生物衍生骨复合四环素缓释体制造技术

本发明专利技术公开了一种生物衍生骨复合四环素缓释体及制备方法，该缓释体包括生物衍生骨支架、四环素和包被体，其特征是每克该缓释体含有６２μｇ～１２２μｇ的四环素；生物衍生骨经四环素溶液浸泡，冷冻，干燥，包被，再冷冻干燥，消毒，即可制得生物衍生骨复合四环素缓释体，该缓释体具有比生物衍生骨具有更明显的成骨效应。体外释放盐酸四环素有效浓度可维持２周，临床应用安全，来源容易，价格低，易于推广使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及骨组织修复的材料，特别是含有四环素的骨组织修复的材料。
技术介绍
目前，用于促进骨组织修复材料的成骨能力的主要方式是复合促进骨生长的生长因子，其中研究最多的是骨形态发生蛋白系列(BMP2，4，7)和转化生长因子TGF-β，这些因子均为动物骨提取或经基因重组获得，除BMP2已被美国FDA批准用于临床外，其它均未被批准用于临床。因为促进骨生长的生长因子体内应用的最大问题是如何控制其有效剂量及担心过度表达带来的全身及局部问题，比如骨形态发生蛋白系列(BMP)由于使用剂量过大，过度表达，易导致植入部位过度增生，形成骨肉瘤，临床安全性受到质疑。申请号为00132082.3，名称为“生物衍生组织工程骨及其制备方法”公开了三种生物衍生骨，为骨组织修复的材料，它们是将同种异体或异种(猪、牛)骨，经过物理化学、生物等方法处理后，去掉细胞、脂肪，部分蛋白或无机成份制得的一种生物材料，它是组织工程骨的支架，复合细胞后构建生物衍生组织工程骨，过去的研究已证实具有引导骨再生能力，临床用于骨组织修复，修复骨缺损。四环素作为抗生素，临床应用已有近60年历史，1956年由Andro发现了四环素的非抗生素作用。Lee(1988)将四环素作为局部用药，Masato(1989)将四环素缓释体置入牙周袋内治疗牙周病；20世纪中期发现了四环素对骨的作用，有研究者认为四环素可抑制骨生长，但更多的研究认为，仅在使用大剂量时才会出现骨生长抑制。Sasaki(1974)的研究发现四环素类在体内可防止骨密度的丢失、类骨质的丢失以及成骨细胞形态的改变。Saskki等报告四环素(TCs)及其无抗生素作用的化学异构衍生物(CMTs)可完全恢复糖尿病鼠的成骨细胞形态和功能，并增加骨基质中H-脯氨酸标记的胶原合成。Aoyagi等报告CMT治疗卵巢切除术后小鼠骨质疏松，可促进小梁骨和皮质骨内膜的新骨形成。TCs、CMTs可提高成骨细胞活性，具有促进骨形成的作用，这种作用是由于成骨细胞对四环素的明显摄取刺激成骨细胞分泌胶原所致。更为重要的是，四环素类药物在一系列的研究中证明其有明显的抑制骨吸收作用。体外实验发现，四环素可有效抑制由甲状旁腺激素(PTH)(Gomes et al 1984)、前列腺素E2(PGE E2)或脂多糖(LPS)(Golub et al 1984)刺激造成的骨吸收，并且降低成骨细胞来源的胶原酶活性。体内实验中，四环素类也表明其抗骨质吸收的特性，Golub、Grevstad等报告四环素类可抑制细菌所致和手术所致的牙冠骨丢失，恢复糖尿病所致的全身骨质疏松。等等。上述报道仅仅在药理机制上对四环素对骨的作用进行了探讨，并没有说明四环素成骨的量效关系，更没有将四环素实际应用于制备和生产骨组织修复材料产品中的报道。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种骨组织修复的材料，它是生物衍生骨复合四环素缓释体，其包括生物衍生骨支架，四环素和包被体，以及生物衍生骨复合四环素缓释体的制备方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是一种生物衍生骨复合四环素缓释体，其特征在于生物衍生骨中含有四环素。所述的生物衍生骨，是专利申请号为00132082.3，名称为“生物衍生组织工程骨及其制备方法”所称的生物衍生骨支架，是用猪或异体骨采用物理化学方法制备三类衍生组织工程骨支架的任意一种，即部分脱蛋白生物衍生骨支架、完全脱蛋白生物衍生骨支架和部分脱钙生物衍生骨支架。