本发明专利技术公开了一种抑制可卡因诱发高运动活性的多肽及其应用。本发明专利技术提供的多肽，为如下所示a)或b)或c)或d)：a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的多肽；b)由序列表中序列1自5′末端第412-425位氨基酸残基所示的氨基酸序列组成的多肽；c)由序列表中序列1自5′末端第329-446位氨基酸残基所示的氨基酸序列组成的多肽；d)将a)或b)或c)限定的多肽的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的分别有a)、b)或c)限定的多肽衍生的多肽。本发明专利技术的实验表明，本发明专利技术的多肽对于降低机体对于可卡因刺激的行为学敏感性具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种抑制可卡因诱发的高运动活性的多肽及其应用。
技术介绍
可卡因，是目前吸食非常普遍的一种成瘾性精神兴奋药物。可卡因成瘾也是对人类健康以及社会安定具有着严重危害的疾病。可卡因急性刺激，可以诱发运动活性增高。这主要是由于可卡因可以抑制突触前膜的多巴胺转运体，从而阻断多巴胺的重摄取，导致突触部位多巴胺浓度增高。可卡因诱发运动活性的程度，则可以反映出机体对于可卡因的行为学敏感性，进而为研究可卡因成瘾的分子机制及其治疗提供某些启示。多巴胺刺激，可以激活突触后膜的多巴胺受体。多巴胺受体，属于典型的G蛋白偶联受体，具有典型的七次跨膜结构。多巴胺受体主要有5种亚型，即D1、D2、D3、D4和D5受体，根据其偶联的G蛋白类型以及对于腺苷酸环化酶的作用，可以分为Dl样受体，包括Dl 和D5受体，以及包括D2、D3和D4受体在内的D2样受体。Dl样受体与兴奋性Ga s蛋白偶联，激活腺苷酸环化酶；D2样受体则相反，与抑制性Gai蛋白偶联，抑制腺苷酸环化酶的活性。多巴胺系统对于运动的调节，主要集中在基底节部位。锥体外系运动受到基底神经节的神经环路调控，黑质-纹状体DA系统是其中重要的神经环节，纹状体是调控中心部位。基底神经节内含直接和间接两种神经环路。直接环路由大脑皮质一纹状体一黑质网状区(SNR)—丘脑一大脑皮质；间接环路大脑皮质一纹状体一苍白球外侧区(GPe)—底丘脑(STN)—苍白球内侧区(GPi)—丘脑一大脑皮质。生理情况下，由黑质网状区和苍白球内侧区输出紧张性抑制冲动，作用于丘脑。时相性兴奋，激活直接环路，使丘脑去抑制，增强丘脑-皮质神经元活动；而激活间接环路，进一步抑制丘脑-皮质神经元活动。其结果是， 直接环路能够增强运动功能，而间接环路抑制运动功能。它们受到黑质-纹状体DA系统调控，Dl受体易化直接环路传递，而D2受体减弱间接环路传递。虽然突触功能不相同，DA对两环路产生的效果是一致的，减弱丘脑-皮质神经元的抑制，易化从皮质始发的运动功能。 而现有研究证据证实，可卡因敏化现象，主要倾向于激活直接环路的Dl受体。研究证据表明，激活Dl受体可以增强可卡因诱发的运动活性。可卡因刺激，突触部位的多巴胺水平增高，进而可以激活黑质纹状体神经元内的Dl受体。通过cAMP/PKA信号通路，Dl受体可以增强这些神经元对于谷氨酸的兴奋性，因而黑质纹状体直接通路的信号传出和所诱发的运动活性。反之，Dl受体敲除的小鼠，对于可卡因的运动活性增强反应减弱甚至消失。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种抑制可卡因诱发高运动活性的多肽及其应用。本专利技术提供的多肽，为如下所示a)或b)或C)或d)a)、由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的多肽；b)、由序列表中序列1自5’末端第412-425位氨基酸残基所示的氨基酸序列组成的多肽；C)、由序列表中序列1自5’末端第3四_446位氨基酸残基所示的氨基酸序列组成的多肽；d)、将a)或b)或c)限定的多肽的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的分别有a)或b)或c)限定的多肽衍生的多肽。所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。序列表中的序列2由23个氨基酸残基组成，序列表中的序列1由446个氨基酸残基组成。所述多肽的编码基因也是本专利技术保护的范围。