本发明专利技术提供一种鲜鹿茸酶降解提取有效成分的方法。鲜鹿茸经Alcalase碱性蛋白酶降解处理后，获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液，其降解率为82％～93％；获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液中，含有脂肪酸、磷脂、甾体化合物、糖类、微量元素等多种有效成分，所有的有机质都变成了易于人体吸收的溶液状态，可用于制药、保健品、食品、化妆品诸多方面；用Alacalase碱性蛋白酶降解鲜鹿茸，鲜鹿茸降解后的残渣物为鹿茸钙化物质及无机元素等，可用作良好的饲料添加剂；鹿茸的生物活性物质的浓缩液分离纯化后得到纯度为97％的氨基酸产品为重要的营养品，氨基酸的收率达到12％以上。本发明专利技术的反应条件温和、操作简单、鹿茸的全部有效成分都能被充分利用，提高了鹿茸的应用价值和经济效益。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于鲜鹿茸酶降解提取有效成分的方法，涉及一种利用Alcalase碱性蛋白酶直接降解鲜鹿茸提取有效成分的方法。
技术介绍
鹿茸是指雄性梅花鹿或马鹿未骨化的角组织，是著名的传统中药材，含有磷脂、糖脂、胶脂、激素、脂肪酸、氨基酸、维生素、蛋白质及钙、磷、镁、纳等成份。近年来采用冷冻干燥法分离出一些活性物质，鹿茸中含有多种生理活性成分，如神经生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、转化生长因子及鹿茸多肽等。依据其溶解性分为水溶性、脂溶性、 和不溶性物质；水溶性物质中主要包括19种氨基酸、多肽、蛋白质，粘多糖、粘蛋白、氨基己糖和葡萄糖。脂溶性物质主要是磷脂、留体化合物、脂肪酸、中性脂、维生素类和前列腺素等；不溶性物质主要包括硬蛋白和胶原蛋白等物质。鹿茸性温而不燥，对全身虚弱、久病之后患者，有较好的保健作用_。因此由其提取的鹿茸素含有多种生物活性物质，能够促进机体的生长发育和新陈代谢，增强机体的免疫功能，具有壮肾阳，益精血，强筋骨等特殊功效。鹿茸素是鹿茸中的活性成份的总称。鹿茸素在食品、医药、保健、美容化妆品的应用随着人们生活水平的提高有不断上升的趋势，市场销售前景十分广阔。目前提取鹿茸素的方法主要有⑴乙醇提取法_采用乙醇提取鹿茸素，乙醇用量为10倍量时，出膏率为5%，醇提物中只含有17KD以下的多肽。⑵酸提法盐酸提取鹿茸多糖操作比较复杂，一般需要反复多次提取，酸提法获得的鹿茸提取物中的活性成分含量低，且含有一些不易被人体吸收的物质，如蛋白质等大分子物质。( 超临界CO2萃取法超临界(X)2萃取技术是纯物理方式提取鹿茸中活性物质，具有无毒、环保、萃取时间短、产品质量高等特点，但鹿茸中活性物质提取率也只有10%，而且设备投资费用大，成本高。概括而言，目前提取鹿茸素的方法主要存在操作复杂、提取率低、提取的有效成分不完全的缺点，难以满足当今市场对鹿茸素的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述已有技术的不足，提供，具体涉及一种利用Alcalase碱性蛋白酶直接降解鲜鹿茸提取有效成分的方法。本专利技术的方法反应条件温和、操作简单、鹿茸的全部有效成分都能被充分提取利用。本专利技术的技术方案包括以下操作步骤(1)鲜鹿茸经燎毛、洗净，在4 6°C的条件下机械切成片状；(2)取切成片状的鲜鹿茸，按底物浓度为0. 05g/mL 0. 20g/mL的比例加入缓冲溶液，用胶体磨粉碎至微米级，调PH值为7 10，按切成片状的鲜鹿茸重量的0. 01 0. 