公开了一种命名为MIR604的新的转基因玉米事件。本发明专利技术涉及产生MIR604事件的、插入至玉米基因组中的重组构建体的DNA序列和插入位点侧翼基因组序列的DNA序列。本发明专利技术进一步涉及用于检测MIR604的DNA序列存在的测定法，涉及含有MIR604基因型的玉米植物和玉米种子，并涉及通过将含有MIR604基因型的玉米植物与自身或另一玉米品种杂交来产生玉米植物的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术一般涉及植物分子生物学、植物转化和植物育种领域。更具体地，本专利技术涉及含有新的转基因基因型的抗昆虫转基因玉米植物及在样品中检测该玉米植物DNA存在的方法以及其组合物。背景植物害虫是世界重要农作物损失的主要因素。由于非-哺乳动物害虫(包括昆虫)侵染仅在美国每年约损失80亿美元。玉米根虫(Corn rootworm)种被认为是最大破坏性的玉米害虫。重要的根虫害虫种类包括Diabrotica virgifera virgifera即西部玉米牛艮虫；D. Iongicornis barberi 艮口;!匕部玉米牛艮虫；D. undecimpunctata howardi 艮口南部玉米根虫和D. virgifera zeae即墨西哥玉米根虫。玉米根虫主要通过加强应用化学杀虫剂来控制。这样可以获得对玉米根虫的好的控制，但这些化学制品有时也会影响有益的生物体。广泛使用化学杀虫剂导致的另一个问题是出现抗药性的昆虫变种。这一问题已经通过多种抗药性管理实践部分地减轻，但对备选的害虫控制策略存在增长的需要。一种这样的备选策略包括在转基因植物中表达编码杀虫蛋白的外源基因。这种方法已经提供了一种对抗选择性害虫的有效手段，并且表达杀虫毒素的转基因植物已经商业化了，使得农民减少应用化学杀虫剂。外源基因在植物体内的表达可受到它们的染色体位置的影响，这种影响可能是由于染色质的结构或紧靠整合位点的转录调节元件的接近造成的(见例如，Weising等人， 1988，“ Foreign Genes in Plants, “ Ann. Rev. Genet. 22 :421-477)。因此，通常需要产生成百上千个不同的事件(events)并从这些事件中筛选出用于商业目的的具有预期转基因表达水平和模式的事件。具有预期转基因表达水平或模式的事件可用于采用传统育种方法通过有性远交将转基因渐渗到其它遗传背景中。这种杂交产生的子代保持了原始转化体的转基因表达特性。这种策略用于在许多很好适应本地生长条件的品种中确保可靠的基因表达。能够检测一特定事件的存在以确定有性杂交的子代是否含有目的转基因将是有利的。而且，用于测定特定事件的方法将有助于遵守例如要求源于重组作物的食物售前许可和标记的条例。通过任何熟知的核酸检测方法，包括但不限于使用多核苷酸引物进行热扩增(聚合酶链式反应(PCR))或使用核酸探针的DNA杂交来检测转基因的存在是可能的。 通常，为了使用来检测已经用于转化多种植物品种的特定DNA构建体的试剂和方法简单并且一致，这些检测方法通常集中在频繁使用的基因元件，例如启动子、终止子和标记基因， 因为对于许多DNA构建体，编码序列区是可互换的。因此，这些方法可能不能用于区分仅编码序列不同的构建体。而且，这种方法可能不能用于区分不同的事件，特别是那些使用相同的DNA构建体产生的事件，除非与插入的异源DNA相邻的染色体DNA( “侧翼DNA”)的序列已知。本专利技术包括一种已经将cry3A055基因(其公开于公布于2003年3月6日的国际出版物NO.W003/018810，在此引入作为参考)掺入到其基因组中的昆虫抗性转基因玉米事件，cry3A055基因编码Cry3A055杀虫毒素，可用于控制Diabrotica spp.害虫。该转基因玉米事件也已经将pmi基因掺入到其基因组中，pmi基因编码磷酸甘露糖异构酶(PMI)，这公开于美国专利No. 5，767，378，其在此引入作为参考，该酶用作选择性标记，使植物能利用甘露糖作为碳源。本专利技术进一步包括该转基因玉米事件特有的新的分离的核酸序列，其可用于鉴别该转基因玉米事件并用于在生物学样品中检测该转基因玉米事件的核酸，本专利技术也包括包含用于在生物学样品中检测这些核酸所需的试剂的试剂盒。概要本专利技术涉及命名为MIR604的含有新的转基因基因型的转基因玉米事件，所述的转基因基因型含有分别赋予MIR604玉米事件及其子代昆虫抗性和利用甘露糖作为碳源能力的cry3A055基因和pmi基因。