本发明专利技术公开了一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus?velezensis)CGMCC?No.4992及其作为番茄枯萎病拮抗菌中的应用。通过新疆阜康多年种植番茄的农田土壤样品进行拮抗菌的筛选，获得具有较强抑菌活性的的菌株，经过进一步筛选、驯化选育，并对所获菌株进行形态特征及16S?rRNA序列测定及系统发育分析，该菌种的发酵液的拮抗作用对于番茄枯萎病菌的解决具有突出的技术效果，具有广泛的应用领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物防治
，具体的说，本专利技术涉及一种贝莱斯芽孢杆菌及其在番茄枯萎病拮抗中的应用的
技术介绍
番茄枯萎病是一种严重危害蔬菜品质和产量的土传性病害，番茄的幼苗期到成株期期间均受到枯萎病菌的侵染。病菌在土壤中越冬，随灌溉水及土壤传播，严重时给番茄生产带来严重的损失。以农药为主的防治措施，不仅土壤生态结构遭到严重破坏，而且对人们的身体健康和环境构成了极大危害，与施用化学农药带来了的环境污染和农药残留问题相比，生物防治方法具有安全、经济、高效等优势。本研从番茄枯萎病的生物防治方面着手，通过拮抗菌的筛选、应用，进一步减少农药的使用量、提高番茄品质，使我区红色番茄产业能够朝着健康、可持续的方向发展。番茄枯萎病是由枯萎病菌引起的一种维管束素疾病，病原菌为Fusarium oxysporum(Schl)f. sp lycopersicisnyderet et Hansen，称番茄尖镰孢菌番茄专化型，属半知菌亚门真菌，病菌生长发育适温27°C 、最高38°C、最低5°C，番茄枯萎病菌的专化性极强，只危害番茄，为半知菌亚门、镰孢属的番茄萎蔫病菌。近年来，番茄枯萎病生物防治及拮抗菌的筛选应用受到关注，张琴芳等利用非致病性镰刀菌铢(F047)对番茄枯萎病进行防治，发现F047液体培养的过滤液能有效抑制番茄枯萎病菌孢子的萌发，抑制萌发率为81. 7%。田连生等利用木霉菌株T4对番茄枯萎病的防效达93. 3 %，田间直观效果表现为木霉菌剂处理的植株粗壮，叶片深绿，根系发达，鲜根重、株高比多菌灵处理的分别增加2. 5,22cm ；而对照番茄苗在接入枯萎病菌后25天全部死亡。郝晓娟等对短短芽孢杆菌JK-2菌株的防治效果进行了测定，结果表明，JK-2对番茄枯萎病的盆栽防效和田间防效分别可达到83. 82%和74. 70%。新疆土地辽阔，光热资源丰富，是世界上少数几个特别适宜种植番茄的地区，新疆加工番茄种植规模逐年扩大，总产量逐年提高。新疆番茄加工业利用这一独特的资源优势逐步发展，已成为中国乃至世界番茄加工业主要的生产地区，番茄酱成为新疆重要的出口创汇产品。中国成为继美国、意大利之后世界第三个番茄酱生产及出口大国。但加工番茄在多年种植中仍然受到多种病害的危害，其中番茄枯萎病是发病较为严重的病害之一，严重时造成大面积减产。通过农田土壤样品进行拮抗菌的筛选，获得具有拮抗作用的细菌对于番茄枯萎病菌的解决具有重要的现实意义。
技术实现思路
针对现有技术国内外还未有针对贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)作为番茄枯萎病拮抗菌的研究的现状，本专利技术旨在提供一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)及其作为番茄枯萎病拮抗菌中的应用，通过试验验证，采用本专利技术提供的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)具有拮抗作用的细菌对于番茄枯萎病菌的解决具有突3出的技术效果。本专利技术的技术方案通过新疆阜康多年种植番茄的农田土壤样品进行拮抗菌的筛选，获得具有较强抑菌活性的的菌株，经过进一步筛选、驯化选育，获得一株编号为LYT-5。 通过对所获菌株进行形态特征及16S rRNA序列测定及系统发育分析，初步确定了其分类地位；同时对该细菌LYT-5的发酵液的抑菌率、稳定性等特性进行了深入研究，为生物防治番茄枯萎病原菌提供看了新的选择，其拮抗作用对于番茄枯萎病菌的解决具有突出的技术效果。本专利技术提供的一株作为番茄枯萎病拮抗菌的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，通过在新疆阜康城郊多年种植番茄的农田土壤中分离、筛选和培养，获得一批作为番茄枯萎病拮抗菌的微生物菌株，从中筛选出一株编号为LYT-5的菌株，对于番茄枯萎病具有稳定而显著的拮抗效果，经微生物学分类与鉴定，属于贝莱斯芽孢杆菌 (Bacillus velezensis)。