03倍加入Alcalase碱性蛋白酶，在温度为50°C 70°C条件下降解池 8h，降解过程保持pH 值恒定，降解后90-95°C加热15min，将Alcalase碱性蛋白酶灭活；所用缓冲溶液为pH值为 9 12的碳酸钠缓冲溶液、乳酸钠-氢氧化钠缓冲溶液或碳酸氢钠缓冲溶液；(3)用滤纸或离心过滤去除鲜鹿茸降解后的残渣物，收集滤液，将得到的滤液减压蒸馏，浓缩，获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液；鲜鹿茸经Alcalase碱性蛋白酶降解处理后，其降解率为82% 93% ；(4)将过滤得到的鲜鹿茸降解后的残渣物烘干；(5)将已处理好的氢型732强酸性阳离子交换树脂装入两支串联的柱子里，将步骤(3)的获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液调pH值为2-5后上柱，吸附3- ，用蒸馏水洗脱，至收集液使茚三酮显阳性，再用洗脱剂洗脱至使茚三酮显阴性，得到鹿茸有效成分氨基酸；收率达到12%以上；所述的洗脱剂为NH4Cl溶液、NH4Ac溶液或NH3. H2O ；氢型732强酸性阳离子交换树脂的处理方法为将树脂置于其两倍量的浓度为26. 5%的食盐溶液中浸泡18-20小时，然后放尽食盐水，用清水漂洗净，使排出水不带黄色；再用与食盐溶液量相同的浓度为 2% -4%的NaOH溶液浸泡2_4小时，或作小流量清洗，放尽碱液后，用清水冲洗树脂直至排出水接近中性为止，最后用与食盐溶液量相同的浓度为5%的HCL溶液浸泡4-8小时，放尽酸液，用清水漂流至中性待用。有益效果本专利技术提供，鲜鹿茸经 Alcalase碱性蛋白酶降解处理后，获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液，其降解率为82% 93% ；获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液中，经分析含有脂肪酸、磷脂、留体化合物、糖类、 微量元素等多种有效成分，所有的有机质都变成了易于人体吸收的溶液状态，可用于制药、 保健品、食品、化妆品诸多方面；用Alacalase碱性蛋白酶降解鲜鹿茸，鲜鹿茸降解后的残渣物为鹿茸钙化物质及无机元素等，可用作良好的饲料添加剂；鹿茸的生物活性物质的浓缩液分离纯化后得到纯度为97%的氨基酸产品为重要的营养品，氨基酸的收率达到12% 以上。本专利技术的反应条件温和、操作简单、鹿茸的全部有效成分都能被充分利用，提高了鹿茸的应用价值和经济效益，能够解决目前市场上鹿茸素供不应求的局面。附图说明图1. 1是本专利技术的鲜鹿茸酶解产物中氨基酸的HPLC图。1.天冬氨酸Asp，2.谷氨酸Glu，3.丝氨酸kr，4.苏氨酸Thr，5.精氨酸Arg，6.丙氨酸Ala，7.脯氨酸ftx)，8.缬氨酸Val，9.甲硫氨酸Met，10.异亮氨酸Ile，ll.亮氨酸Leu，12.苯丙氨酸Wie，13.组氨酸 His, 14.赖氨酸Lys，15.酪氨酸Tyr。图1.2是17种氨基酸混合标准溶液HPLC图。1.天冬氨酸Asp，2.谷氨酸Glu，3.丝氨酸kr，4.甘氨酸Gly，5.苏氨酸Thr，6.精氨酸Arg，7.丙氨酸Ala，8.脯氨酸ftx)，9.缬氨酸Val，10.甲硫氨酸Met，11.半胱氨酸Cys，12.异亮氨酸Ile，13.亮氨酸Leu，14.苯丙氨酸Wie，15.组氨酸His，16.赖氨酸Lys，17.酪氨酸Tyr。通过图1. 1与图1. 2的对比，可以得出本专利技术的鹿茸酶降解产物中含有精氨酸、赖氨酸、亮氨酸等15种氨基酸。图2是本专利技术的鲜鹿茸酶解产物中氨基酸的红外光谱图。