增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂及其制备方法和应用技术

一种增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂，其特征在于：主要组成为活性杀虫成分蜀柏毒蛾核型多角体病毒（ＰｏＮＰＶ），此外为５％以下的其他惰性成分。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

Proliferation of nuclear polyhedrosis virus insecticide of the Chinese pine moth and its preparation method and Application

Parocneriaorienta nuclear polyhedrosis virus insecticide a proliferation, which is characterized in that the main composition of Insecticidal Constituents of parocneriaorienta nuclear polyhedrosis virus (PoNPV), in addition to other inert ingredients below 5%.

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生物杀虫剂及其制备方法和应用，特别是涉及一种通过增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒而制成的生物杀虫剂及其该杀虫剂在防治蜀柏毒蛾病虫危害方面的应用。
技术介绍
蜀柏毒蛾俗称柏毛虫，是柏木林区危害十分严重的食叶害虫，尤其是我省川中、川北的柏木林区。1989年我们在四川省金堂县采集到一批自然病死虫，经分离、鉴定、室内毒力生物测定和林间初步应用表明该病毒是一株蜀柏毒蛾新毒株，经中国科学院武汉病毒所鉴定为蜀柏毒蛾核型多角体病毒(paroceneria orient Nuclear PolyedrosisVirus，简称PoNPV)，有关论文已刊登在《中国病毒学》1991年(第6卷)第4期，且该毒株也被中国科学院武汉病毒保贮中心收藏。该毒株具有以下生物学特征1、核型多角体的形态及大小在光学显微镜下低倍观察，可见很多折光性强的颗粒，高倍镜下，可见其四边形、五边形的轮廓。将提纯的多角体用电镜观察，多角体呈明显的四边形和五边形，边角钝圆，有的呈圆形，其大小为1.06-3.3u；2、应用5种限制性内切酶对蜀柏毒蛾核型多角体病毒基因组DNA进行的酶切分析该株病毒经热处理的多角体蛋白仅有一条，分子量为31.5KD，不经热处理的多角体蛋白有三条带，分子量分别为31.5KD、29.1KD、28.6KD。病毒粒子包含有25种结构的多肽，分子量范围在17.6-114.6KD之间。多角体DNA经Bam HI、EcoRI、HindIII、PstI、XhoI酶切分析产生9、12、12、12和14条片段。基因组大小平均为124.6Kb；3、病毒粒子的形态大小将提纯的多角体用0.05mol/L Na2CO3-O.1mol/L NaCl碱解液在常温下碱解，分别在碱解30分钟、40分钟、50分钟和60分钟时取样，用2％PTA负染，JEM-100C电镜观察。多角体在30分钟被部分碱解，60分钟时，病毒粒子基本上被释放出来。电镜下病毒粒子呈杆状，两端钝圆，大小为385×40nm；4、蜀柏毒蛾核型多角体病毒毒力将提纯的多角体，制成多角体含量分别为为1.67×108/ml、1.67×10710/ml、1.67×10610/ml、1.67×10510/ml、1.67×104/ml浓度病毒悬液进行生物测定，用2-3龄健康属柏毒蛾幼虫在室内饥饿12小时后，以小型电动喷雾器将病毒液均匀喷洒在新鲜干净枝桠，晾干后，插入盛水瓶内，饲喂蜀柏毒蛾供试幼虫，72小时后更换新鲜无毒枝桠，并进行观察记载。饲毒3-4天后幼虫取食量减少，开始呈现感病症状，在室温29℃条件下，12天后死亡率可达90.50％、78.00％、60.70％、45.40％、46.10％，以中间三个浓度计算该病毒对2-3龄蜀柏毒蛾幼虫的半致死时间分别为7.66天、9.70天核12.41天，致死中浓度为7.15×104包涵体/摩尔；5、蜀柏毒蛾核型多角体病毒种类鉴定根据人工感染该病毒后幼虫所表现的病状、多角体和病毒粒子的形态及大小，根据国际病毒分类与命名系统，即所分离的是一种核型多角体病毒，属杆状病毒科(Baculoviridae)，杆状病毒属(Baculovirus)，取名蜀柏毒蛾核型多角体病毒(paroceneria orient Nuclear Polyedrosis Virus，简称PoNPV)。传统的蜀柏毒蛾防治主要以大量使用化学农药为主，化学防治虽然对抗灾有较大的作用，但却存在着一些不可避免的矛盾和缺陷，如污染环境、易使目标害虫产生抗性、杀伤天敌，特别是影响桑蚕业的发展，因此急需一种毒力强、持续效果好、对人畜及家蚕绝对安全的特种生物杀虫剂。通过蜀柏毒蛾活体增殖技术制成的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂及其该杀虫剂在防治蜀柏毒蛾病虫危害方面的应用到目前为止尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂及其制备方法和该杀虫剂在防治蜀柏毒蛾病虫危害方面的应用。