本发明专利技术公开了一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特征在于，它以海洋鱼鳞为原料，经烘干、酸碱脱盐处理后，加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶，然后在45-50℃、pH5.5-6.5水解1.8-2.2小时，得酶解液；再对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物，得活性肽水解液。本发明专利技术还公开了一种清除人体羟自由基的活性肽保健口服液，它以浓缩活性肽水解液、蜂蜜、白砂糖和柠檬酸为原料。本发明专利技术水解过程简单，提取过程有效地利用了海产品加工下脚料鱼鳞，制备过程节能环保。且其除腥和口服液的配方具有简单实用、成本低廉的优点，容易在工业生产上推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种活性肽水解液的制备方法；特别是一种清除人体羟自由基的活性肽水解液的制备方法；本专利技术还涉及用前述活性肽水解液制成的活性肽口服液。
技术介绍
近年来，随着养殖规模的日益扩大和养殖技术的不断完善，养殖鱼类的产量提高很快。中国的水产品产量一直保持着高速增长势头，水产品产量2005年已经达到约4900 万t，占世界水产品产量35%，位居世界第一位。随着我国水产业的发展，水产加工也越来越受到人们的重视，加工的同时产生出大量下脚料，占鱼体总重的30% 50%，其中约5%是鱼鳞。然而，这些鱼鳞没有被充分利用，大部分作为废弃物丢弃了。据统计，我国每年废弃的鱼鳞达到30万t以上。鱼鳞含有丰富的蛋白质和多种矿物质，主要由胶原蛋白和羟基磷灰石组成。其中有机物占41% 55%，鱼鳞的有机组成中除生胶质外，大部分为鱼类特有的鱼鳞硬蛋白及少量角质蛋白、脂肪、色素和粘液质等。鱼鳞灰分含量较高，约占30%，主要成分是羟基磷灰石，绝大部分集中在骨质层，脂质含量少，相对于目前生产胶原蛋白的主要原料皮和骨而言，这更有利于胶原的提取和纯化。经常食用含胶原蛋白丰富的食品，能有效地增加皮肤组织细胞的储水能力，增强和维持肌肤良好的弹性，强化肌肤的韧性，延缓肌体的衰老。同时，胶原蛋白可以作为补钙成分用于保健食品，因为血浆中来自胶原蛋白的羟基脯氨酸是将血浆中的钙运输到骨细胞的运载工具，骨细胞中的骨胶原则是羟基磷灰石的黏合剂，它与羟基磷灰石共同构成了骨骼的主体。此外，胶原蛋白还能降低血甘油三酯和胆固醇，用于制作减肥降血脂食品。蛋白肽由二个或二个以上氨基酸组成。人体的吸收是以肽的方式进行，食用蛋白肽的吸收利用率可达100%。肽的分子量、氨基酸排列顺序不同所表现的功能就不同。胶原蛋白肽是胶原或明胶经蛋白酶降解处理后制成的，具有较高的消化吸收性， 分子量大约在3000道尔顿，胶原蛋白肽可促进骨的形成，增强低钙水平下的骨胶原结构， 从而提高了骨强度，即达到了预防骨质疏松症的作用；另外胶原蛋白肽还具有其它许多特殊的生理功能如保护胃粘膜和抗溃疡作用，抗过敏作用等，特别需要提出的是，胶原蛋白在美容方面的功效，因为，皮肤中胶原蛋白占72%，真皮中80%是胶原蛋白，胶原蛋白在皮肤中构成了一张细密的弹力网，锁住水分，支撑着皮肤。胶原蛋白的流失，导致支撑皮肤的弹力网断裂，皮肤组织萎缩、塌陷，肌肤就会显现干燥、粗糙、松弛、皱纹、毛孔粗大、暗淡、色斑等衰老现象”。因此，及时补充胶原蛋白，对于改善肌肤问题，延缓衰老，有非常好的功效。生物活性肽生产制备方法和途径有三条一是从自然界生物体中提取其本身固有各种天然活性肽类。二是通过蛋白质降解途径可获得具有各种生理功能活性肽。三是合成方法制备生物活性肽，包括化学合成法、酶合成法和重组技术合成法。从天然生物体提取生物活性肽，生物体含量很低，加工成本却很高，且大量提取会造成物种资源萎缩。另外，提取生物活性肽残存有机溶剂又会带来毒性问题。化学合成法常用于合成高营养价值、中等长度的医药用肽，但采用这种方法制取活性肽反应底物和反应剂价格高，反应过程中能产生有害物质。酶合成法相对有很多优点，如反应温和，酶催化位置有方向性等， 但反应副产物多，最适酶缺乏及产率过低等因素都制约着其发展。目前最基本方法是使用蛋白酶进行简单水解，此种方法不仅可制取具有功能性食品蛋白且不会损坏其营养价值。除可释放出各种为人类所需要生物活性肽之外，将食物降解为不同链长的肽还可使其更易消化。但这种酶解法不利方面是产品其它功能如粘性、 乳化力和吸水性会受到影响，需要通过调整水解参数改善产品特殊性能和去除不良味觉成分。在实际生产中，对一些特殊肽类生产需要对反应底物、酶、反应条件作特殊要求。目前，它成为全世界研究的热点、大量的国内外研究结果表明生物活性肽是涉及生物体内多种细胞功能的生物活性物质，在生物体内已发现几百种，不同的生物肽具有不同的结构和生理功能，如抗病毒、抗癌、抗血栓、抗高血压、免疫调节、激素调节、抑菌、降胆固醇等作用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的、水解过程简单、可以酶解鱼鳞胶原蛋白来生产活性肽水解液的方法，所制备的活性肽水解液具有较高的清除羟自由基的的能力。