本专利技术还提供了含有本专利技术基因型的转基因玉米植物、来自含有本专利技术基因型的转基因玉米植物的种子，并涉及通过将含有本专利技术基因型的玉米近交系(inbred)与其自身或与另一种不同基因型的玉米系杂交来产生含有本专利技术基因型的转基因玉米植物的方法。除了本专利技术新的基因型赋予玉米植物的那些特性，本专利技术的转基因玉米植物可以基本具有相应的等基因非-转基因玉米植物的全部形态学和生理学特性。 本专利技术还提供用于检测来自事件MIR604的核酸的存在的组合物和方法，所述的方法基于插入至产生MIR604事件的玉米基因组的重组表达盒和插入位点侧翼基因组序列的DNA序列。MIR604事件可以进一步通过分析Cry3A055和PMI蛋白质的表达水平以及通过测试抗玉米根虫的有效力来表征。根据一方面，本专利技术提供一种分离的核酸分子，该核酸分子含有至少10个连续核苷酸，所述的连续核苷酸来自插入至玉米事件MIR604的玉米植物基因组中的异源DNA序列，和至少10个连续核苷酸，所述核苷酸来自插入至玉米事件MR604的玉米植物基因组的异源DNA序列插入位点侧翼的玉米植物基因组DNA。根据该方面的分离的核酸分子可以含有至少20或至少50个连续的核苷酸，所述连续核苷酸来自插入至玉米事件MIR604的玉米植物基因组的异源DNA序列，和至少20或至少50个连续的核苷酸，所述连续核苷酸来自插入至玉米事件MIR604的玉米植物基因组中的异源DNA序列插入位点侧翼的玉米植物基因组 DNA。根据另一方面，本专利技术提供一种分离的核酸分子，所述分子包含含有至少一种选自SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2及其互补序列的、事件MIR604的接点序列(junction sequence)的核苷酸序列。该接点序列跨越了含有插入至玉米基因组中的表达盒的异源 DNA和来自插入位点侧翼的玉米基因组的DNA之间的接点并可用于鉴别MIR604事件。根据另一方面，本专利技术提供一种将异源DNA分子连接至玉米事件MIR604中的玉米植物基因组的分离的核酸分子，其含有从SEQ ID NO=USEQ ID NO :2及其互补序列中选择的约11-约20个连续核苷酸的序列。根据另一方面，本专利技术提供一种含有选自SEQ ID NO =USEQ ID NO :2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO :4及其互补序列的核苷酸序列的分离的核酸分子。根据本专利技术的另一方面，提供了含有本专利技术核酸分子的扩增子。根据本专利技术的更另外方面，提供了用于检测事件MIR604的侧翼序列引物。这种侧翼序列引物含有分离的核酸序列，所述分离的核酸序列含有至少10-15个来自如SEQ ID NO :3(在此随意称为5'侧翼序列)中列出的核苷酸1-801的连续核苷酸或其互补核苷酸。 在该方面的一个实施方案中，该侧翼序列引物选自SEQ ID NO 7,SEQ ID NO :8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO :10, SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :13、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :15及其互补序列。在本专利技术的另一方面，侧翼序列引物包含分离的核酸序列，所述分离的核酸序列含本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．多核苷酸引物对，其含有第一多核苷酸引物和第二多核苷酸引物，它们在存在有来自ＭＩＲ６０４转基因玉米植物的ＤＮＡ模板时一起发挥作用而产生含有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２或者其互补序列的扩增子，其中：ａ．第一多核苷酸引物序列是位于插入至玉米事件ＭＩＲ６０４的ＭＩＲ６０４玉米植物基因组中的异源ＤＮＡ序列插入点侧翼的玉米植物基因组或与该位于异源ＤＮＡ序列插入点侧翼的玉米植物基因组互补；并且ｂ．第二多核苷酸引物序列是插入至ＭＩＲ６０４玉米植物基因组中的异源ＤＮＡ序列或与该异源ＤＮＡ序列互补。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：H·斯坦纳，E·陈，M·梅格希吉，
申请(专利权)人：辛根塔参与股份公司，
类型：发明
国别省市：CH
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