本发明专利技术涉及毛萼乙素在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用。毛萼乙素在制备治疗感染性疾病药物中的应用。本发明专利技术优点在于：本发明专利技术为毛萼乙素发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域；本发明专利技术的毛萼乙素安全无毒，药效明显，预示着很好的药用前景；毛萼乙素能够抑制细胞因子相关的JAK/STAT传导通路的活化，特异性地抑制EAE小鼠体内具有致病性的Th1和Th17细胞分化；同时对于NF-κB信号通路异常活化有抑制作用，改变炎症微环境组分的炎性基因转录；并且完全抑制过继移植小鼠的EAE病情，从而对EAE小鼠起到有效的治疗和预防作用。上述研究预示着毛萼乙素具有很好的治疗自身免疫性疾病及感染性疾病的药用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药提取物的应用，具体地说，是毛萼乙素在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用。
技术介绍
自身免疫性疾病、感染性疾病有着类似的发病机制，都存在炎症反应失控。多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)是一种主要累及中枢神经系统的自身免疫性疾病。患者往往从中青年时期就开始起病，多数患者会伴随进行性的神经功能障碍而逐渐残疾，丧失劳动能力给家庭和社会带来沉重的经济负担。多发性硬化的病理特征为中枢神经系统炎性浸润以及由之导致的白质脱髓鞘。自身抗原反应性效应T细胞的异常激活所导致的炎症反应与疾病的发生和发展有着密切的关系。经胸腺选择的CD4+T细胞处于未致敏的亚群分化前状态，称为幼稚T细胞(na'ive T cells)，位于外周免疫器官(脾脏和淋巴结)内。在特殊抗原的刺激下，幼稚T细胞将分化为各种效应T细胞，是介导适应性免疫应答的主要细胞，负责清除入侵机体的病原体，但他们的异常激活也会导致各种组织炎症。根据分泌的细胞因子和生物学功能，⑶4+ T辅助细胞主要分为三个亚群Thl，Th2jPThl7。Thl细胞主要分泌前炎性细胞因子，包括干扰素Y (interferons，IFN Y)，肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)和白介素2 (interleukin2，IL2)等，IFNy可以通过自分泌的方式促进Thl 细胞的分化。Thl细胞介导细胞免疫反应，通过活化巨噬细胞清除胞内病原微生物。Th2细胞主要分泌细胞因子白介素4 (interleukin4，IL4)，负责清除胞外微生物。Thl7细胞主要产生IL17家族的细胞因子，通过招募中性粒细胞至感染部位，使机体抵御致病或非致病的细胞外病原微生物。Thl和Thl7细胞在诱发器官特异性自身免疫病和慢性感染等疾病的发病中起着重要的作用。另外，幼稚T细胞还可以分化成调节性T细胞(Treg)。Treg细胞特征性地表达转录因子你@3，主要行使免疫抑制功能，负责维持机体的免疫耐受以及防止自身免疫反应的发生。小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)是由⑶4+ T辅助细胞介导的自身免疫性疾病，典型病征为中枢神经系统炎性浸润和白质脱髓鞘。EAE小鼠被广泛接受为人类自身免疫性多发性硬化的疾病模型，是研发炎症性疾病，尤其是自身免疫性疾病药物以及探索相关药理机制的有力工具。EAE可以通过髓鞘蛋白类似物，如髓少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein, M0G)或者自身抗原特异性T细胞对相应遗传易感性的动物进行诱导发病。目前，自身免疫性疾病的治疗方案多为皮质类固醇激素和各种类型的免疫抑制剂，如甲氨喋呤、米托蒽醌、环磷酰胺等。但是，这些经典治疗方案对于疾病的缓解程度往往很有限，并且可能产生较为明显的毒副作用，包括肺部，肝脏毒性以及骨髓抑制。寻找更为安全有效且具有针对性的药物具有十分重要的意义。我国中药资源丰富，是筛选疾病治疗药物的珍贵宝库。毛萼乙素是一种从我国西南部特产的植物，毛萼香茶菜属(Αο /ο/ erioca/ji)疏花毛萼香茶菜(Jsodon eriocalyxvar. laxiflora)中分离得到的对映贝壳杉烯类二萜化合物。