本专利技术所要解决的另一个技术问题是提供了一种以上述方法制得的活性肽水解液制成的活性肽口服液。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特点是，其步骤如下(1)清洗烘干取海洋鱼鳞，清洗到无杂物和血污，将清洗后的鱼鳞在55_65°C烘干至含水量为10%以下；(2)酸碱脱盐处理分别用2N的盐酸和质量百分比浓度为10%的NaOH溶液进行脱盐处理后，水洗至PH为5. 5-6. 5，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为5-7% (底物浓度)；(3)酶水解向水与鱼鳞的混合物中加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的60-70%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的4. 5-5. 5% (加酶量)；然后在45-50pH5. 5-6. 5水解1. 8-2. 2小时，得酶解液；(4)灭酶和离心在90-100°C下对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物， 离心液即为活性肽水解液。以上所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法的步骤( 酸碱脱盐处理中， 优选的技术方案是水洗至PH为6. 0，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为6%。以上所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法的步骤(3)酶水解中，优选的技术方案是混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的65%，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的5. 0% ；然后在48°C、pH6. 0水解2. 0小时，得酶解液。以上所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法的步骤(4)灭酶和离心中，优选的技术方案是在95°C下对酶解液进行灭活处理。以上任何一项技术方案所述的清除人体羟自由基的活性肽的制备方法中，进一步优选的技术方案是向活性肽水解液中加入重量浓度为2、的活性炭进行脱腥处理50min， 处理温度为60°C，得脱腥活性肽水解液，浓缩至脱腥活性肽水解液中的活性肽重量含量为 3_5%，得浓缩活性肽水解液。本专利技术所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。本专利技术还提供了一种清除人体羟自由基的活性肽保健口服液，其特点是，它是由以下重量配比的原料制成如以上任何一项技术方案中所述的浓缩活性肽水解液 85-90 ； 蜂蜜 4-6 白砂糖 7-9 ； 柠檬酸 0.08-0. 12。其中，各原料的优选重量配比为 浓缩活性肽水解液 86. 9 ；蜂蜜5 白砂糖8;柠檬酸0.10 。本专利技术所述的活性肽保健口服液可以按现有技术中口服液的常规制备方法制成， 制备时可以将各原料进行混合，装瓶后再进行杀菌处理即可。以下对本专利技术技术方案及相关技术参数进行进一步的阐述。以下各条件研究实验中所涉及的清除羟自由基试验的方法如下样品对羟自由基的清除活性采用甲基紫褪色法，用分析天平分别称取甲基紫0. 088g，七水硫酸亚铁 0. 026g,均定容至IOOmL,用移液管吸取30%双氧水1 mL，定容到100 mL,用HCl调水的pH 至3. 5。按一定的方法本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种清除人体羟自由基的活性肽的制备方法，其特征在于，其步骤如下：（１）清洗烘干：取海洋鱼鳞，清洗到无杂物和血污，将清洗后的鱼鳞在５５－６５℃烘干至含水量为１０％以下；（２）酸碱脱盐处理：分别用２Ｎ的盐酸和质量百分比浓度为１０％的ＮａＯＨ溶液进行脱盐处理后，水洗至ｐＨ为５．５－６．５，得水与鱼鳞的混合物，且鱼鳞占混合物的重量百分比为５－７％；（３）酶水解：向水与鱼鳞的混合物中加入木瓜蛋白酶与胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其总重量的６０－７０％，所加入的混合酶占水与鱼鳞的混合物重量的４．５－５．５％；然后在４５－５０℃、ｐＨ５．５－６．５水解１．８－２．２小时，得酶解液；（４）灭酶和离心：在９０－１００℃下对酶解液进行灭活处理，然后进行离心，去除沉淀物，离心液即为活性肽水解液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杜云建，赵玉巧，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：32
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