一种可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法技术

一种可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，是将泽泻粉碎，浸提，过滤，浓缩，静置冷藏，分取清液，浓缩，得到泽泻粗提取液；依次用有机溶剂进行萃取，将正丁醇萃取部分合并，减压蒸馏浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。该泽泻提取物具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用，酶抑制率可达92.30％，加入到药物载体，制成颗粒剂、或胶囊剂、或片剂、或口服液、或注射剂；或者加入载体，按照常规方法制成保健饮料或保健食品。该发明专利技术简单易行，适于推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于α -葡萄糖苷酶抑制剂的制备

技术介绍
根据国际糖尿病联盟报告，目前全球糖尿病人已逾1亿，预测2025年将突破3亿，主体为2型糖尿病。糖尿病前期即葡萄糖调节受损(impaired glucose regulation, IGR), 期中包括空腹血糖受损(impaired fasting glucose, IFG)和葡萄糖耐量受损(impaired glucose tolerance, IGT)0对于IGT和2型糖尿病早期患者，均表现为餐后高血糖，而餐后 高血糖对机体的危害远远超过空腹高血糖。餐后高血糖不仅极易诱发大血管、微血管、周围 神经等组织的病变，引起各种并发症，而且其与冠心病和糖尿病的总死亡率之间的相关性 大于空腹高血糖，所以降低餐后血糖是预防2型糖尿病的发生，减少其并发症和降低死亡 率的重要措施之一。α -葡萄糖苷酶是一种能使不被吸收的复合碳水化合物分解成小肠可吸收的单糖 的酶，而α -葡萄糖苷酶活性抑制剂则通过抑制该酶作用以减少餐后血糖升高，主要代表 药物有阿卡波糖(Acarbose)和伏格列波糖(Voglibose)，前者是通过竞争性和可逆性抑制 小肠粘膜刷状缘α “葡萄糖苷酶，阻断淀粉及蔗糖的裂解，从而延长葡萄糖和果糖在消化 道的吸收速度，降低餐后血糖；后者为选择性双糖水解酶抑制剂，适当延缓糖的吸收，改善 餐后血糖，对肠道的麦芽糖酶和蔗糖酶抑制作用比葡萄糖苷酶抑制剂作用强。它们有腹部 不适、胀气、排气等不良反应。因此，另辟新径，寻找α-葡萄糖苷酶的安全有效的抑制剂， 对于治疗、预防非胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、高脂血症和高脂蛋白血症具有重要的临床 应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于以中药泽泻为原料，通过简单实用的工艺处理，得到可抑制 α -葡萄糖苷酶活性的提取物，利用该提取物再加入药物载体制备α -葡萄糖苷酶抑制剂 剂型。本专利技术的技术方案是采用浸提法从中药泽泻中提取得到粗提取物，再将泽泻粗提取物依次用石油醚、 醋酸乙酯、正丁醇萃取，分别获得石油醚部分、醋酸乙酯部分和正丁醇部分，正丁醇部分合 并，减压蒸馏浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。本专利技术技术方案是通过以下工艺步骤实现的(1)粉碎将干燥泽泻颗粒粉碎至5 80目；(2)粗提取用水或水溶性有机溶剂浸提泽泻，得到提取液，过滤，浓缩至小体积， 冷却，加乙醇于浓缩液中，静置冷藏，分取上层清液，下层料渣离心，所得清液与上层清液合 并，浓缩，得到泽泻粗提取液；(3)萃取精提将泽泻粗提取液置于分液漏斗中，然后加入等体积的萃取剂，所用萃取剂依次为石油醚、醋酸乙酯、正丁醇，将萃取剂为正丁醇萃取的有机层合并，减压蒸馏 浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。在上述步骤(2)中，泽泻浸提包括震荡法浸提或回流法浸提，提取时间为0. 5 7小时，可提取3次；所用水溶性有机溶剂包括浓度为100%以下的含1 6个碳原子的 醇、烷或酯的水溶液，其加入量为泽泻颗粒的2 10倍；浓缩液中加入乙醇终浓度为30 90% ；静置冷藏温度为3 10°C，冷藏时间为12 48小时。泽泻提取物抑制α -葡萄糖苷酶活性作用的测定 (1)酶活力测定试剂的配制67mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PH = 6. 8)将磷酸氢二钾7. 646g，磷酸二氢钾4. 559g 混合溶解于蒸馏水中，定容至500mL。4-硝基苯-α -D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)溶液将0. 