一种鸡防御素9基因表达载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种鸡防御素9基因表达载体及其制备方法和在防治种鸡输卵管疾病中的应用，属于基因工程技术领域。所述表达载体是以真核载体pVAX1为出发载体，用鸡卵清蛋白编码序列取代pVAX1上的CMV启动子，在其下游插入鸡防御素9基因构建而成。该表达载体的制备方法是将鸡防御素9基因连接到载体pVAX1上，鸡卵清蛋白基因连接到载体pMD18-T上，连接后的载体同时进行双酶切后重组，构建含有鸡卵清蛋白基因和鸡防御素9基因的pVAX1重组载体，即为鸡防御素9基因表达载体。本发明专利技术的表达载体可用于制备治疗种鸡输卵管疾病药物，治疗效果显著，安全无毒，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种鸡防御素9基因表达载体及其制备方法和在防治种鸡输卵管疾病中的应用。
技术介绍
蛋传病是病原通过染病或带菌母鸡传给子代所引起的疾病。由于种鸡蛋传性疾病的蔓延，结果导致商品代雏鸡在孵化过程中被污染，出壳的雏鸡往往死亡，残存的也变为隐性带菌鸡。由于种鸡养殖企业普遍采用定期投喂有效抗菌药物的方法控制疾病的发生，但滥用药物，致使耐药菌株迅速增加。人们把目光投放到抗菌多肽方面。抗菌多肽在自然环境中的表达量很少，化学合成方法成本太高，一般是通过基因工程的手段获得转抗菌多肽基因动物既解决了体外表达水平限制的问题，又免除了体外表达后，后续纯化的难题。目前已开始从事动物和植物基因工程的研究，出现了转抗菌多肽基因动物和植物，报道已成功地将抗菌多肽基因导入小鼠、蚊子唾液腺和肠道、烟草、马铃薯、水稻和小麦中(黄莹等，2007)。Lazarev等Q002，2004, 200 研究表明，通过在离体细胞或者是动物体内直接表达抗菌多肽(蜂毒肽)，能有效抑制病菌(支原体和衣原体)的感染，降低动物死亡率。转基因研究中，组织特异性启动子的使用能使目的外源基因在特定组织内高效表达本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种鸡防御素９基因表达载体，其特征在于是以真核表达载体ｐＶＡＸ１为出发载体，用鸡卵清蛋白编码序列取代载体ｐＶＡＸ１上的ＣＭＶ启动子，在其下游插入鸡防御素９基因的ｃＤＮＡ序列，构建成重组真核表达载体。

【技术特征摘要】
1.一种鸡防御素9基因表达载体，其特征在于是以真核表达载体PVAXl为出发载体， 用鸡卵清蛋白编码序列取代载体PVAXl上的CMV启动子，在其下游插入鸡防御素9基因的 cDNA序列，构建成重组真核表达载体。2.权利要求1所述鸡防御素9基因表达载体的制备方法，其特征在于步骤如下(1)扩增鸡防御素9基因；(2)将步骤(1)中鸡防御素9基因连接到载体pVAXl上；(3)扩增鸡卵清蛋白基因；(4)将步骤(3)所得鸡卵清蛋白基因连接到载体pMDIS-T上；(5)将步骤(2)所得产物与步骤(4)所得产物经酶切后重组，构建含有鸡防御素9基因、 鸡卵清蛋白基因的PVAXl重组载体，即为鸡防御素9基因表达载体。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(1)所述扩增鸡防御素9基因所用引物序列如SEQ ID NO:广5所示。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于扩增鸡防御素9基因具体步骤为 用引物序列如SEQ ID NO:广4进行第一轮PCR，PCR反应体系为20 μ mol/L的引物各1 μ L，10mmol/L 的 dNTPs 1 μ L, IOXbuffer 5 μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢青梅，赵亚华，林崇韫，毕英佐，高向阳，马静云，陈峰，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：81