所述的四环素为盐酸四环素，其中每克生物衍生骨复合盐酸四环素缓释体含有62μg～122μg的盐酸四环素，优选为80μg～110μg的盐酸四环素。生物衍生骨复合四环素缓释体的制备方法，它包含下列步骤先将已消毒灭菌的生物衍生骨支架在0～4℃浸渍于盐酸四环素溶液中；再将该生物衍生骨支架冷冻干燥，即得。当所述的盐酸四环素溶液的溶剂为水时，该生物衍生骨复合四环素缓释体的制备方法，包括如下步骤a、将已消毒灭菌的生物衍生骨支架在0～4℃浸渍于盐酸四环素水溶液中，盐酸四环素的浓度为50μg/ml～100μg/ml，使每克生物衍生骨复合盐酸四环素缓释体含有62μg～122μg的盐酸四环素；b、将a步骤的盐酸四环素水溶液在负压条件下浸泡；c、将b步骤浸泡的生物衍生骨支架冷冻干燥；d、包被将c步骤的冷冻干燥物放入包被的物质中进行包被；e、将d步骤已包被物质冷冻干燥，消毒，即得。所述方法步骤d中用于包被的物质为藻酸钠，pluronicF-127(氧化异丙烯，无毒、无粒子表面活性，水溶液可形成凝胶，4℃以下由凝胶变为液态，高于15℃又转变为凝胶，体内可完全降解)、或聚乳酸。进一步地，d步骤用于包被的物质为藻酸钠，浓度为1％～2％w/v，pH7.2。当所述盐酸四环素溶液的溶剂为pluronicF-127，浓度为25％w/v时，该生物衍生骨复合四环素缓释体的制备方法，包括如下步骤a、将已消毒灭菌的生物衍生骨支架在0～4℃浸渍于盐酸四环素pluronicF-127溶液中，盐酸四环素的浓度为50μg/ml～100μg/ml；b、将a步骤的盐酸四环素溶液在负压条件下浸泡；c、将b步骤浸泡的生物衍生骨支架冷冻干燥；d、将c步骤已包被物质冷冻干燥，消毒，即得。上述两种生物衍生骨复合四环素缓释体的制备方法中，步骤b所述的生物衍生骨支架在负压条件为负压0.5mPa。本专利技术的有益效果是本专利技术通过将专利申请号为00132082.3，名称为“生物衍生组织工程骨及其制备方法”所述的生物衍生骨支架与四环素(盐酸四环素)制备成本专利技术生物衍生骨复合盐酸四环素缓释体，当盐酸四环素的用量为每克生物衍生骨复合盐酸四环素缓释体含有62μg～122μg的盐酸四环素时，具有与促进骨生长的生长因子rhBMP、TGF-β基本相同的成骨效应，且克服了促进骨生长的生长因子的副作用，通过生物衍生骨支架与盐酸四环素组合使用，体外释放盐酸四环素有效浓度可维持2周，充分达到缓释功效，临床应用安全，来源容易，价格低，易于推广使用。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1生物衍生骨复合四环素缓释体；图2复合四环素生物衍生骨复合成骨细胞培养7天。具体实施例方式通过下面给出的本专利技术的实施例可以进一步清楚地了解本专利技术。但它们不是对本专利技术的限制。实施例1 本专利技术生物衍生骨复合四环素缓释体的制备本专利技术生物衍生骨复合四环素缓释体是由生物衍生骨支架与四环素(盐酸四环素)制备而成。以下是详细的制备方法①生物衍生骨(即专利申请号为00132082.3的在先申请中所称的生物衍生骨支架)的制备三类生物衍生骨支架的制备a、制备部分脱蛋白生物衍生骨支架的方法是取新鲜猪骨或异体骨，去除其上所附软组织、中心骨髓及软骨部分，蒸馏水冲洗干净，于38℃30％过氧化氢中脱脂72小时，每24小时换液一次；蒸馏水浸洗干净，于75％酒精中去除残余过氧化氢24小时，蒸馏水浸洗干净；氯仿∶甲醇3∶1，于室温下部分脱蛋白4小时，蒸馏水本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物衍生骨复合四环素缓释体，其特征在于生物衍生骨中含有四环素。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：张新民，杨志明，
申请(专利权)人：北京大清生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]