一种等位基因双敲除打靶载体系统及其构建方法技术方案

一种等位基因双敲除打靶载体系统及其构建方法，该系统由pGT-V1和pGT-V2两个互补载体组成，每个载体都包含两个同向的LoxP元件，其间分别含有正筛选标记基因Neo/GFP和Hyg/RFP，外侧含有一个负筛选标记基因TK。同时设计两个“8碱基”多克隆位点分布在两个LoxP元件与负筛选标记之间以供同源臂的插入。本发明专利技术构建的打靶载体系统将两个互补的打靶载体共转染受体细胞，经过药物和荧光双筛选标记的选择，一次性实现对靶基因两个等位基因的遗传修饰或敲除，并且可以通过转入Cre酶与LoxP元件相互作用去除整合到基因组上的筛选标记基因，能够缩短获得纯合敲除靶细胞的时间，提高转基因动物的安全性，为开展动物转基因研究提供有价值的技术平台。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种等位基因双敲除打靶载体系统，其特征在于：　　该系统由ｐＧＴ－Ｖ１和ｐＧＴ－Ｖ２两个互补载体组成，每个载体都包含两个同向的ＬｏｘＰ元件，其间含有两个正筛选标记基因，外侧含有一个负筛选标记基因，即ｐＧＴ－Ｖ１带有正筛选标记新霉素磷酸转移酶基因和绿色荧光蛋白基因，ｐＧＴ－Ｖ２带有正筛选标记潮霉素基因和红色荧光蛋白基因，二者都含有负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王华岩，韩翠芹，李军华，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：87