一种炎症前期趋化因子拮抗肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种炎症前期趋化因子拮抗肽及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域。所述拮抗肽氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。上述拮抗肽的筛选方法，是用内毒素刺激PBMC细胞产生趋化因子，离心收集上清液，分离纯化趋化因子；以细胞上清液作为靶标，加入噬菌体十二肽库与靶标结合，酸性洗脱液洗脱，筛选出的噬菌体进行扩增，此筛选步骤进行4轮，第4轮不再扩增；对第4轮所得噬菌体进行阳性筛选分析，分别进行结合活性分析、竞争抑制分析和趋化因子生成抑制分析，筛选阳性单克隆噬菌体；对阳性单克隆噬菌体DNA进行测序及序列分析，获得炎症前期趋化因子拮抗肽。本发明专利技术的拮抗肽可特异阻断炎症前期趋化因子的分泌，且具有生产成本低，特异性强、功效明确，安全可靠等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种炎症前期趋化因子拮抗肽及其制备方法和应用。
技术介绍
炎症反应是机体保护自身的正常防御反应，但过度的炎症反应对机体是有害的， 会伤害机体自身的组织，严重时甚至会导致多器官衰竭，危及生命。化脓性脑膜炎、全身炎症反应综合症、风湿性关节炎、急性呼吸窘迫症和系统性红斑狼疮等炎症性疾病严重影响了人们的身体健康。在炎症反应前期，内毒素的主要成分脂多糖可引起血管内皮细胞微丝的降解、促进血液凝固性增强、白细胞在内皮细胞表面黏附等多种途径直接参与或放大炎性反应，是引起休克和炎性反应的关键性介质之一。炎性反应中作为一种重要的炎症介质，趋化因子在炎症的发生发展过程中发挥着重要作用。在炎症反应发展的过程中，机体主要释放IL-8、 MCP-U IL-U IL-6、RANTES, TNF-a、SCYA3、SCYBlO 等炎性因子。抗炎症反应的研究是近些年来研究的热点之一，主要策略包括拮抗细胞因子及相关受体，中和内毒素的抗体，应用LPS启动信号转导的中间分子阻断剂等。采用拮抗细胞因子及相关受体，从而减轻细胞因子对机体的损害，已引起许多学者的关注。之前绝大多数抗炎治疗的本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种炎症前期趋化因子拮抗肽，其氨基酸序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示。

【技术特征摘要】
1.一种炎症前期趋化因子拮抗肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。2.表达权利要求1所述多肽的噬菌体。3.一种筛选权利要求1所述多肽的方法，包括以下步骤(1)内毒素刺激人外周血单核细胞产生趋化因子，离心收集上清液，分离纯化趋化因子；(2)噬菌体十二肽库的亲和筛选以步骤(1)中细胞上清液作为靶标，加入噬菌体十二肽库与靶标结合，酸性洗脱液洗脱，筛选出的噬菌体进行扩增，此筛选步骤进行4轮，第4轮不再扩增，直接保存备用；(3)对步骤(2)所得噬菌体进行阳性筛选分析，分别进行结合活性分析、竞争抑制分析和趋化因子生成抑制分析，筛选阳性单克隆噬菌体；(4)阳性单克隆噬菌体DNA的测序及序列分析，获得炎症前期趋化因子拮抗肽。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(2)所述亲和筛选第1轮将LPS加入到无LPS刺激的人外周血单核细胞培养上清液，包被过夜后加封闭液封闭，洗涤后加入原始肽库溶液，缓慢摇动，收集未结合的噬菌体液；用未结合的噬菌体液加入到经过LPS刺激 24h的...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晗笑，莫雪梅，李秀英，张光，黄晓泉，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：81