细菌产的抗氧化剂及其药物组合物制造技术

本发明专利技术公开了细菌产的抗氧化剂及其药物组合物。所述抗氧化剂是通过包括以下步骤的方法制备的：1)将环青霉JTLR-1接种于培养基，培养，收集液体发酵培养物；2)制备无水提取物；3)取无水提取物溶解于乙酸乙酯，得无水提取物乙酸乙酯溶液，然后上样于硅胶填料，弃去流经硅胶填料的乙酸乙酯溶液；4)将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，洗脱硅胶，弃去洗脱液；5)将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，洗脱硅胶，减压除去溶剂，得到具有抗氧化作用的提取物。本发明专利技术抗氧化剂的制备方法具有产品抗氧化能力高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗氧化剂及其药物组合物。
技术介绍
自由基是生命活动中多种生化反应的中间代谢物质。自由基产生过多或清除过慢，会造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老过程并诱发各种疾病。在衰老过程中，机体内氧化和抗氧化系统之间的平衡发生了变化，表现为氧化作用增强，抗氧化能力减弱随着年龄的增长，抗氧化酶类如SOD等活性降低，体内除氧自由基的能力受到影响，氧自由基浓度升高，引起膜脂质的过氧化、蛋白质变性、酶活性降低和DNA损伤等危害些生物大分子结构与功能的改变，必然导致细胞功能的紊乱，从而导致各种疾病和引起衰老。因此说自由基攻击生命大分子和各种细胞器造成组织损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤等恶性疾病的重大原因。抗氧化物质(抗氧化剂)是指能够清除氧自由基，抑制或消除以及减缓氧化反应的一类物质。抗氧化剂的开发与研究一直以来受到人们的广泛关注，特别是当科学家们发现人体的疾病与衰老是人体内自由基作用的结果后，抗氧化剂的研究更有了广阔的发展空间。天然抗氧化剂已从单纯作为油脂和含脂食品的抗氧化剂，发展到作为体内氧自由基的清除剂，起到保护人体细胞组织，保护心脑血管循环系统、抗癌及延缓衰老等生理作用。目前天然抗氧化物质主要是从动植物中提取的，如维生素类、酶类和天然药物类等。但是动植物中天然抗氧化物质含量较低，提取工艺复杂，而且从这些资源提取势必使这这些动植物资源遭到严重破坏，造成生物多样性和生态环境的损失。近年来，利用一些微生物具有产生和宿主相同或相似生理活性物质的特点，对植物来源菌进行了大量的研究， 已从榛属植物中分离得到多株可以产生具有生理活性物质的菌株，其中包括可以产生抗氧化剂的青霉(产抗氧化剂的菌株为青霉JTLR-1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011 年3月21日，保藏编号为CGMCC No. 4701)。名称为“一株产抗氧化剂的菌株(申请号 201110111548X，申请日:2011年04月29日)”的专利中利用青霉JTLR-I产抗氧化剂的提取方法(具体如下取青霉JTLR-I的发酵固体培养物用液氮冷冻并研碎后，以Ig固体培养物加入IOmL质量浓度50 %的甲醇水的比例进行提取，用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后，除去上层正己烷层，取下层冷冻干燥，即得到菌产抗氧化剂)存在杂质较多，抗氧化活性低的问题。专利技术人期望获得具有高提取率的抗氧化剂，并且期望将这种抗氧化剂配制成具有优良性能的组合物。
技术实现思路
本专利技术目的是为了解决现有提取方法得到的菌产抗氧化剂存在杂质较多，抗氧化活性低的问题，而提供微生物来源的抗氧化剂制备方法。本专利技术的第一个实施方案提供的是一种制备细菌产的抗氧化剂的方法，该方法包括以下步骤1)将1 2环青霉JTLR-I接种于PDA固体培养基，在下培养2天，然后转接于装有200mL察氏培养基的500mL三角瓶中，在、180r/min条件下摇瓶培养7天，收集液体发酵培养物；2)液体发酵培养物过滤后取固形菌丝，然后用液氮反复冻融并研碎后，加入蒸馏水形成过40目标准筛的流体，再用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后取水层加入萃取溶剂进行萃取，萃取三次，合并三次萃取液，然后加入无水Na2SO4除水，过滤去除固形物后得到提取液，再在35 40°C下减压除去溶剂，得到无水提取物；3)取Ig无水提取物溶解于60 70ml乙酸乙酯，得无水提取物乙酸乙酯溶液，然后上样于硅胶填料，上样流速为5 6mL/min，弃去流经硅胶填料的乙酸乙酯溶液；4)按体积比20 100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，然后洗脱硅胶，洗脱流速为2. 