测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法，该方法包括如下步骤：(1)待测样品溶液的制备；(2)标准品溶液的制备；(3)取待测样品溶液，步骤(2)制备的溶液用Waters反相C18色谱柱进行分离，二极管阵列检测器检测，得到相应色谱图，通过标准品溶液中各维生素的保留时间定性判定待测样品溶液中的各维生素；(4)通过色谱图中各维生素峰面积的比例关系，并根据各维生素标准品溶液的浓度分别获得待测样品溶液中所含各维生素的质量浓度；(5)根据浓度，通过公式计算待测样品溶液中维生素的含量：本方法测定简便、快速、准确，在对保健食品原料实施控制的同时缩短分析时间，降低有机试剂消耗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种测定保健食品复合维生素中维生素A、D、E的方法。
技术介绍
维生素是维持人和动物正常生理所必须的营养物质，人和动物对维生素的需求虽然不大，但作用却非常重要。由于人不能合成维生素，必须依赖食物来提供足够的维生素， 随着社会的发展，市场上出现了越来越多的含维生素的产品，并且越来越多的保健品中标明富含各种维生素，但是，某种含维生素的产品中究竟含有多少维生素，测定食品中维生素的方法显得很重要。近年来，随着社会的发展，含有复合维生素的产品越来越多，剂型有片剂或冲剂等，大多数食品中的维生素是以复合维生素的形式加入的，而复合维生素中维生素多以维生素微胶囊或微粒形式存在。维生素A、维生素D和维生素E是脂溶性维生素，它们较易在体内蓄积，当食用过量会导致中毒，因而需要对含有维生素的产品进行监测，这就需要一种对脂溶性维生素进行快速测定的方法，高效液相色谱法为维生素的测定提供了一种快速可靠的方法。但目前食品国家标准方法仅限于GB 5413. 9-2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定；GB/T 5009. 82-2003食品中维生素A和维生素E的测定；GB 14755-1993食品添加剂维生素D2的测定。而对于保健食品生产过程中最主要的原料复合维生素中维生素A、D、E测定的方法并没有明确的规定，通过实验发现，采用国标的方法检测复合维生素中的脂溶性维生素存在如下问题1.采用皂化提取法，全部实验过程费时，操作繁琐，整个实验过程试剂消耗量较大，检测周期较长，增加检测费用的同时也达不到快速检测的目的。2.皂化法通常适用于维生素含量不高的试样，可减少脂溶性物质的干扰，保健食品的生产过程中的最主要原料“复合维生素”中维生素A、D、E的含量很高，不宜用皂化法对复合维生素进行样品处理。采用皂化法对复合维生素样品进行处理，会导致复合维生素中的维生素A、D、E的严重损失，从而导致检测结果不能真实反映样品中维生素的含量，影响检测数据的准确性。3.重现性差，准确率低；4.试剂消耗量大。由于维生素A、D、E的极性不同，采用现有技术无法同时检测出维生素A、D、E，通常先采用反相色谱法分离出维生素A、E，经紫外检测器检测，采用内标法定量测定维生素A和维生素E，对于维生素D则另外采用正相色谱系统分离后再用反相色谱系统检测。这种检测方法的不足在于正相色谱柱寿命短、价格昂贵，且采用正相、反相两个色谱系统交替使用操作繁琐，同时加大了样品的损失量，降低了检测准确度。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的不足，提供一种重现性好，准确率高，试剂消耗量小的测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法。本专利技术的技术方案概述如下一种测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法，包括如下步骤(1)待测样品溶液的制备称取质量为m克的待测复合维生素样品于IOOml容量瓶中，加入氨水调节至PH值为7. 8 8. 5，加入300mg-500mg的胰蛋白酶，于65°C超声波水浴处理20-40min，静置冷却至室温，乙醇定容至刻度，摇勻过滤，滤除残渣，取V1Hil滤液于已装有50ml石油醚和5ml-10ml水的IOOml的容量瓶中，振荡容量瓶使滤液分层，静置IOmin ； 取V2ml石油醚提取液于40°C水浴中氮气吹干仪下氮吹浓缩后，用Iml甲醇溶解定容，得到待测样品溶液；(2)标准品溶液的制备维生素D2、维生素D3混合标准品溶液的制备①取维生素D2、维生素D3对照品各10mg，分别用甲醇溶解并定容至IOOml棕色容量瓶中；②取步骤①获得的维生素A溶液V微升、维生素D3溶液V微升，分别用无水乙醇稀释至10. OOmL,得到维生素D2的标准储备液和D3的标准储备液，分别用表1所述的条件用紫外分光光度计测定维生素A储备液和维生素D3储备液的的吸光值，用各自的比吸光系数 E按照公式(1)计算出维生素D2标准储备液和维生素D3标准储备液的浓度；所述的维生素 D2、维生素D3标准储备液的测定条件如表1所示表 权利要求1. 