该生物杀虫剂毒力强、持续效果好、对人畜及家蚕无害，不污染环境、成本低廉。本专利技术的技术方案如下本专利技术杀虫剂的主要组成为活性杀虫成分蜀柏毒蛾核型多角体病毒(PoNPV)，此外为5％以下的其他惰性成分。本专利技术所述的杀虫剂为复合制剂，包括水剂和可湿性粉剂，该复合制剂每100毫升中蜀柏毒蛾核型多角体病毒的含量不低于1000亿包涵体(PIB)，惰性成分吐温80为0.01克、双抗为1000万单位、羧甲基纤维素10克、荧光素钠钠1克、甘油10克。本专利技术所述的杀虫剂为绿色，颗粒大小大于150目，静置48小时有一定的分层现象。本专利技术所述的蜀柏毒蛾核型多角体病毒是通过对蜀柏毒蛾进行活体增殖所得，包括以下三种增殖方法A、围栏增殖法a、增殖林地选择选择地势平坦，交通方便的柏木林地，要求林木高2～4米，枝叶繁茂。铲除林下杂丛，在树间空隙中将17～18个/米2空酒瓶埋于土中，瓶内灌水，再剪枝叶繁茂的约1米长枝条插入盛水瓶内。按1.0米左右宽度分行钉桩，再围以塑料薄膜成栏。b、虫源收集采集4～5龄活幼虫，放于柏木枝丫上，批量集运到增殖点，集运工具用箩筐，再底部支垫粗柏亚，粗柏丫上放细柏枝，柏枝上放虫，一层虫隔一层粗柏丫，每筐虫量不超过5千克，筐口用布围盖扎紧，以尽量减少活虫死亡。c、喷毒以病毒增殖用药在无雨、无露水时用喷雾器以1×107PIB/ml浓度均匀喷洒，直到鳞叶润湿，如遇下雨则补喷第二次，待鳞叶干后放虫。d、放虫取活幼虫均匀释放于栏内树木和枝条上，放虫密度尽可能大，以增加栽虫量，以5×10米范围放5千克虫或单株放0.5千克虫计。e、收虫喷毒放虫后，视温度和降水情况，在日最高气温25～29℃无雨天气条件下，3～5天幼虫开始出现症状。待大多数虫体缩短、身体变色，不食不动，中肠液体变褐，少数开始死亡，5～7％幼虫倒悬时，集中收集所有带毒幼虫，以50千克塑料桶盛装、贮藏。f、保存按每公斤幼虫加480和800万单位兽用青、链霉素，置于阴凉处或冰柜内。B、林间投虫增殖法选择交通方便，地势较平坦，树高不超过3米、成片的柏木林，株数按每株0.5千克虫来计量，按上述围栏增殖法收集健康蜀柏毒蛾，收集的健康的5龄幼虫按每株柏木载虫0.5千克计量，将虫体投放在柏木上，用工农-16型将浓度为107PIB/ml的蜀柏毒蛾核型多角体病毒液均匀地喷洒在投放有虫体的树株上，喷洒程度以鳞液湿润为止，如喷药后下雨，应补喷1次，按上述围栏增殖法人工采收柏木枝上的感病虫体。C、林间增殖法选择交通方便，林木相对集中成片，林木均高4～5米，虫口基数特大的林分(最好虫量200头以上/株)，于晴天以机动喷雾器用2.0×107～3.0×107PIB/ml浓度病毒用药对增殖林木进行全面施药，喷药方式为低量喷雾，第一次喷药后在虫量特大、收虫方便或第一次喷药质量不高的重点地段进行第二次重点喷药，同时可用手动喷雾器对低矮林进行选择性喷药，待大多数幼虫虫体开始收缩，体毛变伸，身体变色，取食活动降低，中肠变褐，少数幼虫死亡(3～5％倒挂)时，开始收虫。本专利技术所述的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂的制备方法包括原料贮存、磨浆、粗滤、精滤、含量检测、复合制剂的配制、产品贮存，其具体工艺步骤如下A、在原料贮存工序中，是指将收集的带毒蜀柏毒蛾幼虫以存放于冷冻冰柜中为最好，冷冻条件不够时，也可将原料放本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂，其特征在于主要组成为活性杀虫成分蜀柏毒蛾核型多角体病毒(PoNPV)，此外为5％以下的其他惰性成分。2.根据权利要求1所述的增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂，其特征在于所述的杀虫剂为复合制剂，包括水剂和可湿性粉剂，该复合制剂每100毫升中蜀柏毒蛾核型多角体病毒的含量不低于1000亿包涵体(PIB)，惰性成分吐温80为0.01克、双抗为1000万单位、羧甲基纤维素10克、荧光素钠钠1克、甘油10克。3.根据权利要求1或2所述的增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂，其特征在于所述的杀虫剂为绿色，颗粒大小大于150目，静置48小时有一定的分层现象。4.根据权利要求1或2所述的增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂，其特征在于所述的蜀柏毒蛾核型多角体病毒是通过对蜀柏毒蛾进行活体增殖所得，包括以下三种增殖方法A、围栏增殖法B、林间投虫增殖法C、林间增殖法5.根据权利要求1或2所述的增殖的蜀柏毒蛾核型多角体病毒杀虫剂的制备方法，其特征在于包括原料贮存、磨浆、粗滤、精滤、含量检测、复合制剂的配制、产品贮存，其具体工艺步骤如下A、在原料贮存工序中，是指将收集的带毒蜀柏毒蛾幼虫存放于冷冻冰柜中或将原料放在塑料桶或铁桶内密闭。B、在磨浆工序中，是指将增殖的原料虫尸解冻，按虫尸重量的2倍加水后快速磨浆。C、在粗滤工序中，是指...

【专利技术属性】
技术研发人员：周建华，郭亨孝，
申请(专利权)人：四川省林业科学研究院森林保护研究所，
类型：发明
国别省市：