The invention relates to a Protein Elicitor and a preparation method thereof, which can be used for inducing disease resistance of plant system, and belongs to the field of biotechnology. By using ammonium sulfate precipitation, to obtain a coarse protein elicitor by ion exchange chromatography and hydrophobic interaction chromatography purification was carried out, obtained a at home and abroad were reported to the 90kDa protein elicitor. The elicitor can be used to induce broad-spectrum disease resistance of tobacco and cabbage. The concentration is 0.1 ~ 10nM. Control effect of more than 80%. \ue5cf
【技术实现步骤摘要】
本专利技术一种诱导植物系统抗病性的激发子,属于生物技术研究领域。专用于从棉疫病菌中制备一种蛋白类激发子,用于防治烟草和小白菜的多种病害。真菌是一种重要的激发子生物来源。目前已经报道的有来自于酵母细胞壁的寡糖、疫霉属真菌分泌的分子量为10kDa的蛋白类激发子elicitin等。这些激发子的共同特点是在植物上引起的过敏性反应,具体表现为接种区植物细胞的快速死亡,形成局部枯斑,从而阻止病原菌进一步扩展并杀死病原菌。但到目前为止,未有文献和专利报道从棉疫病菌中分离出本专利申请的一种新的蛋白激发子。技术方案1、激发子特性本专利技术所提供的一种能诱导植物系统抗病性的激发子,来源于棉花疫霉菌,属蛋白类,分子量为90kDa,命名为PB90,对酸碱和热稳定。对蛋白酶ProteaseK敏感。N-端氨基酸序列为AVNN。该激发子定位于疫霉菌的细胞壁上。该激发子引起烟草过敏性反应的浓度为0.1-10mM。该激发子是通过以下制备方法获得的2、激发子提取与纯化将棉疫病菌在Polich’s培养液(每升含0.5g KH2PO4,0.25g MgSO4·7H2O,1g天冬酰胺酸,1mg硫胺,0.5g酵母浸膏,20g葡萄糖)中培养10d后,采用双层滤纸过滤,加入硫酸铵至70%(w/v),在4℃过夜,12000g的离心力下离心10分钟,收集粗蛋白沉淀,用1%体积的Tris.HCl(7.4)悬浮,即为粗蛋白激发子;用快速蛋白液相色谱FPLC纯化阴离子交换色谱,色谱柱为SepharoseQFF,流动相A,20mmol/L Tris.HCl pH6.0;B,A+1mol/L NaCl;流速2.5ml/ ...
【技术保护点】
一种诱导植物过敏性反应的激发子,其特征在于:激发子来源于棉花疫霉菌(Phytophthora boehmeriae),属蛋白类,分子量为10~100kDa,对酸、碱、热稳定;对蛋白酶ProteaseK敏感,N-端氨基酸序列为AVNN,该激发子引起烟草过敏性反应的浓度为0.1-10mM;该激发子的制备方法包括:将棉疫病菌在Plich′s培养液(每升含0.5gKH↓[2]PO4,0.25gMgSO↓[4].7H↓[2]O,1g天冬酰胺酸,1mg硫胺,0.5g酵母浸膏,20g葡 萄糖)中培养10天后,采用双层纱布过滤,再采用双层滤纸过滤,加入硫酸铵至70g/100mL,在4℃过夜,12000g离心10分钟,收集粗蛋白沉淀,用1%体积的Tris.HCl,PH为7.4,悬浮,即为粗蛋白激发子;采用快速蛋白液相色谱F PLC纯化:阴离子交换色谱,色谱柱SepharoseQFF,流动相:A,20mmol/L Tris.HCl pH6.0;B,A+lmol/L NaCl;流速:2.5ml/min,30min梯度洗脱,收集活性峰:将不同收集管中的蛋白溶液分别脱盐后,稀释100倍,注射 ...
【技术特征摘要】
1.一种诱导植物过敏性反应的激发子,其特征在于激发子来源于棉花疫霉菌(Phytophthora boehmeriae),属蛋白类,分子量为10~100kDa,对酸、碱、热稳定;对蛋白酶ProteaseK敏感,N-端氨基酸序列为AVNN,该激发子引起烟草过敏性反应的浓度为0.1-10mM;该激发子的制备方法包括将棉疫病菌在Plich′s培养液(每升含0.5gKH2PO4,0.25g MgSO4·7H2O,1g天冬酰胺酸,1mg硫胺,0.5g酵母浸膏,20g葡萄糖)中培养10天后,采用双层纱布过滤,再采用双层滤纸过滤,加入硫酸铵至70g/100mL,在4℃过夜,12000g离心10分钟,收集粗蛋白沉淀,用1%体积的Tris.HCl,PH为7.4,悬浮,即为粗蛋白激发子;采用快速蛋白液相色谱FPLC纯化阴离子交换色谱,色谱柱Sepharos...
【专利技术属性】
技术研发人员:王源超,张正光,胡东维,
申请(专利权)人:南京农业大学,
类型:发明
国别省市:84[中国|南京]
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