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一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法技术

技术编号:6869404 阅读:287 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法,属于生物工程技术领域。该方法步骤如下:将表达类胡萝卜素代谢相关酶的重组大肠杆菌菌体超声波破壁,然后加入相应的反应物质,超声波混匀,避光密闭振荡反应;再向混合液中加入10%SDS溶液,加入NaAc溶液,振荡离心,弃上清液,得蛋白质沉淀;向蛋白质沉淀中加入丙酮,搅拌,使沉淀均匀分散,然后经离心后,取上清液,滤膜过滤后,经检测,即得类胡萝卜素的丙酮溶液。本发明专利技术通过使类胡萝卜素与蛋白质共沉淀,将类胡萝卜素从大体积的体外反应溶液中浓缩到少量蛋白质沉淀中,从而减少了后续分离纯化过程。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及,属于生物工程

技术介绍
类胡萝卜素是一类食用天然色素,既是常用的着色剂,又具有多种生物活性。该类化合物为链状或环状含有8个异戊间二烯单位、四萜烯类头尾连接而成的多异戊间二烯化合物,不溶于水。类胡萝卜素作为天然色素在色素的种类、资源和色素的化学性质等方面不受制约,并且类胡萝卜素是非常强的抗氧化剂,能有效的清除氧自由基,具有一定防治疾病的作用。随着科学技术的发展和人们对食品安全的重视,天然色素开发成为研究热点,微生物特别是光合细菌的类胡萝卜素代谢途径得到深入研究,可利用其类胡萝卜素代谢基因构建重组工程菌株,体外生产番茄红素等类胡萝卜素。由于类胡萝卜素不溶于水,体外酶反应的产物需要用有机溶剂萃取,主要用甲醇-石油醚萃取或丙酮-石油醚萃取。由于番茄红素等非极性类胡萝卜素难溶于甲醇,甲醇-石油醚萃取方法对于非极性类胡萝卜素萃取效果很差;丙酮-石油醚萃取方法则由于丙酮可溶于水和石油醚的特性,易产生乳浊液,影响类胡萝卜素的提取。另外,上述两种萃取方法第一步是将甲醇或丙酮与反应液混合于阳 60°C保温15 20分钟,再加石油醚进行萃取,耗时较长,易造成产物的损失,因而迫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法,步骤如下:(1)将表达类胡萝卜素代谢相关酶的重组大肠杆菌菌体超声波破壁,制得类胡萝卜素代谢相关酶粗酶液;(2)向步骤(1)制得的类胡萝卜素代谢相关酶粗酶液中加入相应的反应物质,反应体系用缓冲液定容后,超声波混匀,30℃避光密闭振荡反应1小时,得混合液;(3)向步骤(2)制得的混合液中加入1/15~1/10体积2mol/L NaOH和1/15~1/10体积10%SDS溶液,混合均匀;再加入混合液1/2体积3mol/L NaAc溶液,振荡5~10秒,离心,弃上清液,得蛋白质沉淀;(4)向步骤(3)制得的蛋白质沉淀中加入丙酮,搅拌1~2分钟,使沉淀均...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:肖敏张金华卢丽丽
申请(专利权)人:山东大学
类型:发明
国别省市:88

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