【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种人肿瘤转移抑制蛋白GDI2在大肠杆菌中的表达与纯化的方法， 尤其是涉及一种利用大肠杆菌高效制备高纯度天然肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法。
技术介绍
Rho-⑶P 解离抑制因子 2 (Rho-⑶P dissociation inhibitor 2，GDI2)，最早由 Leffers等人发现，由201个氨基酸构成，是I^ho⑶P解离抑制因子0 ho⑶I)家族的成员之一。近年来大量的研究证明RhoGDI2蛋白在人体中担负着阻止癌细胞在整个机体内扩散的任务，该蛋白能够非常有效的抑制肿瘤细胞的侵袭及转移，且内皮素I(ET-I)和神经介素 U(NmU)可能为其作用靶点。⑶12在人体内经caspase-Ι酶切后21kDa的⑶12短肽通过失巢凋亡机制(Anoikis)能够大幅度增加癌细胞的凋亡，从而抑制了细胞的转移。作为一种具有良好应用前景的的抗癌药物蛋白，提高⑶12蛋白的工业化水平对于生产企业至关重要。目前，在重组蛋白分离纯化方面，利用重组标签进行纯化的技术，是一种被广泛使用的方法。该方法利用标签与纯化柱中填料的特异亲和作用，从而实现蛋白的有效纯化，且获得的...
【技术保护点】
１．利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白ＧＤＩ２的纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（１）将单个新鲜的大肠杆菌工程菌单克隆接种于含有氨苄青霉素的ＬＢ培养基中，在３７℃、２００ｒｐｍ／ｍｉｎ的条件下振荡培养过夜，然后再将其接种于优化过的ＬＢ培养基中在相同条件下继续培养，当ＯＤ６００＝０．６－０．８时，加入异丙基－β－Ｄ－硫代吡喃半乳糖苷（ＩＰＴＧ）进行诱导，在３７℃、２００ｒｐｍ／ｍｉｎ的条件下继续培养６ｈ；（２）离心收集细胞，加入裂解液，超声破碎，收集上清液，利用Ｐｒｏｉｎｉｔｙ ｅＸｅｃｔ纯化柱对目的蛋白进行纯化，使用Ｂａｎｄ Ｂｕｆｆｅｒ冲洗Ｐｒｏｉｎｉｔｙ ｅＸｅ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙爱友，魏东芝，王学东，徐瑞，董玉国，倪克奉，王丽华，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：31
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