一株高效降解甲氧咪草烟的鲍曼不动杆菌制造技术

一株高效降解甲氧咪草烟的鲍曼不动杆菌，它涉及一株鲍曼不动杆菌。本发明专利技术提供了一株鲍曼不动杆菌菌株，可高效降解甲氧咪草烟，为甲氧咪草烟除草剂的环境修复和降解机制研究提供理论和微生物资源基础。本发明专利技术高效降解甲氧咪草烟菌株的鲍曼不动杆菌为鲍曼不动杆菌IB5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年04月01日，保藏编号为CGMCCNo.4728。本发明专利技术鲍曼不动杆菌IB5能够高效降解甲氧咪草烟。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株鲍曼不动杆菌。
技术介绍
甲氧咪草烟(Imazamox)是德国BASF公司(原美国氰胺公司)20世纪80年代初研制开发的咪唑啉酮类大豆田专用除草剂，它对一年生和多年生的禾本科、阔叶科、莎草科杂草及多种灌木和落叶树有活性。由于该产品比其他灭生性除草剂具有较长的持效期，可控制杂草4 6个月，故20世纪90年代初期在北美、欧洲、东南亚等国家已得到大面积推广使用，是目前国内外使用量较大的一种灭生性除草剂品种，但这类除草剂在土壤中残留时间较长，容易对后茬作物正常生长造成影响。目前国内外对甲氧咪草烟的研究报道主要集中在使用情况和药害方面，而关于降解菌株的筛选以及应用方面较少。
技术实现思路
本专利技术提供了一株鲍曼不动杆菌(AcinetcAacter baumannii)菌株，可高效降解甲氧咪草烟，为甲氧咪草烟除草剂的环境修复和降解机制研究提供理论和微生物资源基石出。本专利技术高效降解甲氧咪草烟菌株的鲍曼不动杆菌为鲍曼不动杆菌 IB5 (Acinetobacterbaumannii IB5)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年04月01 日，保藏编号为CGMCC No. 4728 ；本专利技术鲍曼不动杆菌IB5为革兰氏阴性菌，杆状，细胞大小为(0. 3μπι 0. 5μ )Χ(0. 8μπι 2. 2μ )，无鞭毛(如图1所示)，产生菌膜，在无机盐固体培养基上培养，菌落呈圆形，颜色为乳白色。本专利技术鲍曼不动杆菌ΙΒ5氧化酶反应呈阴性，接触酶反应呈阴性。鲍曼不动杆菌 ΙΒ5能够水解淀粉，氧化乳糖，不氧化山梨醇或蔗糖。本专利技术鲍曼不动杆菌ΙΒ5 (Acinetobacter baumannii IB5)通过 16S rDNA序列比对分析，与不动杆菌属(Acinetobacter)的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)的 16S rDNA序列的同源性最高，保守区相似性为99%，通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果确定鲍曼不动杆菌IB5属于不动杆菌属(AcinetcAacter)，为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)菌株。本专利技术鲍曼不动杆菌IB5可在添加了甲氧咪草烟的LB培养基和无机盐培养基上生长，培养基中甲氧咪草烟的最佳终浓度为800mg/L。鲍曼不动杆菌IB5的最适生长温度为 37°C，最适合生长环境的pH值为6 7。本专利技术鲍曼不动杆菌IB5能够高效降解甲氧咪草烟，鲍曼不动杆菌IB5在甲氧咪草烟浓度为800mg/L的无机盐培养基中，在37°C、pH值为7的条件下，培养48h，对甲氧咪草烟的降解率达到92. 46%。本专利技术鲍曼不动杆菌IB5对甲氧咪草烟残留具有修复作用。本专利技术鲍曼不动杆菌IB5 (Acinetobacter baumannii IB5)属于不动杆菌属 (AcinetcAacter)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年04月01日，保藏编号为 CGMCC No. 4728 ο附图说明图1为本专利技术鲍曼不动杆菌ΙΒ5的电子显微镜照片；图2为通过鲍曼不动杆菌ΙΒ5 和相近菌株的16S rDNA序列进行同源性比对构建的系统发育树图；图3为具体实施方式二中甲氧咪草烟浓度和鲍曼不动杆菌IB5的菌体数量随时间的变化关系曲线，-■-为鲍曼不动杆菌IB5菌体数量变化曲线，-▲-为甲氧咪草烟浓度的变化曲线。