一种测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法，其特征是包括如下步骤(1)待测样品溶液的制备称取质量为m克的待测复合维生素样品于IOOml容量瓶中， 加入氨水调节至PH值为7. 8 8. 5，加入300mg-500mg的胰蛋白酶，于65°C超声波水浴处理20-40min，静置冷却至室温，乙醇定容至刻度，摇勻过滤，滤除残渣，取V1Hil滤液于已装有 50ml石油醚和5ml-10ml水的IOOml的容量瓶中，振荡容量瓶使滤液分层，静置IOmin ；取 V2Hil石油醚提取液于40°C水浴中氮气吹干仪下氮吹浓缩后，用Iml甲醇溶解定容，得到待测样品溶液；(2)标准品溶液的制备维生素D2、维生素D3混合标准品溶液的制备①取维生素D2、维生素D3对照品各10mg，分别用甲醇溶解并定容至IOOml棕色容量瓶中；②取步骤①获得的维生素&溶液V微升、维生素D3溶液V微升，分别用无水乙醇稀释至 10. OOmL,得到维生素A的标准储备液和D3的标准储备液，分别用表1所述的条件用紫外分光光度计测定维生素A储备液和维生素D3储备液的的吸光值，用各自的比吸光系数E按照公式(1)计算出维生素A标准储备液和维生素D3标准储备液的浓度；所述的维生素D2、维生素D3标准储备液的测定条件如表1所示 表1比吸光系数标准加入标准液的量波长1%λ /nmV/μ L^lm维生素D2100. 0485264维生素D3100. 0462264C- ^x1x1qqq ........................公式⑴式中C-维生素D2或维生素D3标准储备液的浓度，单位为微克每毫升(yg/mL)； A-维生素D2或维生素D3的紫外吸光值； V-加入标准储备液的量，单位为微升(yL)； E-维生素D2或维生素D3溶液1 %的比吸光系数； 10. 00-"为维生素A或维生素D3标准储备液稀释倍数；VXl(r9③取步骤②维生素D2、维生素D3的标准储备液各0. ImL,分别用甲醇稀释并定容至 IOml容量瓶中，得到浓度分别为Cl μ g/ml的维生素D2和C2 μ g/ml的维生素D3的标准品溶液，合并二标准品溶液，得到维生素D2、维生素D3混合标准品溶液； 维生素A标准品溶液的制备①取维生素A，对照品IOmg用脱醛乙醇溶解并定容至IOml棕色容量瓶中；②取步骤①维生素A溶液V微升，用乙醇稀释至10.00毫升，得到维生素A的标准储备液，用紫外分光光度计按照325nm测定维生素A标准储备液中的维生素A吸光值，并用维生素A的比吸光系数按照公式(2)计算出该维生素A标准储备液的浓度；2.根据权利要求1所述的一种测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法，其特征是，所述高效液相色谱仪的色谱条件为流动相为体积比为25 75 4的乙腈-甲醇-水，流速为l.OmL/min，柱温30°C，维生素D检测波长265nm，维生素A、维生素 E检测波长300nm，所述的色谱柱为Waters反相C18硅胶色谱柱。3.根据权利要求1所述的一种测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法，其特征在于，所述的高效液相色谱仪的色谱条件为流动相为甲醇-水体系，本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种测定复合维生素中维生素Ａ、维生素Ｄ和维生素Ｅ的方法，其特征是包括如下步骤：（１）待测样品溶液的制备：称取质量为ｍ克的待测复合维生素样品于１００ｍｌ容量瓶中，加入氨水调节至ｐＨ值为７．８～８．５，加入３００ｍｇ－５００ｍｇ的胰蛋白酶，于６５℃超声波水浴处理２０－４０ｍｉｎ，静置冷却至室温，乙醇定容至刻度，摇匀过滤，滤除残渣，取Ｖ１ｍｌ滤液于已装有５０ｍｌ石油醚和５ｍｌ－１０ｍｌ水的１００ｍｌ的容量瓶中，振荡容量瓶使滤液分层，静置１０ｍｉｎ；取Ｖ２ｍｌ石油醚提取液于４０℃水浴中氮气吹干仪下氮吹浓缩后，用１ｍｌ甲醇溶解定容，得到待测样品溶液；（２）标准品溶液的制备：维生素Ｄ２、维生素Ｄ３混合标准品溶液的制备：①取维生素Ｄ２、维生素Ｄ３对照品各１０ｍｇ，分别用甲醇溶解并定容至１００ｍｌ棕色容量瓶中；②取步骤①获得的维生素Ｄ２溶液Ｖ微升、维生素Ｄ３溶液Ｖ微升，分别用无水乙醇稀释至１０．００ｍＬ，得到维生素Ｄ２的标准储备液和Ｄ３的标准储备液，分别用表１所述的条件用紫外分光光度计测定维生素Ｄ２储备液和维生素Ｄ３储备液的的吸光值，用各自的比吸光系数Ｅ按照公式（１）计算出维生素Ｄ２标准储备液和维生素Ｄ３标准储备液的浓度；所述的维生素Ｄ２、维生素Ｄ３标准储备液的测定条件如表１所示：表１（ｍａｔｈ）??（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）Ｃ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＝（／ｍｏ）?