具体的，本专利技术提供的一种作为番茄枯萎病拮抗菌的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，命名为LYT-5。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。保藏日期是2011年6月27日，保藏号是CGMCC No. 4992。经微生物学鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。该菌株最适生长条件为温度30°C，培养基(LB)为蛋白胨(W/V)，酵母膏0.5% (W/V)，氯化钠1% (W/V)，琼脂2% (W/V)，ρΗ7· 0-7. 2，121°C灭菌20分钟；在LB平板上30°C恒温培养14-16小时，菌落中等大小，呈乳白色，不透明，边缘不整齐，扁平，表面干燥；显微观察其菌体呈短杆状，芽孢中生；依照第九版《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》(《Bergey，s Manual of Systematic Bacterio-logy》)和《常用细菌系统鉴定手册》对LYT-5菌株进行形态学测定，生理生化检测确定LYT-5菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)中的成员。 通过 BLAST 同源比对，菌株 LYT-5 的 16S rRNA 序列与 Bacillus velezensis 的 16S rRNA 序列的相似性最高，因而将菌株LYT-5确定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。进一步，本专利技术一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)作为番茄枯萎病拮抗菌的应用。本专利技术进一步提供了菌种的保存条件，采用培养基(LB)成分蛋白胨(W/V)， 酵母膏 0.5% (W/V)，氯化钠 (W/V)，琼脂 2% (W/V)，pH 7. 0-7. 2，121°C灭菌 20 分钟。 在其LB培养基斜面上30°C条件下，培养14-16小时，后采用无菌的脱脂牛奶为保护剂，真空冷冻干燥后低温保存；平时使用保存在LB培养基的斜面上，4°C冰箱保存备用。通过实施本专利技术具体的
技术实现思路
，可以达到以下有益效果本专利技术提供了分离得到的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) CGMCC No. 4992，是一种芽孢杆菌，在番茄枯萎病菌防治方面有较高的应用价值，尤其是能够针对本地生境分离出的适应本地气候及生长环境的拮抗菌对于提高作物产量，减少农药使用量，构建良好的生态环境具有积极作用。附图说明图1所示为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CGMCC No. 4992的菌落形态图。图2所示为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) CGMCC No. 4992的拮抗菌16S rRNA片段PCR扩增结果图，图中，M是指标准DNA序列片段大小。图 3 所示为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CGMCC No. 4992 的 16S rRNA 系统发育树图。图4所示为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CGMCC No. 4992菌悬液对番茄枯萎病菌的抑制作用图。下面，举实施例说明本专利技术，但是，本专利技术并不限于下述的实施例。 具体实施例方式下面，举实施例说明本专利技术，但是，本专利技术并本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种作为番茄枯萎病拮抗菌的贝莱斯芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｅｌｅｚｅｎｓｉｓ），其保藏编号为ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．４９９２。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：詹发强，杨文琦，侯新强，侯敏，杨蓉，崔卫东，龙宣杞，张慧涛，
申请(专利权)人：新疆农业科学院微生物应用研究所，
类型：发明
国别省市：65
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