所述基因是如下1)-5)中任意一种的DNA分子1)序列表中序列5所示的DNA分子；2)序列表中序列6自5’末端第1234-1275位核苷酸；3)序列表中序列6自5’末端第985-1338位核苷酸；4)在严格条件下与1)或2)或3)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能的多肽的DNA分子；5)与1)或2)或3)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、 至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有 98%或至少具有99%同源性且编码具有相同功能的多肽的DNA分子。所述严格条件为在6XSSC，0. 5% SDS的溶液中，在65°C下杂交，然后用2XSSC， 0. 1 % SDS 和 1 X SSC, 0. 1 % SDS 各洗膜一次。序列表中的序列5由72个核苷酸组成，序列表中的序列6由1341个核苷酸组成.含有所述编码基因的重组载体、重组菌、表达盒或转基因细胞系也是本专利技术保护的范围。所述的多肽、所述的编码基因、所述的重组载体、重组菌、表达盒或转基因细胞系在制备抑制成瘾药物诱发人或动物高运动活性药物中的应用也是本专利技术保护的范围。所述成瘾药物为可卡因，所述动物为大鼠，所述高运动活性通过提高运动路程值体现。所述抑制成瘾药物诱发动物高运动活性通过如下1)-3)中至少一种实现1)抑制I型多巴胺受体的磷酸化；2)抑制I型多巴胺受体的细胞质膜定位；3)抑制I型多巴胺受体的下游信号分子的磷酸化；所述I型多巴胺受体的的氨基酸序列为序列表中的序列1 ；所述下游信号分子为ERK(I型多巴胺受体的下游信号分子)和/或CREB (转录 ia^if^AMP EMjti^^·^^ (cAMP response elements binding protein, Ι^,ΤΜ^ CREB))，所述ERK的氨基酸序列为序列表中的序列7 ；所述CREB的氨基酸序列为序列表中的序列8。4所述抑制I型多巴胺受体的磷酸化是通过所述多肽竞争性抑制I型多巴胺受体的第421位丝氨酸的磷酸化实现的。所述I型多巴胺受体的第421位丝氨酸为序列表序列1自5’末端第412位氨基酸或序列表序列2自5’末端第19位氨基酸。本专利技术的另一个目的是提供一种抑制可卡因诱发的人或动物高运动活性的药物。本专利技术提供的药物，其活性成份为所述的多肽、所述的编码基因、所述的重组载体、重组菌、表达盒或转基因细胞系。本专利技术的实验证明，本专利技术发现I型多巴胺受体(D1 dopamine receptor,以下简称D1R，氨基酸残基序列为序列1)可以被蛋白激酶Dl (protein kinase D1，以下简称PKD1) 磷酸化，由于第三胞内环2 位丝氨酸在人类序列中已经突变为丙氨酸，不会被磷酸化，因此只考虑了 C末端的421位丝氨酸。DlR-CT (Dl受体C末端)-S421是根据421位丝氨酸附近的氨基酸残基序列，包含了 PKDl的磷酸化偏好序列选取的核心序列，据此序列，构建具有穿膜能力的TAT融合肽Tat-D1R-CT-S421。体外激酶磷酸化实验表明，Tat-D1R-CT-S421 可以干扰PKD1对DIR-CT的磷酸化，使其磷酸化程度降至对照组的53. 39 士 5. 62 % (P < 0. 05)。背侧纹状体核团注射实验表明，Tat-D1R-CT-S421使PKDl对DlR-CT的磷酸化程度降至对照组的45. 98士 17. 69% (P < 0. 05)。可卡因诱发运动活性行为学实验表明， 与对照组Tat-D1R-CT-S421A相比，在可卡因注射后20_50min，Tat_DlR-CT_S421可以使可卡因诱发的运动活性幅度减弱至对照组的55. 46士 12. 50% (P < 0. 05)。并且这种行为学抑本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种多肽，为如下所示ａ）或ｂ）或ｃ）或ｄ）：ａ）、由序列表中序列２所示的氨基酸序列组成的多肽；ｂ）、由序列表中序列１自５’末端第４１２－４２５位氨基酸残基所示的氨基酸序列组成的多肽；ｃ）、由序列表中序列１自５’末端第３２９－４４６位氨基酸残基所示的氨基酸序列组成的多肽；ｄ）、将ａ）或ｂ）或ｃ）限定的多肽的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和／或缺失和／或添加且具有相同功能的分别有ａ）或ｂ）或ｃ）限定的多肽衍生的多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王韵，苏萍，康凯，王宁，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11
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