本发明专利技术涉及一种马铃薯致病疫霉Δ12去饱和酶基因PinD12的功能鉴定与应用，通过RT-PCR的方法，在马铃薯致病疫霉中分离到的与鱼油合成相关的Δ12去饱和酶基因PinD12，属于分子生物学和生物技术领域。经过酵母表达鉴定，确定它是一个新的Δ12去饱和酶基因，其编码的Δ12去饱和酶能够将长链多不饱和脂肪酸软油酸和油酸分别转化成十六碳二烯酸和亚油酸，可以用于植物特别是油料作物中油份改良。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及在马铃薯致病疫霉(Phytophthora infestans) Δ 12去饱和酶基因 PinD12的功能鉴定与应用，属于分子生物学和生物
技术介绍
必需脂肪酸是指人体生命活动必不可少，但人体自身不能合成，必需由食物供给的多不饱和脂肪酸。必需脂肪酸主要包括两种，α-亚麻酸和亚油酸。这两种脂肪酸可以在人体内通过其它一系列的酶催化，进一步转化成对人体具有重要生理功能的EPA和DHA等超长链多不饱和脂肪酸。在植物体内，亚油酸是由Δ 12去饱和酶催化油酸去饱和生成的。克隆、鉴定Δ 12 去饱和酶基因，对利用转基因技术，在油料作物中过量表达高催化活性的△ 12去饱和酶， 从而将其丰富的油酸转化成亚油酸，提高植物油的营养价值，或通过转基因技术在植物特别是油料作物生产EPA和DHA，具有重要的意义。本专利技术在马铃薯致病疫霉中克隆到编码Δ 12去饱和酶的cDNA序列，在酿酒酵母中诱导表达发现其编码产物能够将软油酸(16 1 Δ9)和油酸(18 1 Δ9)分别转化成十六碳二烯酸(16 2Δ9’12)和亚油酸(18 2Δ9’12)，证明了其具有Δ12去饱和酶活性，转化效率最高可分别达52. 和78.0%。
技术实现思路
本专利技术首先提取马铃薯致病疫霉总RNA，反转录成cDNA后，用引物 5，-GCAACCAAGTTCATCGCGTT3，和 5，-TCCACCTGACGACCTTAGAG-3，做 PCR，将扩增的片段胶回收后，连接到克隆载体PMD18-T中。生物信息学分析，得到的cDNA片段开放阅读框部分为 1197bp，编码398个氨基酸的多肽，具备去饱和酶和电子传递有关的三个组氨酸框结构域 (HxxxH、HxxHH和HxxHH)。该基因cDNA序列如下序列表(I)SEQ ID NO. 1 的信息(a)序列特征*长度1197碱基对*类型核酸*链型双链*拓扑结构线性(b)分子类型cDNA(c)假设否(d)反义否(e)最初来源马铃薯致病疫霉(Phytophthora infestans)(f)序列描述=SEQ IN NO. 11ATGGCGATCCTTAACCCGGAGGCAGAGTCAGCCGCCAAGGTGGCTACGCTGTCCGAAGCC61AAGCAACGTGAGCTTGCCGAGGCCGGCTACAAGCACGTGGAAGGAGCTCCGGCGCCGCTG121CCGCTGGATCTGCCGCATTTCTCTCTGCGGGATCTTCGCGCTGCCATTCCCAAGCACTGC181TTCGAGCGCTCCTTCATTACGTCCACGTACTACATGATAAAGAACCTTCTCACGTGTGCT241GCTCTCTTCTACGCGGCCACCTACATCGACCAGACTGGGAGCTTCGCCTACCTGCTCTGG301CCTGTGTACTGGTTCTTCCAGGGGAGCTACCTTACTGGCATCTGGGTTGTGGCGCATGAG361TGCGGCCACCAGGCCTACTGCTCCAGCGAGGTGGTGAACAACATGATCGGTCTCGTGCTG421CACTCGACGTTGCTTGTGCCGTACCACAGTTGGCGTATTTCACACCGCAAGCACCACTCC481AATACAGGCAGCTGCGAGAACGACGAGGTGTTCGTACCTGTCACTCGCTCTGTGATCGCC541AGCTCGTGGGACGAGACGCTCGAGGACTCACCACTCTACCAGCTCTACCGCATCGTGTAC601ATGCTGGTAGTGGGCTGGATGCCTGGCTACCTCTTCTTCAACGCGACGGGTCCGAGCAAG661TACTTGGGCAAGTCGCGCAGCCACTTCAACCCGTACTCGTCCATCTACTCAGACCGCGAG721CGTTGGATGATCGTGCTGAGCGACATCTTCCTCGTGCTTATGATCGGCGCTCTGGTCACA781CTGGTGTACACCTTCTCGTTCTACACAATGCTCAAGTTCTACGTCGTGCCCTACTTCATC841GTGAACGCCTACCTTGTGCTCATCACGTACCTGCAGCACACGGACACCTACATCCCGCAC901TTCCGAGACAGCGAGTGGAACTGGCTGCGCGGTGCGCTCTGCACGGTGGACCGCTCGTTC961GGCCCGTACCTCGATTCGGTAGTGCACCGCATCGTGGACACGCACATATGCCACCACATC1021TTCTCCMGATGCCGTTCTACCACTGCGAGGAAGCCACGAACGCTATCAAGCCGCTGCTG1081GGCAAGTTCTACCTCAAGGACGACACGCCCGTGCCGATCGCTCTGTGGCGATCTTACATT1141CACTGCAAGTTCGTCGAGGACGACGGCAAGATCGTGTTCTACAAGAACAAGCTCTAA(2) SEQ IN NO. 2 的信息(a)序列特征*长度398氨基菌I*类型氨基酸*链型单链*拓扑结构线性(b)分子类型蛋白质序列描述MET .Ala lie LeuAsn Pro Glu Ala Glu Ser Ala AlaLys Val Ala151015ThrLeu Ser GluAla Lys Gln Arg Glu Leu Ala GluAla Gly Tyr202530Lys His Val GluGly Ala Pro Ala Pro Leu Pro LeuAsp Leu Pro354045His Phe Ser LeuArg Asp Leu Arg Ala Ala lie ProLys His Cys505560Phe丨Glu Arg SerPhe lie Thr Ser Thr Tyr Tyr METlie Lys Asn657075Leu Gln Phe Cys Ile Trp Glu Ser Tyr Leu Arg Arg Gly Leu Val Phe Val Ile Phe GlyLeu Thr Gln Gly Gly Arg Asn Ser Arg Phe Ser Trp Ala Lys Leu Arg Asp Val Tyr LysThr Gly Gly His Leu Ile Asp Trp Ile Phe His MET Leu Phe lie Asp Arg Asp His PheCys Ser Ser Gln Val Ser Glu Asp Val Asn Phe lie Val Tyr Thr Ser Ser Thr Cys TyrAla 80 Phe 95 Tyr 110 Ala 125 Leu 140 His 155 Val 170 Glu 185 Tyr 200 Ala 215 Asn 230 Val 245 Thr 260 Val 275 Tyr 290 Glu 305 Phe 320 His 335 Glu 350 LeuAla Ala Leu Ty本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一个马铃薯致病疫霉Δ１２去饱和酶基因ＰｉｎＤ１２的应用，其特征在于该基因所编码的蛋白能够将长链多不饱和脂肪酸软油酸和油酸分别转化成十六碳二烯酸和亚油酸，可以用于植物特别是油料作物中油份改良。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：亓宝秀，李新征，孙全喜，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。