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一种多功能穿梭表达载体及其构建方法技术

技术编号:6974558 阅读:435 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种多功能穿梭表达载体及其构建方法,属于遗传工程领域。本发明专利技术构建的载体pGUGCA以pGAPZB为骨架,以产甘油假丝酵母URA3序列为整合位点,以低浓度Zeocin为大肠杆菌中的筛选标记,以铜离子为酵母筛选标记。本专利获得的穿梭载体pGUGCA可以在大肠杆菌中复制,在产甘油假丝酵母中复制和表达。该载体实现了在大肠杆菌中使用低浓度Zeocin为筛选标记,在酵母中使用铜筛选标记,大大降低了生产和科研成本,同时介导目的基因在产甘油假丝酵母这一优良宿主中进行稳定表达。该发明专利技术为对潮霉素、G418等真菌抗生素都有很强抗性的产甘油假丝酵母提供了方便易得又廉价的转化体系,同时该载体又能应用于酿酒酵母、皱褶假丝酵母等酵母属。为酵母的遗传改造提供了有力工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及,特别是一种适用于产甘油假丝酵母的穿梭载体。
技术介绍
产甘油假丝酵母是野生型的甘油高产菌株。与酿酒酵母相比,它具有生长速度和发酵速度快,耐高渗透压,甘油产率高,转化率和耗糖转化率世界领先等较多优势(王正祥,诸葛健.耐高渗压高压甘油的一个假丝酵母新种产甘油假丝酵母.微生物学报.1999,39(001) :68-74)。应用于基因工程技术中的宿主细胞具有较大前景。另一方面, 在大规模生产生物柴油过程中会产生较多的副产物甘油,在一定程度上削弱了发酵法生产甘油的优势,以甘油为原材料或底物生产高附加值的生物产品越来越受到重视,那么以产甘油假丝酵母作为宿主通过代谢工程构建基因工程菌株生产高附加值生物产品具有潜在的前景。但是该菌株的遗传知识和分子生物学信息远远落后于酿酒酵母等模式菌株。该菌株有很多独有的性质,其他酵母适用的载体大多不能在该酵母中使用。如对潮霉素、G418等真菌抗生素具有很强的抗性,不能使用这些抗生素作为遗传工程技术中的筛选标记。遗传转化体系的缺乏已经严重限制了该工业菌株的研究和应用,所以构建适用于该酵母的表达载体迫在眉睫。2008年,本实验室陈献忠(Chen X,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多功能穿梭表达载体,其特征是:以pGAPZB为骨架,含有多克隆位点、产甘油假丝酵母的URA3序列及铜抗性筛选标记表达盒。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:诸葛斌高晓娜方慧英诸葛健
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:32

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