由图2可以看出吸收峰为3414. 96的官能团为氨基，在氨基酸的红外光谱上，没有典型的羧基(-C00H)伸展吸收峰127501^-17000^1,而只有-COO负离子的伸展吸收峰ΙθδΟαι^-ΙΜδαιΓ1，因此可以判断图中的吸收峰16 . 49979CHT1是由羧基产生的，而且杂质峰很少，本专利技术的方法分离的混合氨基酸纯度也很高，可达97%。具体实施例方式实施例1 本专利技术的技术方案包括以下操作步骤(1)鲜鹿茸经燎毛、洗净，在4 6°C的条件下机械切成片状；(2)取15. Olg切成片状的鲜鹿茸，放入500mL烧杯中，按底物浓度为0. lg/mL的比例加入乳酸钠-氢氧化钠缓冲溶液，用胶体磨粉碎至微米级，调PH值为8. 5，按切成片状的鲜鹿茸重量的0. 02倍加入Alcalase碱性蛋白酶，在温度为65°C条件下降解6h，降解过程保持PH值恒定，降解后95°C加热15min，将Alcalase碱性蛋白酶灭活；所用缓冲溶液为pH 值为9 12的NH3. H2O ；(3)用滤纸或离心过滤去除鲜鹿茸降解后的残渣物，收集滤液，将得到的滤液减压蒸馏，浓缩，获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液；鲜鹿茸经Alcalase碱性蛋白酶降解处理后，其降解率为93% ；(4)将过滤得到的鲜鹿茸降解后的残渣物烘干；(5)将已处理好的氢型732强酸性阳本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种鲜鹿茸酶降解提取有效成分的方法，其特征在于包括以下步骤：（１）鲜鹿茸经燎毛、洗净，在４～６℃的条件下机械切成片状；（２）取切成片状的鲜鹿茸，按底物浓度为０．０５ｇ／ｍＬ～０．２０ｇ／ｍＬ的比例加入缓冲溶液，用胶体磨粉碎至微米级，调ｐＨ值为７～１０，按切成片状的鲜鹿茸重量的０．０１～０．０３倍加入Ａｌｃａｌａｓｅ碱性蛋白酶，在温度为５０℃～７０℃条件下降解３ｈ～８ｈ，降解过程保持ｐＨ值恒定，降解后９０－９５℃加热１５ｍｉｎ，将Ａｌｃａｌａｓｅ碱性蛋白酶灭活；所用缓冲溶液为ｐＨ值为９～１２的碳酸钠缓冲溶液、乳酸钠－氢氧化钠缓冲溶液或碳酸氢钠缓冲溶液；（３）用滤纸或离心过滤去除鲜鹿茸降解后的残渣物，收集滤液，将得到的滤液减压蒸馏，浓缩，获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液；（４）将过滤得到的鲜鹿茸降解后的残渣物烘干；（５）将已处理好的氢型７３２强酸性阳离子交换树脂装入两支串联的柱子里，将步骤（３）的获得鹿茸的生物活性物质的浓缩液调ｐＨ值为２－５后上柱，吸附３－６ｈ，用蒸馏水洗脱，至收集液使茚三酮显阳性，再用洗脱剂洗脱至使茚三酮显阴性，得到鹿茸有效成分氨基酸；所述的洗脱剂为ＮＨ４Ｃｌ溶液、ＮＨ４Ａｃ溶液或ＮＨ３．Ｈ２Ｏ；氢型７３２强酸性阳离子交换树脂的处理方法为：将树脂置于其两倍量的浓度为２６．５％的食盐溶液中浸泡１８－２０小时，然后放尽食盐水，用清水漂洗净，使排出水不带黄色；再用与食盐溶液量相同的浓度为２％－４％的ＮａＯＨ溶液浸泡２－４小时，或作小流量清洗，放尽碱液后，用清水冲洗树脂直至排出水接近中性为止，最后用与食盐溶液量相同的浓度为５％的ＨＣＬ溶液浸泡４－８小时，放尽酸液，用清水漂流至中性待用。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张龙，王兰兰，
申请(专利权)人：长春工业大学，
类型：发明
国别省市：82
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