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式高效降解甲氧咪草烟菌株的鲍曼不动杆菌为鲍曼不动杆菌IB5 (AcinetcAacter baumannii IB5)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年 04月01日，保藏编号为CGMCC No. 47280本实施方式鲍曼不动杆菌IB5 (AcinetcAacter baumannii IB5)为革兰氏阴性菌， 杆状，细胞大小为(0. 3 μ m 0. 5 μ m) X (0. 8 μ m 2. 2 μ m)，无鞭毛，产生菌膜，在无机盐固体培养基上培养，菌落呈圆形，颜色为乳白色。参照《伯杰细菌鉴定手册》第八版和《常见细菌系统鉴定手册》对鲍曼不动杆菌 IB5 (Acinetobacter baumannii IB5)进行生理生化鉴定鲍曼不动杆菌IB5氧化酶反应呈阴性，接触酶反应呈阴性。鲍曼不动杆菌IB5能够水解淀粉，氧化乳糖，不氧化山梨醇或蔗糖。本实施方式鲍曼不动杆菌IB5可在添加了甲氧咪草烟的LB培养基和无机盐培养基上生长，培养基中甲氧咪草烟的最佳终浓度为800mg/L。其中无机盐培养基(IOOOmL)由 1. Og 的 NaCl、l. Og 的 NH4NO3U. 5g 的 K2HP04、0. 5g 的 KH2P04、0. Ig 的 MgSO4 · 7H20 和余量的蒸馏水组成。无机盐培养基加热充分溶解后于121°C高压灭菌15min，冷却至50 60°C后向其中加入甲氧咪草烟至终浓度为500mg/L。本实施方式鲍曼不动杆菌IB5的最适生长温度为37°C，最适合生长环境的pH值为 6 7。具体实施方式二 本实施方式鲍曼不动杆菌IB5 (Acinetobacter baumannii IB5) 由中国黑龙江省讷河市受除草剂污染的土壤中筛选得到。筛选按以下步骤进行取黑龙江省讷河市长期施用甲氧咪草烟药害农田土壤5g于灭菌的广口瓶中，加入50mL的生理盐水， 振荡30s，用8层纱布过滤，取过滤液ImL加入到无机盐培养基中，于30°C、180r/min条件下培养7 10天，期间不断补充甲氧咪草烟，使甲氧咪草烟的浓度提高至800mg/L，得富集培养液；将无机盐固体培养基(IOOOmL无机盐固体培养基由1. Og的NaCl、l. Og的NH4NO3U. 5g 的K2HP04、0. 5g的KH2P04、0. Ig的MgSO4 · 7H20、20g的琼脂和余量的蒸馏水组成)灭菌后冷却到50 60°C，加入甲氧醚草烟使其终浓度至800mg/L，制作平板，取富集培养液IOOyL 均勻涂布在平板上，于30°C培养24h后挑取生长较好的菌落进行三区划线以获得纯培养上述优选菌株经初筛、复筛和纯化，即可得到鲍曼不动杆菌IB5。对筛选得到的鲍曼不动杆菌IB5进行分子鉴定，按以下步骤进行用热破壁法提取筛选得到的菌株的总DNA，采用细菌的16S rDNA通用引物，以基因组DNA为模板进行PCR 扩增，然后利用胶回收试剂盒(购自于大连宝生物工程有限公司)回收纯化PCR产物，之后进行克隆、转化，筛选阳性克隆子菌落，经扩大培养后委托上海生工生物技术有限公司测序。鲍曼不动杆菌IB5的16S rDNA序列长度为1524bp，其序列提交至GenBank获得的登录号为FJ550344。测序结果通过在线分析与GenBank中的16S rDNA序列进行同源性比对，然后用软件Mega4. 0的Neibour-Joining进行系统发育树的构建(如图2所示)，以确定菌株的种属关系。同源性分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一株高效降解甲氧咪草烟的鲍曼不动杆菌，其特征在于高效降解甲氧咪草烟菌株的鲍曼不动杆菌为鲍曼不动杆菌ＩＢ５（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｂａｕｍａｎｎｉｉ　ＩＢ５），保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路１号院３号，保藏日期为２０１１年０４月０１日，保藏编号为ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ．４７２８。

【技术特征摘要】
1. 一株高效降解甲氧咪草烟的鲍曼不动杆菌，其特征在于高效降解甲氧咪草烟菌株的鲍曼不动杆菌为鲍曼不动杆菌IB5 (AcinetcAacter baumannii IB5...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨峰山，杨鑫，刘春光，刘丽萍，张爽，黄英泽，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93