本发明专利技术公开了一种合成机体保护多肽(BPC?157肽)的方法，包括以三苯氯甲基树脂、4-甲基-三苯氯甲基树脂、4-甲氧基-三苯氯甲基树脂、2-氯-三苯氯甲基树脂或王树脂中的任何一种为起始原料，用DIC/HOBt或DIC/HOAt或BOP/HOBt或BOP/HOAt或HBTU/HOBt或HBTU/HOAt或HATU/HOBt或HATU/HOAt或HCTU/HOBt中的一种为缩合剂进行接肽反应，获得保护机体保护多肽(BPC?157肽)树脂，其后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得BPC?157粗品，再经C18(或C8)柱分离纯化，冷冻干燥后，制得机体保护多肽(BPC?157肽)纯品。该方法可用微波辐射以加快反应速度，缩短多肽合成周期，降低生产成本。本发明专利技术的方法制备的机体保护多肽(BPC?157肽)，具有原辅材料来源方便，工艺稳定，接肽收率高，质量可控，收率高，纯度高，生产成本低，周期短，可规模化生产等诸多优点，完全满足机体保护多肽(BPC?157肽)的应用要求。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肽工程领域，具体涉及机体保护多肽(BPC 157肽)的制备方法，尤其适用于放大生产。
技术介绍
BPC 157 (body protection compound)为胃液妝(gastric juice peptide)的片段，由15个氨基酸组成，分子量1419。氨基酸序列为Gly-Glu-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys-Pro-A la-Asp-Asp-AlaAly-Leu-Val (甘-谷-脯-脯-脯-甘-赖-脯-丙-天冬-天冬-丙-甘-亮-缬)。BPC 157具有细胞保护、抗溃疡和抗炎作用，其作用和细胞保护、NO系统、细胞迁移有关O
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种固相合成BPC157肽的制备方法，为机体保护多肽(BPC 157肽)的应用提供原料保障。包括手工固相多肽合成法和微波自动固相多肽合成法，以适用于放大生产。本专利技术提供的技术方案具体为一种BPC157肽的固相制备方法，包括以下步骤以三苯氯甲基树脂为合成树脂，包括4-甲基-三苯氯甲基树脂、4-甲氧基-三苯氯甲基树脂、2-氯-三苯氯甲基树脂或王氏树脂，以以上树脂中的任何一种为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有Fmoc保护的氨基酸，获的保护的BPC157肽树脂，其间依次脱去 Riioc 保护基团，用 DIC/HOBt 或 DIC/HOAt 或 B0P/H0Bt 或 B0P/H0At 或 HBTU/HOBt 或 HBTU/HOAt或HATU/HOBt或HATU/HOAt或HCTU/HOBt中的一种为缩合剂进行接肽反应，得保护的BPC157肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得BPC157肽粗品，并经C18或C8 色谱柱进行分离纯化，获得所需的BPC157肽纯品。更具体地，按照本专利技术，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护BPC157肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团的方法包括以下步骤(1)制备 Fmoe-Val-树脂选用三苯氯甲基树脂、4-甲基-三苯氯甲基树脂、4-甲氧基-三苯氯甲基树脂、 2-氯-三苯氯甲基树脂或王氏树脂中任一种树脂，用N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷浸泡10 60分钟，混合物中，树脂的重量体积浓度为5-20ml/g ；然后在上述的树脂中，加入 DIEA、DIC或DMAP、Fmoc-Val-OH, 10 50°C反应0. 5 5小时，再加入封闭试剂甲醇、苯甲酰氯或吡啶10 50°C反应0. 2-3小时，树脂用异丙醇、N, N-二甲基甲酰胺洗涤，获得 Fmoc-Val-树脂；DIEA或DMAP的摩尔数为树脂的2 20倍；Fmoc-Val-OH的摩尔数为树脂的1 10倍反应溶液中，树脂的浓度为0. 1 5ml/g ；(2)制备 Fmoc-Leu-Val-树脂在步骤(1)的Fmoc-Val-树脂中，加入脱帽试剂10 50°C反应5 30分钟，用真空泵抽干，重新加入脱帽试剂10 50°c反应10 60分钟，抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，加入用DMF溶解的Fmoc-Leu-0H、DIEA、TBTU/H0Bt或HBTU/ HOBt或BOP/HOBt的混合物，10 50°C反应10 60分钟，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3 次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Leu-Val-树脂；所说的脱帽试剂的组分和体积比为PIP DMF = 1 2_5，下同；Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的1-5倍；Fmoc-Val-树脂的重量与脱帽试剂的加入量的比例为5 20ml/g ；TBTU/HBTU/B0P的摩尔数为树脂的2_5倍；Η0ΒΤ/Η0ΑΤ摩尔数为树脂的2_5倍；(3)制备 Fmoc-Gly-Leu-Val-树脂在步骤⑵的Fmoc-Leu-Val-树脂中，加入脱帽试剂10 50°C反应5 30分钟， 用真空泵抽干，重新加入脱帽试剂10 50°c反应10 60分钟，抽干，用异丙醇洗涤3次， DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，加入用DMF溶解的Fmoc-Gly-OH、DIEA、TBTU/HOBt 