【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种烟草烟碱转化株的鉴定方法，特别是涉及。
技术介绍
目前研究结果表明，烟草中的生物碱主要有四种烟碱、降烟碱、新烟草碱和假木贼碱四种。普通烟草属烟碱积累型，以烟碱为主，其含量占总生物碱的90%以上，降烟碱是第二大生物碱，含量一般只占总生物碱的3-5%，另外两种生物碱仅占很少部分。烟碱含量的高低是决定烟叶感官品质的重要因素，一般要求烟碱含量适宜，以达到生理强度适中、吃味醇和、刺激性小的目的。降烟碱亦称去甲基烟碱，主要由烟碱在去甲基酶的作用下脱甲基形成。由于降烟碱易于在烟叶调制和陈化过程中发生一系列亚硝化和酰化等生化反应，形成具有致癌作用的烟草特有亚硝胺(TSNAs)的主要成分N-亚硝基降烟碱(NNN)及麦斯明、 甲酰降烟碱、乙酰降烟碱等酰化产物，导致烟叶有害成分增加和香味品质下降，直接影响着吸烟者的身体健康。因此，烟叶减害、降低烟草特有的亚硝胺含量成为目前国际烟草界的共识和主攻方向，一直是研究的重点和热点。我国对烟碱转化的研究起于世纪90年代末期，研究结果表明，中国白肋烟、马里兰烟和香料烟均不同程度的存在烟碱转化株比例、降烟碱含量和烟碱转化率过高的问...
【技术保护点】
１．一种烟草烟碱转化株苗期的分子生物学鉴定方法，其特征在于具体步骤依次如下：Ａ、对需鉴定的烟苗逐个挂牌以标识，然后于苗期对每个被标识的烟苗进行鲜叶取样，每个烟苗取样量为１－２个叶片，取好的鲜叶样品用密封袋装好，并做好与原烟苗一致的标识，迅速放入冰盒或超低温冰箱中保存；Ｂ、提取基因组ＤＮＡ：取出每个密封袋中的鲜叶样品，采用ＣＴＡＢ法提取各样品烟苗基因组ＤＮＡ，纯化后保存备用；Ｃ、对基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ反应：用紫外分光光度计测定Ｂ步骤中提取的烟苗基因组ＤＮＡ的浓度，然后取各样品烟苗基因组ＤＮＡ溶液，将其浓度稀释成５０ｎｇ／μＬ作为反应模板进行ＰＣＲ反应，ＰＣＲ反应中的特异引物...
【技术特征摘要】
1.一种烟草烟碱转化株苗期的分子生物学鉴定方法，其特征在于具体步骤依次如下A、对需鉴定的烟苗逐个挂牌以标识，然后于苗期对每个被标识的烟苗进行鲜叶取样， 每个烟苗取样量为1-2个叶片，取好的鲜叶样品用密封袋装好，并做好与原烟苗一致的标识，迅速放入冰盒或超低温冰箱中保存；B、提取基因组DNA取出每个密封袋中的鲜叶样品，采用CTAB法提取各样品烟苗基因组DNA，纯化后保存备用；C、对基因组DNA进行PCR反应用紫外分光光度计测定B步骤中提取的烟苗基因组DNA 的浓度，然后取各样品烟苗基因组DNA溶液，将其浓度稀释成50ng/ μ L作为反应模板进行 PCR反应，PCR反应中的特异引物序列正向引物5’ -ATGGTTTTTCCCATAGAAGCC-3，，反向引物5，-TCGAGGTCGACGGTATC-3，；D、PCR产物的琼脂糖凝胶电泳及电泳结果的读取将步骤C中所获得的PCR产物与溴酚蓝-甘油溶液以4 1的体积比混合，注入样品槽，同时注入对照ladder进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后取出凝胶，清除表面的溴化乙锭溶液，然后将胶板放入凝胶成像仪的观察板上，利用电脑成像系统在波长254nm紫外灯下进行观察，拍照记录下电泳图谱，并保存以进行比较分析；E、转化株的鉴定与淘汰将通过PCR特异引物扩增已知高转化株所获得的分子带谱数值作为比较分析的参照数据，其具体数值的大小介于1700-1800bp之间；将步骤D中样品 PCR扩增所得的分子带谱与两边对照ladder带谱进行对比，其中能扩...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡长春，李宗平，李进平，杨树，杨春雷，林国平，朱天，罗晓敏，
申请(专利权)人：湖北省烟草科研所，
类型：发明
国别省市：83
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