本发明专利技术涉及一种芘人工免疫原PY-BSA及其制备方法和用途，制备(1)以丁二酸酐、芘、无水三氯化铝为原料，冰浴反应半小时，然后于25℃反应24h。加盐酸终止反应，再加NaOH回流，过滤，滤液中加入盐酸，重结晶，活性炭脱色，干燥，得淡黄色芘半抗原；(2)以芘半抗原、N-羟基琥珀酸亚胺和N，N’-二环己基碳酰亚胺为原料，DMF为溶剂，冰浴下搅拌反应4小时。然后将所得活化酯加入到牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液中，4℃下反应20小时，透析后离心分出上清液，制得到芘人工免疫原PY-BSA。本发明专利技术制备简便，成本低；芘人工免疫原PY-BSA通过动物制备成芘特异性抗体，从而用于环境中痕量芘的检测与监控。
【技术实现步骤摘要】
本发 明属芘的多克隆抗体领域，特别是涉及一种芘人工免疫原PY-BSA的制备及用途。
技术介绍
多环芳烃是指含有两个或两个以上苯环的有机化合物，一般可分为非稠环型和稠环型两类。常见的多环芳烃有萘、蒽、菲、芘、苯并芘、荧蒽等。多环芳烃种类繁多，目前已知的有400多种。这类化合物性质比较稳定。它的来源包括自然来源和人为来源。自然来源主要是生物体内的合成、森林及草原自然起火等。人为来源主要是来自化石燃料的燃烧、 汽车尾气、秸秆焚烧以及石油提炼。多环芳烃在自然环境(水、土壤、大气等)中普遍存在且能够长距离迁移。多环芳烃容易在生物体内蓄积且具有“三致”的特点，即致癌性、致畸性、致突变性。因此，世界各国都十分重视对多环芳烃的监控，对其在环境中的含量有严格的限制。美国EPA已将萘、蒽、芘等16种PAHs确定为环境优先控制污染物，且总量要小于 0.2yg/L。中国将7种多环芳烃列为优先控制污染物，规定饮用水中苯并芘的质量浓度应小于0.01 μ g/L。目前，检测环境中芘等PAHs常用的方法有气相色谱法和高效液相色谱法。这些方法对样品检测的精密度和准确度都较高，但是前处理过程繁琐、耗时，不适于大批量快速检测和现场检测。因此，研究和开发一种简便、快速、灵敏的分析方法成为当务之急。免疫分析法是基于抗原与抗体的特异性结合反应而建立起来的分析方法。酶联免疫吸附试验法(ELISA)是免疫分析中的一项新技术，现在不仅应用于多种疾病的免疫诊断，还应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定。ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。目前有关运用ELISA来检测芘的报道甚少。合成合格的芘人工抗原是获得芘抗体的前提，而获得芘抗体也是建立芘的ELISA分析方法的重要环节。
技术实现思路
要解决的技术问题本专利技术要解决的技术问题是提供一种芘的人工免疫原PY-BSA的制备及用途，以克服现有检测技术中对芘样品预处理复杂、耗时、且需要大量有机溶剂萃取，以及在检测过程中要用到精密昂贵的检测仪器而不适宜推广使用和不利于当环境污染事件发生在野外时的现场快速检测等缺点。技术方案本专利技术的一种芘人工免疫原PY-BSA，结构式如下权利要求1. 一种芘人工免疫原PY-BSA，其特征在于该芘人工免疫原具有如下结构2.一种制备如权利要求1所述的芘人工免疫原PY-BSA的方法，包含以下步骤(1)芘半抗原的合成在干燥烧瓶中，加入摩尔比为1 1芘和丁二酸酐，待固体全部溶解用冰-盐浴冷却反应体系至_5°C，分三次加入摩尔比2. 2倍于芘的无水三氯化铝。恒温反应半小时，然后再于25°C反应Mh。反应完毕，反应物用盐酸调至PH值至酸性，然后加 NaOH调PH值至碱性，回流3h。过滤，滤液用盐酸调回至酸性。所得的粗产物用冰乙酸重结晶，活性炭脱色，干燥后得到淡黄色固体粉末。(2)芘人工免疫原的合成将溶有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和N，N’- 二环己基碳酰亚胺(DCC)的有机溶剂逐滴加入溶有芘半抗原的有机溶剂中，冰浴下搅拌反应4小时，离心分出的上清液，加入到溶有BSA的磷酸盐缓冲液(PBS)中，4°C反应20个小时，将溶液装入透析袋，用PH6 8磷酸盐缓冲液透析3 6d ；透析后离心分出上清液，即得芘人工免疫原 PY-BSA偶联物，分装后-20°C保存。3.根据权利要求2所述的一种芘人工免疫原PY-BSA的制备方法，其特征在于，所述步4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的芘半抗原的化学名称为 Y -氧代-I-芘丁酸，分子量302，分子结构式为5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤⑵中的有机溶剂是N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤O)中的半抗原、NHS、DCC摩尔比为1 1.5 1.5，半抗原、蛋白质摩尔比分别为100 1。7.一种芘人工免疫原PY-BSA的应用，通过免疫动物制备成芘特异性抗体，能与芘发生特异性免疫反应的免疫球蛋白IgG，用于现场检测水体、土壤及大气中痕量的芘。全文摘要本专利技术涉及一种芘人工免疫原PY-BSA及其制备方法和用途，制备(1)以丁二酸酐、芘、无水三氯化铝为原料，冰浴反应半小时，然后于25℃反应24h。加盐酸终止反应，再加NaOH回流，过滤，滤液中加入盐酸，重结晶，活性炭脱色，干燥，得淡黄色芘半抗原；(2)以芘半抗原、N-羟基琥珀酸亚胺和N，N’-二环己基碳酰亚胺为原料，DMF为溶剂，冰浴下搅拌反应4小时。然后将所得活化酯加入到牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液中，4℃下反应20小时，透析后离心分出上清液，制得到芘人工免疫原PY-BSA。本专利技术制备简便，成本低；芘人工免疫原PY-BSA通过动物制备成芘特异性抗体，从而用于环境中痕量芘的检测与监控。文档编号C07K14/765GK102241764SQ20111011501公开日2011年11月16日 申请日期2011年5月5日 优先权日2011年5月5日专利技术者李方实, 陈洪岩 申请人:南京工业大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种芘人工免疫原ＰＹ－ＢＳＡ，其特征在于该芘人工免疫原具有如下结构：其中ＢＳＡ为牛血清白蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李方实，陈洪岩，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：84
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