本发明专利技术提供了利用Bv8和EG-VEGF多肽及核酸促进造血的方法。还提供了筛选Bv8和EG-VEGF活性的调解物的方法。此外，提供了利用Bv8和EG-VEGF多肽或Bv8和EG-VEGF拮抗剂的治疗方法。
【技术实现步骤摘要】
Bv8和/或EG-VEGF促进造血的用途本申请是申请号为200480013161. 9，申请日为2004年3月12日，专利技术名称为“Bv8 和/或EG-VEGF促进造血的用途”的专利申请的分案申请。GENENTECH, INC等，美国国民或居民，提交该PCT申请，要求2003年3月12日提交的美国临时申请60/妨4，462和2003年10月14日提交的美国临时申请60/511，390的优先权。
技术介绍
Bv8是一种小分子蛋白，它最初是从青蛙Bombina variegata的皮肤分泌物中分离得到的(Mol lay 等 Eur. J.Pharmacol. 374 :189-196 (1999))。(Mo 11 ay et al. ,Eur. J. P/ MMco.，374 :189-196(1999))。Bv8属于包括内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF) 在内的结构关联肽种类(LeCouter et al.，nature，412 :877-884(2001))。这些分子的明显不同的结构基序是辅脂肪酶-折叠，其中10个半胱氨酸残基在保守区(conserved span) 内形成5个二硫桥。Bv8和EG-VEGF是血管内皮生长因子(VEGF)同系物，VEGF是已知在肿瘤生长和存活中有重要作用的血管生成因子。BvS和EG-VEGF都被鉴定为对特定组织的内皮细胞具有选择性活性的血管生成因子。EG-VEGF促进培养的肾上腺毛细血管内皮细胞的增殖，迁移， 存活以及排列(fenestration)并诱导卵巢和睾丸中的血管生成。LeCouter et al.，2001， Nature, 412 :877-884 ；LeCouter et al. , 2003, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100 :2685_2690。和EG-VEGF—样，BvS促进肾上腺皮质毛细血管内皮细胞的增殖，存活和迁移， 并诱导睾丸中的血管生成。LeCouter et al. , 2003, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100 2685-2690.睾丸显示相对较高的内皮细胞更新率。因此，Bv8和EG-VEGF以及其它因子诸如VEGF被认为在睾丸血管的完整性保持及其增殖调节中有重要作用。VEGF是已知在肿瘤生长和存活中具有重要作用的血管生成因子。由于BvS和 EG-VEGF是对特定组织具有选择性活性的血管生成因子，还需要对所述分子进行进一步的表征。
技术实现思路
本专利技术基于对Bv8和EG-VEGF在造血干细胞(HSC)，系定向型血液祖细胞 (lineage-committed blood progenitor cell)以及淋巴细胞中的新的表达和活性的鉴定。具体如本文所述，Bv8, EG-VEGF，及其受体表达于骨髓HSC，外周血白细胞(PBL)，以及许多血液恶性细胞系中。体外和体内试验显示BvS和EG-VEGF能够促进骨髓单个核细胞以及脾来源的祖细胞的集落形成，增加血白细胞的群体，并促进B淋巴细胞和T淋巴细胞的活化。因此，BvS核酸和多肽，EG-VEGF核酸和多肽，或其组合可用于多种分析以及造血相关疾病、嗜中性粒细胞减少症(neutropenia)、免疫缺陷疾病以及自身免疫病的诊断和治疗中。Bv8和EG-VEGF的受体见于骨髓造血干细胞(⑶34+)和系定向型祖细胞(⑶34+)。 BV8和/或EG-VEGF诱导⑶34+髓样(myeloid)及淋巴样(lymphoid)祖细胞的增殖。该增殖导致白细胞数目增加，所述白细胞包括B细胞，T细胞，具体是嗜中性粒细胞。BV8，EG-VEGF， 及其激动剂可用于治疗，例如用于免疫缺陷疾病的治疗中，所述免疫缺陷疾病诸如淋巴细胞减少症，嗜中性粒细胞减少症等。