（ｍｆｒａｃ）?（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）Ａ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｎ）１（／ｍｎ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｎ）１０．００（／ｍｎ）?（／ｍｒｏｗ）?（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）Ｅ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｎ）１００（／ｍｎ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｉ）Ｖ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｓｕｐ）?（ｍｎ）１０（／ｍｎ）?（ｍｒｏｗ）?（ｍｏ）－（／ｍｏ）?（ｍｎ）９（／ｍｎ）?（／ｍｒｏｗ）?（／ｍｓｕｐ）?（／ｍｒｏｗ）?（／ｍｆｒａｃ）?（／ｍｒｏｗ）?（／ｍａｔｈ）……………………公式（１）式中：Ｃ－维生素Ｄ２或维生素Ｄ３标准储备液的浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；Ａ－维生素Ｄ２或维生素Ｄ３的紫外吸光值；Ｖ－加入标准储备液的量，单位为微升（μＬ）；Ｅ－维生素Ｄ２或维生素Ｄ３溶液１％的比吸光系数；为维生素Ｄ２或维生素Ｄ３标准储备液稀释倍数；③取步骤②维生素Ｄ２、维生素Ｄ３的标准储备液各０．１ｍＬ，分别用甲醇稀释并定容至１０ｍｌ容量瓶中，得到浓度分别为Ｃ１μｇ／ｍｌ的维生素Ｄ２和Ｃ２μｇ／ｍｌ的维生素Ｄ３的标准品溶液，合并二标准品溶液，得到维生素Ｄ２、维生素Ｄ３混合标准品溶液；维生素Ａ标准品溶液的制备：①取维生素Ａ，对照品１０ｍｇ用脱醛乙醇溶解并定容至１０ｍｌ棕色容量瓶中；②取步骤①维生素Ａ溶液Ｖ微升，用乙醇稀释至１０．００毫升，得到维生素Ａ的标准储备液，用紫外分光光度计按照３２５ｎｍ测定维生素Ａ标准储备液中的维生素Ａ吸光值，并用维生素Ａ的比吸光系数按照公式（２）计算出该维生素Ａ标准储备液的浓度；（ｍａｔｈ）??（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）Ｃ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＝（／ｍｏ）?（ｍｆｒａｃ）?（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）Ａ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｎ）１（／ｍｎ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｎ）１０．００（／ｍｎ）?（／ｍｒｏｗ）?（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）Ｅ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｎ）１００（／ｍｎ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｉ）Ｖ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｓｕｐ）?（ｍｎ）１０（／ｍｎ）?（ｍｒｏｗ）?（ｍｏ）－（／ｍｏ）?（ｍｎ）６（／ｍｎ）?（／ｍｒｏｗ）?（／ｍｓｕｐ）?（／ｍｒｏｗ）?（／ｍｆｒａｃ）?（／ｍｒｏｗ）?（／ｍａｔｈ）…………………………公式（２）Ｃ－维生素Ａ标准储备液的浓度，单位为毫克每毫升（ｍｇ／ｍＬ）；Ａ－维生素Ａ的紫外吸光值；Ｖ－加入维生素Ａ标准储备液的量，单位为微升（μＬ）；Ｅ－维生素Ａ溶液１％比吸光系数；为维生素Ａ标准标准储备液稀释倍数；③取步骤②中维生素Ａ标准储备液０．１ｍＬ，用脱醛乙醇稀释并定容至１０ｍｌ容量瓶中，得到浓度为Ｃ３μｇ／ｍｌ的维生素Ａ标准品溶液；α－维生素Ｅ、γ－维生素Ｅ、δ－维生素Ｅ混合标准品溶液的制备：①取α－维生素Ｅ、γ－维生素Ｅ、δ－维生素Ｅ对照品各１０ｍｇ，分别用脱醛乙醇溶解并定容至１０ｍｌ容量瓶中；②分别取步骤①中α－维生素Ｅ、γ－维生素Ｅ、δ－维生素Ｅ溶液Ｖ微升，分别用乙醇稀释至１０．００毫升，分别得到α－维生素Ｅ、γ－维生素Ｅ、δ－维生素Ｅ的标准储备液，分别用表２所述的条件用紫外分光光度计测定各标准储备液的的吸光值，用各自的比吸光系数Ｅ按...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓娟，李星芝，袁海新，贾鑫，
申请(专利权)人：天津天狮生物发展有限公司，天津天狮生命源有限公司，天狮集团有限公司，
类型：发明
国别省市：12