一种无氧环境中分离纯化绿藻氢酶的方法技术

技术编号:6864175 阅读:336 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种绿藻氢酶分离纯化的方法。该方法始终在无氧环境中进行,采用无氧操作袋与层析柱串联系统。将试剂、器皿放入无氧操作袋中,所有试剂均加入连二亚硫酸钠以除去溶氧,用高速珠磨法破碎绿藻细胞,粗酶液经硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和离子交换层析纯化后,获得纯氢酶,经SDS-PAGE检测显示单一条带。国外相似方法是将所有用到的仪器、装置放入巨大的无氧装置中,占地面积大,保护气成本高,且操作困难;国内尚无相关技术报道。本发明专利技术将无氧操作袋与层析柱串联起来,操作简单易行,且成本较低。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
1.一种绿藻氢酶分离纯化的方法,其特征在于:此分离纯化过程始终在无氧环境中进行,采用无氧操作袋与层析柱串联系统,将试剂、器皿放入无氧操作袋中,层析柱置于无氧操作袋外部,无氧操作袋与层析柱通过管路串联;具体操作步骤如下:1)取生长对数后期,鲜重为10g绿藻藻细胞,重新悬浮于50-200mL灭菌海水或磷酸缓冲液中,得藻液,置于密闭玻璃瓶中;通氮气5-15min,排除玻璃瓶中氧气后,在黑暗中诱导3-12h;2)取玻璃瓶于无氧操作袋中,反复充N2抽真空2-6次后,将藻液分装于密封离心管中,离心浓缩,去上清后重悬于10-15mL Tris-Hcl缓冲液中;在重悬液中加入5-15g、-20-4℃预冷玻璃珠...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:张卫彦飞陈兆安陆洪斌曹旭鹏薛松
申请(专利权)人:中国科学院大连化学物理研究所
类型:发明
国别省市:91

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