一种重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白的制备方法及其用途技术

本发明专利技术属生物技术领域，涉及一种重组多主枝孢霉变应原Cla?h8蛋白的制备方法及其用途。本发明专利技术从培养的多主枝孢霉提取RNA，通过PCR获得多主枝孢霉变应原Cla?h8蛋白的编码基因后，构建变应原Cla?h8蛋白的表达载体pET19b-Cla?h8。经表达纯化及鉴定，证实制得的重组多主枝孢霉变应原Cla?h8蛋白可与多主枝孢霉过敏患者的血清中IgE和IgG抗体特异性结合，具有与天然多主枝孢霉变应原Cla?h8蛋白相同免疫活性。本发明专利技术方法制得具有生物学活性的可溶性重组多主枝孢霉变应原Cla?h8蛋白，能避免天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。制得重组多主枝孢霉变应原Cla?h8蛋白可制备诊断和治疗多主枝孢霉引起的过敏性疾病的制剂。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．一种重组多主枝孢霉变应原蛋白Ｃｌａ　ｈ８的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：１）从培养的多主枝孢霉菌体中提取总ＲＮＡ，通过ＲＴ－ＰＣＲ合成ｃＤＮＡ；２）合成引物：Ｃｌａ　ｈ８－Ｓ　５－ＣＣＣＡＴＡＴＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＣＡＡＧＣＡＡ－３Ｃｌａ　ｈ８－ａｓ　５－ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＴＡＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＴＡＡＣＣＡ－３３）以ｃＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ获得多主枝孢霉变应原蛋白Ｃｌａ　ｈ８编码基因片段；４）将编码基因克隆入表达载体中，转化宿主菌，培养所得重组工程菌，然后诱导其表达目的蛋白；５）采用缓冲液对ｒＣｌａ　ｈ８包涵体进行洗涤，将其提纯后，采用谷胱甘肽还原系统对其复性，获得重组多主枝孢霉变应原蛋白Ｃｌａ　ｈ８；６）免疫学方法鉴定重组多主枝孢霉变应原蛋白Ｃｌａ　ｈ８免疫原性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：付永锋，程训佳，冯萌，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31