5 5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，弃去洗脱液；幻按体积比60 100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，继续洗脱硅胶，洗脱流速为2. 5 5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，收集洗脱液，在45 50°C下减压除去溶剂，得到具有抗氧化作用的提取物；其中，步骤2中蒸馏水的加入量为每Ig研碎后物质加10_12ml蒸馏水，步骤2中水层与萃取溶液的体积比为1 1.5，步骤3中上样的量按无水提取物质量计，无水提取物与硅胶的质量比为1 35 40，硅胶的粒径为20μπι 50μπι。本专利技术的第二个实施方案提供的是一种抗氧化剂，其是通过包括以下步骤的方法制备的1)将1 2环青霉JTLR-I接种于PDA固体培养基，在下培养2天，然后转接于装有200mL察氏培养基的500mL三角瓶中，在、180r/min条件下摇瓶培养7天，收集液体发酵培养物；2)液体发酵培养物过滤后取固形菌丝，然后用液氮反复冻融并研碎后，加入蒸馏水形成过40目标准筛的流体，再用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后取水层加入萃取溶剂进行萃取，萃取三次，合并三次萃取液，然后加入无水Na2SO4除水，过滤去除固形物后得到提取液，再在35 40°C下减压除去溶剂，得到无水提取物；3)取Ig无水提取物溶解于60 70mL乙酸乙酯，得无水提取物乙酸乙酯溶液，然后上样于硅胶填料，上样流速为5 6mL/min，弃去流经硅胶填料的乙酸乙酯溶液；4)按体积比20 100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，然后洗脱硅胶，洗脱流速为2. 5 5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，弃去洗脱液；幻按体积比60 100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，继续洗脱硅胶，洗脱流速为2. 5 5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，收集洗脱液，在45 50°C下减压除去溶剂，得到具有抗氧化作用的提取物；其中，步骤2中蒸馏水的加入量为每Ig研碎后物质加10_12mL蒸馏水，步骤2中水层与萃取溶液的体积比为1 1.5，步骤3中上样的量按无水提取物质量计，无水提取物与硅胶的质量比为1 35 40，硅胶的粒径为20μπι 50μπι。本专利技术的第三个实施方案提供的是一种药物组合物，其中包含本专利技术所述菌产抗氧化剂、表面活性剂、助表面活性剂、促过饱和物质和油。根据本专利技术的药物组合物，其中所述的菌产抗氧化剂占该药物组合物重量的 10% 30% (w/w)，优选 15 25% (w/w)。根据本专利技术的药物组合物，其中所述的表面活性剂占该药物组合物重量的15% 35 % (w/w)，优选 20 % 30 % (w/w)。根据本专利技术的药物组合物，其中所述的助表面活性剂占该药物组合物重量的 10% (w/w)，优选 15% 30% (w/w)。根据本专利技术的药物组合物，其中所述的促过饱和物质占该药物组合物重量的 10% (w/w)，优选 1. 5% 3% (w/w) O根据本专利技术的药物组合物，其中所述的油的量是加至该组合物重量的100%。根据本专利技术的药物组合物，其中以该药物组合物的重量计，其中菌产抗氧化剂的含量为15% 25% (w/w)，表面活性剂的含量为20% 30% (w/w)，助表面活性剂的含量为15% 30% (w/w)，促过饱和物质的含量为1.5% 3% (w/w)，以及加至100%量的油。在一个实施方案中，本专利技术的菌产抗氧化剂的药物组合物，以该药物组合物的重量计，其中的油在该组合物中的量不予特别限定，而是以平衡的量加入，使本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．