血液制品储存和维持的改善制造技术

红细胞和血小板浓缩物细胞膜的维持通过添加１ｍＭ至１０ｍＭＬ－肉碱及其衍生物而得以改善。这种改善可以延长包装红细胞和血小板浓缩物的有效期。此外，经过如此处理的制品输入病人体内后其循环半寿期延长。这种方法改善了膜维持，使得对密闭容器内血液制品进行辐照以基本灭菌和破坏其中的白细胞成为可能。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种改善血液制品包括包装的红细胞(RBC)、血小板等储存稳定性(包括抗溶血及提高活性)的方法。具体地，通过将血液制品储存在包含有效剂量的L-肉碱或链烷酰L-肉碱的悬浮液中，提供了一种延长这些制品的存活和其对诸如辐照等膜破坏因素的抗性的方法。专利技术背景国内和国际血液供应问题正日益受到人们的关注。就现存血液供应的完整性与可信性以及是否能够建立更大规模的血库等问题，都已经列入议事日程。其中原因之一是血液制品保存稳定的时间相对较短。目前，作为输血及其它类似用途血液制品的主要形式，包装红细胞(也就是红细胞浓缩物，简称RCC)的保存期只有42天。超过这一时限，血液制品中ATP水平明显下降，同时伴随有pH显著降低，这是缺乏活性的显著特征，即使偶存活性，输血后其循环寿命也将极短。在体内全血也不能长时间储存。对于血小板来说，当前其储存期更短，22℃只能保存5天。血小板浓缩物(PC)和红细胞之间这种储存稳定性的差别主要是由于血小板进行的代谢反应造成的，这部分是因为血小板中存在线粒体而红细胞中没有。一段时间后，两种血液制品在出现ATP下降、pH降低的同时伴随着乳酸的产生，血小板中的线粒体由于糖酵解作用加剧此情况的恶化。同时，人们对于血液资源的可靠性和完整性也日益重视。特别是不断有被细菌或其它微生物因子或病毒污染的血液资源被检测出来。这种情况在那些缺乏精密采血手段和保存方法的国家更为严重。虽然通过添加药物可以降低收集的血液制品的污染，但那样会对回输给受血病人不利。一种较好的替代方法是对经过包装的血液制品，一般是用强化乙烯塑料容器，进行辐照处理。但这种辐照处理会由于破坏红细胞和血小板的储存而导致这些细胞功能丧失。另外，一小部分但日益增多的受血人群还面临一种名为输血相关的移植物抗宿主疾病(TAGVHD)致命疾病的威胁，这种疾病是由于存在有活力的同种异体白细胞引起的。这种综合症较典型的发生在免疫抑制病人身上，如癌症病人和骨髓移植患者，但也可以在具有限制性人类白细胞座系A(HLA)多态型的免疫正常人群中发生。更多的注意力投向寻找延长储存稳定性方法上来。美国专利5466573号引述了一种延长血小板浓缩物储存期的方法，该专利涉及提供带有醋酸盐离子的血小板浓缩物，醋酸盐既可以作为氧化磷酸化的底物也可以作为缓冲剂中和由于乳酸产生而引起的pH降低。这种方法不能直接解决溶血和膜降解等问题。另外一种可供选择的方法见于已公知的美国专利5496821。这件专利中，将全血制品储存于含L-肉碱(LC)或是其链烷酰衍生物的制剂中。但此专利没有描述其对血液产品如血小板或红细胞悬浮液的作用，也至少没有涉及LC对血浆性质的影响。前面已经提到，医学界越来越重视微生物因子或病毒对血液制品的污染问题。关于污染，血液制品灭菌和提高可靠性的一种方法是辐照血液制品。一般说来，约25厘戈瑞(cG)的伽玛射线辐照剂量照射密封在塑料、玻璃或其它容器中的血液制品即可达到令人满意的效果。遗憾的是，辐照能引起细胞膜损坏造成红细胞溶血。对于包括全血、包装红细胞和血小板等在内的血液制品的辐照都面临这些问题。因此本领域技术人员需要提供一种延长红细胞和血小板活性和输血后半寿期的方法。另外本领域技术人员要找到如何使包括全血、包装红细胞和血小板在内的血液制品经受辐照而没有大量膜破坏、损伤和溶血的途径。专利技术概述申请人经过全面研究发现，红细胞及血小板经储存或接受辐照出现的膜破坏作用可以通过将血液制品悬浮在常规保藏液(如AS-3)中，其含有0.25-50mM(或者更高)的L-肉碱或其链烷酰衍生物，而大大延迟和抑制。申请人的发现是基于这样一种认识，即绝大多数血液制品变质过程中常常伴随着的ATP水平和pH值下降都可归因于膜破坏和溶血。通过脂的再酰化及部分通过L-肉碱可进行膜的维持和修复工作，通过创造性的研究工作已确认红细胞及其它类似血液制品中不可逆的摄取L-肉碱。附图简述附图说明图1.在对照和LC条件下保存42天后不同供血者的红细胞的输血后寿命值。箭头分别表示对照和LC保存的红细胞的平均值±SD。图中上部所列为精确计算出的p值。图2.在血液储存过程中不同储存周数红细胞肉碱的含量。肉碱的分析如材料与方法部分所述。每个值为三次重复实验的平均值。各次实验间误差不超过7％。空心圆圈代表单独用AS-3储存红细胞；实心圆圈代表红细胞储存于含补加LC(5mM)的AS-3中。专利技术详述本专利技术利用L-肉碱及其链烷酰衍生物作为支持血液制品中细胞膜维护、修复和抑制溶血的试剂。