已有基础研究显示，包括毛萼乙素在内的许多二萜类化合物能直接干扰NF- κ B与靶DNA序列的结合能力，从而抑制 NF-kB信号通路的活化。NF-K B在自身免疫与炎症相关疾病中的重要致病作用促使我们着手研发毛萼乙素在自身免疫性和感染性疾病制药领域中的应用潜力。中国专利文献200510110089. 8公开了一种毛萼乙素在制药中的应用，该专利技术涉及毛萼乙素在制备治疗急性白血病药物中的应用，和毛萼乙素在制备治疗伯基特淋巴瘤药物中的应用。中国专利文献200710041559. 9公开了 β -抑制蛋白1在调节T细胞存活和自身免疫中的应用。但是关于毛萼乙素在制备治疗自身免疫性和感染性疾病药物中的应用目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供毛萼乙素在制备治疗自身免疫性疾病和感染性疾病药物中的应用。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是毛萼乙素在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用。所述的毛萼乙素在制备治疗多发性硬化疾病药物中的应用。所述的毛萼乙素在制备治疗自身免疫性脑脊髓炎疾病药物中的应用。所述的自身免疫性疾病是Thl或Thl7细胞相关的自身免疫性疾病。毛萼乙素在制备治疗感染性疾病药物中的应用。本专利技术的目的是通过以下技术方法来实现的 (一)实验动物C57BL/6小鼠购自中国科学院上海实验动物中心，动物饲养于上海交通大学医学院实验动物科学部〔SCXK (沪)2009-0021〕无特殊病原体环境中。(二)试剂毛萼乙素(纯度>99%)溶解于DMSO中，储存液浓度为100mM，-20°C保存。Thl、Thl7检测抗体购自BD Bioscience。调节性T细胞(Treg)检测试剂盒购自eBioscience公司。细胞因子(IFNy、TNF、IL2、IL6、IL17、IL4 和 IL10)检查采用试剂盒(BD CBA Thl/Th2/Thl7)购自 BD Bioscience。抗 Jak2 和抗 Try221 磷酸化 Jak2，抗 STATl 和抗 Try701 磷酸化 STAT1， 抗ΙκΒ，抗P65和抗kr536磷酸化P65抗体均购自Cell Signaling公司，抗STAT3和抗 Try705磷酸化STAT3，抗STAT4和抗Try693磷酸化STAT4抗体购自BD Bioscience公司。(三)EAE的诱导和评估MOG 抗原；35-55 位的氨基酸序列为Met-Glu-Val-Gly-Trp-Tyr- Arg-Ser-Pro-Phe-S er-Arg-Val-Val-His-Leu-Tyr-Arg-Asn-Gly-Lys，由吉尔生化有限公司合成(上海，中国)， 纯度大于95%。操作步骤为第一天，小鼠皮下注射含有300 μ g M0G35-55肽段和5mg/ml热灭活的结核分支杆菌H37Ra的完全弗氏佐剂(CFA)，以及每只小鼠尾静脉注射200ng百日咳毒素(PT)。第三天，再次每只小鼠尾静脉注射200ng PT0模型诱导后每天观察小鼠EAE病情，按照发病的严重程度进行打分，具体是0分无异常表现；1分尾部无力；2分后肢受累，无力，跛行；3分后肢完全瘫痪；4分双后肢瘫痪并前肢受累；5分垂死或死亡。(四)EAE的过继移植按上述方法对小鼠进行EAE诱导，在模型建立的第十天，取模型小鼠的外周免疫器官 (脾脏和淋巴结)，制成细胞悬液。在含M0G35-55Q0g/ml)的完全培养基中，分别加毛萼乙素(0. 25mM)或者溶剂对照(DMSO)进行处理。培养三天后，将细胞按每只小鼠2 X IO7个通过尾静脉注入同品系经半致死剂量(400cGy)照射的小鼠体内。在模型诱导的第一和第三天分别给予每只小鼠尾静脉注射200 ng百日咳毒素。EAE的病程评分如上所述。(五)组织切片化学染色(H&E)免疫后四天的EAE小鼠经PBS心脏灌注后用4%多聚甲醛进行内固本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．毛萼乙素在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈赛娟，陈竺，卢瑛，陈冰，宋君红，王佰言，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：31
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