制备细菌产的抗氧化剂的方法，该方法包括以下步骤：１）将１～２环青霉ＪＴＬＲ－１接种于ＰＤＡ固体培养基，在２８℃下培养２天，然后转接于装有２００ｍＬ察氏培养基的５００ｍＬ三角瓶中，在２８℃、１８０ｒ／ｍｉｎ条件下摇瓶培养７天，收集液体发酵培养物；２）液体发酵培养物过滤后取固形菌丝，然后用液氮反复冻融并研碎后，加入蒸馏水形成过４０目标准筛的流体，再用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后取水层加入萃取溶剂进行萃取，萃取三次，合并三次萃取液，然后加入无水Ｎａ２ＳＯ４除水，过滤去除固形物后得到提取液，再在３５～４０℃下减压除去溶剂，得到无水提取物；３）取１ｇ无水提取物溶解于６０～７０ｍＬ乙酸乙酯，得无水提取物乙酸乙酯溶液，然后上样于硅胶填料，上样流速为５～６ｍＬ／ｍｉｎ，弃去流经硅胶填料的乙酸乙酯溶液；４）按体积比２０∶１００将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，然后洗脱硅胶，洗脱流速为２．５～５ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱体积为硅胶体积的１５倍，弃去洗脱液；５）按体积比６０∶１００将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，继续洗脱硅胶，洗脱流速为２．５～５ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱体积为硅胶体积的１５倍，收集洗脱液，在４５～５０℃下减压除去溶剂，得到具有抗氧化作用的提取物；其中，步骤２中蒸馏水的加入量为每１ｇ研碎后物质加１０－１２ｍＬ蒸馏水，步骤２中水层与萃取溶液的体积比为１∶１．５，步骤３中上样的量按无水提取物质量计，无水提取物与硅胶的质量比为１∶３５～４０，硅胶的粒径为２０μｍ～５０μｍ。...

【技术特征摘要】
1.制备细菌产的抗氧化剂的方法，该方法包括以下步骤1)将1 2环青霉JTLR-I接种于PDA固体培养基，在下培养2天，然后转接于装有200mL察氏培养基的500mL三角瓶中，在、180r/min条件下摇瓶培养7天，收集液体发酵培养物；2)液体发酵培养物过滤后取固形菌丝，然后用液氮反复冻融并研碎后，加入蒸馏水形成过40目标准筛的流体，再用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后取水层加入萃取溶剂进行萃取，萃取三次，合并三次萃取液，然后加入无水Na2SO4除水，过滤去除固形物后得到提取液，再在35 40°C下减压除去溶剂，得到无水提取物；3)取Ig无水提取物溶解于60 70mL乙酸乙酯，得无水提取物乙酸乙酯溶液，然后上样于硅胶填料，上样流速为5 6mL/min，弃去流经硅胶填料的乙酸乙酯溶液；4)按体积比20 100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，然后洗脱硅胶，洗脱流速为 2. 5 5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，弃去洗脱液；5)按体积比60 100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，继续洗脱硅胶，洗脱流速为 2. 5 5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，收集洗脱液，在45 50°C下减压除去溶剂， 得到具有抗氧化作用的提取物；其中，步骤2中蒸馏水的加入量为每Ig研碎后物质加10-12mL蒸馏水，步骤2中水层与萃取溶液的体积比为1 1.5，步骤3中上样的量按无水提取物质量计，无水提取物与硅胶的质量比为1 35 40，硅胶的粒径为20μπι 50μπι。2.一种抗氧化剂，其是通过包括以下步骤的方法制备的1)将1 2环青霉JTLR-I接种于PDA固体培养基，在下培养2天，然后转接于装有200mL察氏培养基的500mL三角瓶中，在、180r/min条件下摇瓶培养7天，收集液体发酵培养物；2)液体发酵培养物过滤后取固形菌丝，然后用液氮反复冻融并研碎后，加入蒸馏水形成过40目标准筛的流体，再用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后取水层加入萃取溶剂进行萃取，萃取三次，合并三次萃取液，然后加入无水N...

【专利技术属性】
技术研发人员：金涛，刘利群，邹积宏，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93