其中链烷酰L-肉碱包括乙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基和特别是丙酰基L-肉碱。在此，一般用LC指代此家族以L-肉碱为代表范例。此处已经提到过的链烷酰L-肉碱以及其药学可接受的盐均可以替代L-肉碱。向包括红细胞和血小板浓缩物的血液制品中加入LC时需要有效剂量的LC以实现膜维护、修复和抑制溶血。已进行的研究表明(包括下面实施例所列的结果)，对于绝大多数供血来讲最低的有效剂量范围为约0.25mM-0.5mM。这里所定的上限主要是从实用性角度出发而非从生理角度。即使浓度达到甚至超过50mM，人仍能轻松耐受。将毒理作用因素和渗透作用因素综合考虑后的值可以接受。优选的浓度范围在1-30mM内。1-10mM或更高的浓度范围都适用，在4-6mM浓度范围获得的值有显著性差异。本专利技术的作用包括延长活力、延长其输血后的循环半寿期均可能具有高度供体依赖性。因此，一般来说LC的有效剂量在0.5-50mM范围之间。但本领域内的普通技术人员很可能会根据供血者的特殊性在上限和/或下限方向拓宽这个范围。这种范围的拓宽不需要创造性劳动。LC存在于一般是用于提供缓冲作用的常规支持溶液(稳定化溶液)中。一般常用的此类溶液有ACED(柠檬酸-柠檬酸钠-葡萄糖)、CPD(柠檬酸盐-磷酸盐-葡萄糖)和其改进形式，包括CPD2/A-3以及相关的组分。这些组分一般包含碳水化合物如葡萄糖或甘露糖醇、至少一种磷酸盐、一种柠檬酸盐和其它平衡盐类。通常LC易于溶解，可在需要的范围内自由添加到这些组分中。美国专利5496821号所述及的合适溶液在此引入作为参考。然而，其它不同于这些常规使用的支持液的溶液也可以使用，其中包括人造血浆和其它生理上可接受的溶液，只要它们含有根据本专利技术的LC即可。在支持液中最重要的组成成分是LC。下述体内、体外的实验结果阐明，当LC加入诸如红细胞和PC等血液制品悬浮液中，其可延长有效期和相应的保存期以及输血后在受血者体内的循环寿命。在实验中利用的是LC，其它的链烷酰L-肉碱也可以使用。下面特别重要的是通过改善细胞膜的维持(包括修复)和抑制溶血获得了改善的品质。材料与方法研究设计1存在和不存在LC条件下红细胞体内和体外储存质量的评估受试者受试人群为男性或女性，年龄在18-65岁之间，没有已知的精神和身体残疾，没服用可能影响红细胞活力的药物。征募的志愿者均达到美国血库协会标准和美国国立红十字会血液服务指令第二章，联邦登记代码所列的常规同种异体供血者的标准。本研究经HamptonRoads医学院公共机构审查委员会批准，并且在参与本研究之前获得受试者同意。每一个献血者间隔72天采血一次，首次采血随机分成测试臂或对照臂。血液储存系统标准CP2D/AS-3系统(M本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改善红细胞或血小板浓缩物经储存后的膜维持和抑制溶血的方法，包括将所述的红细胞或血小板浓缩物悬浮于支持溶液，该支持溶液含有选自Ｌ－肉碱、链烷酰Ｌ－肉碱或其药学可接受的盐类及其混合物的一种肉碱制品，与缺少所述的Ｌ－肉碱、链烷酰Ｌ－肉碱或其药学可接受的盐类及其混合物的相同支持溶液相比，所含肉碱的量可有效提高所述的红细胞或血小板浓缩物维持红细胞或血小板浓缩物膜的能力，并籍此抑制溶血。

【技术特征摘要】
US 1997-4-16 08/840,7651.一种改善红细胞或血小板浓缩物经储存后的膜维持和抑制溶血的方法，包括将所述的红细胞或血小板浓缩物悬浮于支持溶液，该支持溶液含有选自L-肉碱、链烷酰L-肉碱或其药学可接受的盐类及其混合物的一种肉碱制品，与缺少所述的L-肉碱、链烷酰L-肉碱或其药学可接受的盐类及其混合物的相同支持溶液相比，所含肉碱的量可有效提高所述的红细胞或血小板浓缩物维持红细胞或血小板浓缩物膜的能力，并籍此抑制溶血。2.权利要求1的方法，其中所述的L-肉碱、链烷酰L-肉碱及其混合物的浓度范围在0.25-50mM之间。3.权利要求2的方法，其中所述的L-肉碱、链烷酰L-肉碱及其混合物的量在1-20mM之间。4.一种含支持溶液中的红细胞的密闭容器，所述的支持溶液包含范围在0.25-50mM之间的L-肉碱、链烷酰L-肉碱及其混合物。5.一种含稳定化溶液中的红细胞的密闭容器，所述的稳定化溶液包含量在0.25-50mM之间的L-肉碱、链烷酰L-肉碱及其混合物。6.权利要求4所述的密闭容器，其中该容器密封后经辐照以基本上灭菌和破坏其中的白细胞。7.权利要求5所述的容器，其中该容器密封后经辐照以基本灭菌和破坏其中的白细胞。8.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：S多拖利，
申请(专利权)人：希格马托制药工业公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]