或HBTU/HOBt或B0P/H0Bt的混合物，10 50°C反应10 60分钟，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Gly-Leu-Val-树脂；Fmoc-Gly-OH摩尔数为树脂的2 5倍；其余操作以及工艺条件同上；(4)制备 Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-树脂在步骤(3)的Fmoc-Gly-Leu-Val-树脂中，加入脱帽试剂10 50°C反应5 30 分钟，用真空泵抽干，重新加入脱帽试剂10 50°C反应10 60分钟，抽干，用异丙醇洗涤3 次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，加入用DMF溶解的Fmoc-Ala_0H、DIEA、TBTU/H0Bt 或HBTU/HOBt或B0P/H0Bt的混合物，10 50°C反应10 60分钟，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-树脂；Fmoc-Ala-OH摩尔数为树脂的2 5倍其余操作以及工艺条件同上；(5)制备 Fmoc-Asp (otBu) -Ala-Gly-Leu-Val-树脂在步骤⑷的Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-树脂中，加入脱帽试剂10 50°C反应5 30分钟，用真空泵抽干，重新加入脱帽试剂10 50°C反应10 60分钟，抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，加入用DMF溶解的Fmoc-Asp (otBu) -0H、 DIEA、TBTU/HOBt 或 HBTU/HOBt 或 B0P/H0Bt 的混合物，10 50 °C 反应 10 60 分钟， 用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得 Fmoc-Asp (otBu) -Ala-Gly-Leu-Val-树月旨；Fmoc-Asp (otBu) -OH摩尔数为树脂的2 5倍其余操作以及工艺条件同上； (6)制备 Fmoc-Asp (otBu) -Asp (otBu) -Ala-Gly-Leu-Val-树脂在步骤(5)的 Fmoc-Asp (otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-树脂中，加入脱帽试剂 10 50°C反应5 30分钟，用真空泵抽干，重新加入脱帽试剂10 50°C反应10 60分钟，抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，加入用DMF溶解的 Fmoc-Asp (otBu) -OH.DIEA.TBTU/HOBt 或 HBTU/HOBt 或 BOP/HOBt 的混合物，10 50°C反应 10 60分钟，用真空泵抽干，用异丙醇洗涤3次，DMF洗涤3次，重蒸过的DMF洗涤2次，抽干，获得 Fmoc-Asp (otBu) -Asp (otBu) -Ala_GIy-Leu-Val-树月旨；Fmoc-Asp (otBu) -OH摩尔数为树脂的2 5倍其余操作以及工艺条件同上；(7)制备 Rnoc-Ala-Asp (otBu) -Asp (otBu) -Ala-Gly-本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．制备ＢＰＣ１５７肽的方法，其特征在于包括如下步骤：以三苯氯甲基树脂、４－甲基－三苯氯甲基树脂、４－甲氧基－三苯氯甲基树脂、２－氯－三苯氯甲基树脂或王氏树脂其中的任何一种为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有芴甲氧羰酰基保护的氨基酸，获得保护的ＢＰＣ１５７肽树脂，其间依次脱去芴甲氧羰酰基保护基团，用Ｎ，Ｎ－二异丙基碳化二亚胺／１－羟基－苯并－三氮唑、Ｎ，Ｎ－二异丙基碳化二亚胺／Ｎ－羟基－７－偶氮苯并三氮唑、７－氮杂苯并唑－１－基－氧－（三－（二甲胺基）膦）六氟磷酸盐／１－羟基－苯并－三氮唑、７－氮杂苯并唑－１－基－氧－（三－（二甲胺基）膦）六氟磷酸盐／１－羟基－苯并－三氮唑／Ｎ－羟基－７－偶氮苯并三氮唑、苯并三氮唑－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四甲基脲六氟磷酸酯／１－羟基－苯并－三氮唑、苯并三氮唑－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四甲基脲六氟磷酸酯／Ｎ－羟基－７－偶氮苯并三氮唑、２－（７－偶氮苯并三氮唑）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四甲基脲六氟磷酸酯／１－羟基－苯并－三氮唑、２－（７－偶氮苯并三氮唑）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四甲基脲六氟磷酸酯／Ｎ－羟基－７－偶氮苯并三氮唑或６－氯苯并三氮唑－１，１，３，３－四甲基脲六氟磷酸酯八－羟基－苯并－三氮唑中的一种为缩合剂进行接肽反应，得保护的ＢＰＣ１５７肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得ＢＰＣ１５７肽粗品，任选经Ｃ１８或Ｃ８色谱柱进行分离纯化，获得所说的ＢＰＣ１５７肽。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王增禄，杨赛，张英起，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：87
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