一种克隆类病毒全基因序列的方法技术

本发明专利技术公开了一种克隆类病毒全基因序列的方法，包括以下步骤：1)类病毒基因组RNA的获得；2)以步骤1)得到的类病毒基因组RNA为模板，通过反转录，得到引物之间的目标序列与至少一个类病毒全基因组序列长度的cDNA；3)以步骤2)得到的cDNA为模板，进行PCR扩增，回收、纯化PCR产物，克隆、测序；4)通过比对、分析序列获得类病毒全长基因序列。本发明专利技术是一种高准确率、一次完成类病毒全基因序列克隆的方法，且能用一对引物克隆马铃薯纺锤块茎类病毒属(Pospiviroid)中的大部分类病毒种的全基因序列，为克隆类病毒全基因序列提供了新的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于类病毒的基因工程领域，涉及一种克隆植物类病毒全基因序列的方法，特别是涉及克隆马铃薯纺锤块茎类病毒属(Pospiviroid)全基因序列的方法。
技术介绍
类病毒(viroid)是迄今为止发现的最小病原物，是一类单链共价闭合环状的裸露RNA分子，由246 400个核苷酸组成，是目前已知的最小的能够自我复制的遗传单位， 不编码任何蛋白质，因此是一类不同于病毒的低分子致病因子，危害高等植物可造成严重经济损失。目前发现的类病毒有30种，其中有26种属中央保守区、无核酶活性的马铃薯纺锤块茎类病毒科(Pospiviroidae)和4种属无中央保守区、有核酶活性的鳄梨日斑类病毒科(Avsunviroidae)。马铃薯纺锤块茎类病毒科(Pospiviroidae)可分为马铃薯纺锤块茎类病毒属(Pospiviroid)、苹果锈果类病毒属(Apscaviroid)、锦紫苏类病毒属 (Coleviroid)、椰子死亡类病毒属(Cocadviroid)、啤酒花矮化类病毒属(Hostuviroid)等 5个属，其中马铃薯纺锤块茎类病毒属(Pospiviroid)为最大的属，有PSTVd、TCD本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种克隆类病毒全基因序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：１）类病毒基因组ＲＮＡ的获得；２）以步骤１）得到的类病毒基因组ＲＮＡ为模板，通过反转录，得到引物之间的目标序列加上至少一个类病毒全基因组序列长度的ｃＤＮＡ；３）以步骤２）得到的ｃＤＮＡ为模板，进行ＰＣＲ扩增，回收、纯化ＰＣＲ产物，克隆、测序；４）通过比对、分析序列获得类病毒全长基因序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡新喜，熊兴耀，李炎林，何长征，宋勇，刘明月，秦玉芝，黄科，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：43