＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌ的２－巯基乙醇终止交联，制得量子点标记牛血清蛋白荧光探针。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周培疆，陈驰，马蓉，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：83
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