这些分子也可用于促进骨髓抑制，例如化疗诱导的骨髓抑制之后的造血恢复。现在发现各种白血病细胞，诸如ALL，AML, MPD, CML以及MDS细胞表达BV8和 EG-VEGF的受体。生长因子BV8和/或EG-VEGF的拮抗剂对抑制这些白血病细胞的增殖有用。令人吃惊的发现是，BV8和/或EG-VEGF也诱导B和T细胞活化。这些分子的激动剂和拮抗剂可治疗性地用于调节免疫反应。Bv8，EG-VEGF，及其激动剂可用于并诱导免疫受损的个体例如HIV患者中的T细胞增殖及活化。这些分子的拮抗剂可治疗性地用于抑制免疫反应，例如与自身免疫病相关的免疫反应。骨髓细胞的增殖一方面，本专利技术提供诱导骨髓细胞增殖的方法。一个实施方案中，所述方法包括使 BM细胞与细胞增殖诱导有效量的Bv8，EG-VEGF，或其组合接触。另一实施方案中，所述方法包括将编码Bv8，EG-VEGF,或其组合的多核苷酸序列导入BM细胞，所述多核苷酸序列的量可有效诱导BM细胞增殖。在一个实施方案中，Bv8和/或EG-VEGF是天然序列Bv8和/或EG-VEGF多肽。优选天然序列BvS多肽是天然人BvS多肽。天然人BvS多肽可包含氨基酸序列SEQ ID NO 2 或氨基酸序列SEQ ID NO :4。在另一实施方案中，天然序列BvS包含氨基酸序列SEQ ID NO 6。在另一实施方案中，BvS能与肝素结合。优选，天然序列EG-VEGF多肽是天然人EG-VEGF 多肽。天然人EG-VEGF多肽可包含氨基酸序列SEQ ID NO :8。在另一实施方案中，天然序列EG-VEGF包含氨基酸序列SEQ ID NO :10。在另一实施方案中，Bv8和/或EG-VEGF是免疫粘附素。在另一实施方案中，BvS和/或EG-VEGF是嵌合的。在一个实施方案中，Bv8/EG_VEGF促进BM造血干细胞和/或系定向型祖细胞的增殖。所述系定向型祖细胞通常是髓系和/或淋巴系。在另一方面，本专利技术提供了在需要具体血细胞群的患者中维持所述细胞群的方法。在一个实施方案中，所述方法包括使所述细胞与能够有效促进所述细胞增殖的量的 Bv8，EG-VEGF，或其组合接触，从而维持其群体。在另一个实施方案中，所述方法包括将编码 Bv8, EG-VEGF，或其组合的多核苷酸序列引入所述细胞，所述多核苷酸的量能有效促进细胞存活。所述方法还包括将编码VEGF的核酸引入所述细胞中。一方面，所需具体细胞类型是白细胞，优选嗜中性粒细胞，B淋巴细胞，⑶4+T淋巴细胞，和/或⑶8+T淋巴细胞。另一方面，所述患者患有嗜中性粒细胞减少症，淋巴细胞减少症(lymphopenia)，或免疫缺陷疾病， 并因此需要嗜中性粒细胞，B淋巴细胞，⑶4+T淋巴细胞，和/或⑶8+T淋巴细胞。异常造血的治疗另一方面，本专利技术提供治疗哺乳动物中与异常造血相关的疾病的方法。一个实施方案中，所述方法优选包括将包含Bv8，EG-VEGF,或其组合，或其激动剂或拮抗剂的组合物给药哺乳动物，所述组合物的量足以治疗所述疾病。所述哺乳动物优选人。一方面，本专利技术任意方法中所用包含Bv8，EG_VEGF，或其组合的组合物包含天然序列BvS多肽和/或天然序列EG-VEGF多肽。优选，所述天然序列BvS多肽是天然人BvS多肽。天然人BvS多肽可包含氨基酸序列SEQ ID NO 2或氨基酸序列SEQ ID NO :4。另一个实施方案中，天然序列BvS包含氨基本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．Ｂｖ８多肽，编码Ｂｖ８多肽的多核苷酸，ＥＧ－ＶＥＧＦ多肽，编码ＥＧ－ＶＥＧＦ多肽的多核苷酸，或其组合在制备用于诱导骨髓细胞，淋巴系祖细胞（ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ）及其子代的增殖的药物中的用途。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：纳波利昂·费拉拉，珍妮弗·莱库特，
申请(专利权)人：健泰科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：US
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