091g PNPG溶解于ImL 二甲基 亚砜，加入1.6mL磷酸钾缓冲液，配成0. 116mol/L底物溶液。α-葡萄糖苷酶溶液称3. 5mg固体酶，加入67mmol/L磷酸钾缓冲液200μ ，配成 0. IU/μ L酶溶液。Na2CO3溶液称取0. 53g Na2CO3用蒸馏水定容至50mL，配成0. lmol/L的溶液。还原型谷胱甘肽10mg还原型谷胱甘肽溶解于IOmL磷酸钾缓冲溶液中。(2)提取物抑制酶活性的测定在2mL磷酸盐缓冲液(pH6. 8)中，加入lmg/mL谷胱甘肽溶液50 μ L，力卩α -葡萄糖 苷酶5 μ L，在37°C保温IOmin后，加入待测样品溶液100 μ L与PNPG 50 μ L (终浓度)，37°C 反应lOmin。加入Na2CO3溶液IOmL终止反应，在波长400nm处测定吸收值。其中酶活力单位定义为在37°C，pH 6. 8的条件下，Imin内水解PNPG释放1 μ mol PNP所需的酶量为一个酶活力单位(U)。抑制剂活力单位定义为在相同的条件下降低1个 酶活力单位所需的抑制剂量。以阿卡波糖为阳性对照。结果见表。酶抑制率公式<formula>formula see original document page 4</formula>A空白不加样品反应后的吸收值A样品加入样品反应后的吸收值A背景只加样品的吸收值。表1泽泻各提取物抑制酶活性的情况<table>table see original document page 4</column></row><table>由以上表1可知，泽泻中α -葡萄糖苷酶抑制活性较强成份存在于正丁醇部分。本专利技术的有益效果是泽泻提取物的制备工艺简单易行，非常适合推广应用。该 提取物抑制α -葡萄糖苷酶活性作用与
技术介绍
相当，其抑制率不低于阳性对照物阿卡波糖。泽泻提取物可加入到药物载体，混合，制粒，干燥，然后按照常规的药剂制备方法制成颗 粒剂、或胶囊剂、或片剂、或口服液、或注射剂；或者加入载体，按照常规方法制成保健饮料 或保健食品。具体实施方式 实施例1 将泽泻粉碎，过5目筛，称取100g，加入IOOOmL水在60°C水浴震荡浸提 7h。第二次加入800mL水在60°C水浴震荡浸提5h。第三次加入600mL30%乙醇在60°C水浴 震荡浸提3h。合并三次提取液，浓缩至250mL，过滤。向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇 含量达30%。在3°C中静置48h。取上清液离心(4950r/min，15min)，取沉淀离心(4950r/ min，15min)，合并离心液。离心液浓缩至无乙醇流出后，用等体积的石油醚、醋酸乙酯、正丁 醇分别进行萃取，各三次，合并对应的有机层，分别得到石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇 部分。将正丁醇部分减压蒸馏浓缩，干燥后即得到具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的泽泻提 取物。表2泽泻各提取物的得率情况<table>table see original document page 5</column></row><table>实施例2 将泽泻粉碎，过10目筛，称取100g，加入700mL30%乙醇在60°C水浴回 流提取4h。第二次加入500mL30%乙醇在60°C水浴回流提取3h。第三次加入300mL30%乙 醇在60°C水浴回流提取2h。合并三次提取液，浓缩至250mL，过滤。向浓缩液中加入乙醇， 使浓缩液中乙醇含量达60%。在7°C中静置24h。取上清液离心(4950r/min，15min)，取沉 淀离心(4950r/min，15min)，合并离心液。离心液浓缩至无乙醇流出后，用等体积的石油醚、 醋酸乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可抑制α－葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：（１）粉碎：将泽泻原料粉碎；（２）粗提取：用水或水溶性有机溶剂浸提泽泻，得到提取液，过滤，浓缩至小体积，冷却，加乙醇于浓缩液中，静置冷藏，分取上层清液，下层料渣离心，所得清液与上层清液合并，浓缩，得到泽泻粗提取液；（３）萃取精提：将泽泻粗提取液置于分液漏斗中，然后加入等体积的萃取剂，所用萃取剂依次为：石油醚、醋酸乙酯、正丁醇，将萃取剂为正丁醇萃取的有机层合并，减压蒸馏浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：易醒，肖小年，张建平，仲秋晨，焦爽，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：36