一种防治水生动物病害的药物及制备方法技术

本发明专利技术属于防治水生动物病害药物制备技术领域。本发明专利技术所述水花生粗提物可有效防治水生动物疾病，既可提高水产养殖业的经济收入，又能有效解决水产品的食品安全性问题，可以获得无公害的绿色水产食品。并可以有效地利用水花生，为解决世界公认的恶性杂草，开辟了新途径。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于防治水生动物病害药物制备

技术介绍
在水生养殖中，人们往往使用大量的化学合成药物防治水生动物的疾病，虽然取得明显的疗效，但化学药物的反复使用可使病原微生物产生耐药性并引起“三致”(致癌、致畸和致突变)等问题。这不但危害水生动物的生长和发育，而且水生品的食品安全性问题令人担忧，因此人们开始利用中草药治疗水生动物疾病(宋学宏等，2001和高汉娇等，1996)。水花生Alternanthera philoxeroidesGriseb.属苋科、莲子草属，多年生水陆两栖草本植物。俗称革命草、空心苋、喜早莲子草、空心莲子草、螃蜞菊等，英文名字为alligator weed。该草原产于巴西，于20世纪30年代作为猪饲料引入我国，现主要分布于我国黄河流域以南地区。由于其广泛的适生性和繁殖特性已使该草成为世界公认的恶性杂草之一。水花生中药物的提取及其对人类疾病的防治方面的研究曾有过报道(杨占秋等，1989和王红程，2001)，曾收载于《中国药典》1977版。它有清热凉血、利水解毒之功效。临床用于流感、乙型脑炎、流行性、出血热麻疹和毒蛇咬伤等症，曾被制成注射剂和糖浆剂应用于临床。通过国内外学者的研究表明水花生的化学成分主要有黄酮、三萜、甾体及其苷、有机酸和氨基酸等。花中含有多种成分的挥发油(熊卫国等，2000和Salvador等，2004)。目前国内外尚无水花生针对水生动物疾病防治方面的研究报道。
技术实现思路
本专利技术需要解决的问题是研究开发出一种可有效防治水生动物疾病的新药物，既可提高水生养殖业的经济收入，又能有效解决水生品的食品安全性问题，从而获得无公害的绿色食品。并可以有效地利用水花生，为解决世界公认的恶性杂草开辟了新的途径。本专利技术目的是这样实现的通过用微波辅助-乙醇提取法获得水花生的粗提物，并分别用嗜水气单胞菌、点状气单胞菌和温和气单胞菌进行体外抑菌实验。通过观察抑菌圈的大小，判断水花生的粗提物对动物病原菌的抑菌效果。同时，采用固体培养基稀释法测定水花生粗提物的最小抑菌浓度(MIC)。由以上试验结果，来判定水花生粗提物对水生动物病原菌的抑菌效果。本专利技术的技术路线是水花生全草的采集和初加工；水花生有效成份的提取；试验菌液的制备；体外抑茵试验；水花生粗提物的最小抑菌浓度(MIC)测定；分析结果。水花生粗提物提取方法为称取水花生干草粉，加入一定量蒸馏水，用微波加热，然后加入乙醇溶剂，浸提后过滤，减压蒸馏回收乙醇，浓缩液烘干获得粗提物。本发的效果是通过用嗜水气单胞菌、点状气单胞菌和温和气单胞菌进行体外抑菌实验，我们发现从水花生中提取的一定浓度的粗提物对水生病原菌具有较高的抑菌作用，其抑菌效果与10ppm浓度的庆大霉素对相同病原菌的抑菌效果相同。尤其对嗜水气单胞菌最敏感。这说明水花生粗提物是一种防治水生动物疾病的药物。应用本专利技术可有效防治水生动物疾病，既可提高水生养殖业的经济收入，又能有效解决水生品的食品安全性问题，克服了化学药物反复使用可使病原微生物产生耐药性并引起“三致”等问题，可以获得无公害的绿色食品。同时有效地利用水花生，为解决水花生污染水环境提供了一种有效的变废为宝的治理方法。四附图说明图1水花生粗提物对三种气单胞菌的抑菌效果A嗜水气单胞菌B点状气单胞菌C温和气单胞菌五具体实施方式本项专利技术提供提取水花生中有效成分的全部过程如下水花生的采集全草和初加工水洗净、晒干。使用时将其置与干燥箱中烘干，用小型粉碎机将其粉碎成粉末，过60目筛备用。水花生有效成份的提取采用微波辅助-乙醇浸提法提取水花生的有效成分，其具体方法为称取水花生干草粉1千克，加入一定量蒸馏水，用微波加热5分钟，然后加入乙醇溶剂，使其乙醇浓度达到75％，浸提24小时后过滤，反复提取3次，合并提取液，减压蒸馏回收乙醇，浓缩液定容于500mL容量瓶中备用。试验菌液的制备试验菌为嗜水气单胞菌、点状气单胞菌和温和气单胞菌，购买于上海水产大学动物医学院，将供试菌用普通斜面培养基复壮2次后，用无菌生理盐水制成菌悬液，浓度为2×109个/mL。配制10ppm的庆大霉素抑菌液作为对照。体外抑茵试验采用平皿内挖洞法，稍加改良后进行体外抑菌试验。无菌条件下，用12cm培养皿，分别在固定位置放入外径为8mm，高6mm的牛津杯2只，待普通培养基冷却至45℃时倒平板(30mL/个)，放出部分水气，尽量摆平，待其凝固后用无菌镊子将牛津杯轻轻取出，留下2个大小一致的孔洞。并在底部的相应位置作好记号。再在每个平皿内分别加人0.2mL供试菌液，用无菌玻棒涂均匀，最后在孔洞里分别加入80μl的水花生药液，将平皿极小心地平移到培养箱中，37℃培养18h，观察其结果，并测量抑茵直径。试验做3个平行组。水花生粗提物的最小抑菌浓度(MIC)测定采用固体培养基稀释法测定水花生粗提物的最小抑菌浓度(MIC)。具体方法如下1.取无菌试管10只，依次加入0、1、2、3、4、5、6、7、8、9mL水花生粗提物溶液，然后加入蒸馏水使每管定容于10mL，备用。2.选用普通琼脂培养基，将琼脂培养基溶化并冷却至55℃左右，置水浴55℃中备用。3.分别取上述培养基20mL，同上述各试管中药液10mL混合均匀，倾注平板，使每个平皿中水花生提取液的浓度分别为0、33.3、66.7、100、133.3、166.7、200、233.3、266.7和300μl/ml等10个浓度梯度，并设空白对照；待凝固后，起开平皿盖并放置温箱中30min，取出后在平皿底部做好编号。4.接种用无菌接种环取菌液划线接种于平板内，置37℃培养18h，观察结果，判定MIC。实例分析结果1.抑菌试验结果体外抑菌试验结果表明，一定浓度的水花生乙醇粗提物对嗜水气单胞菌、点状气单胞菌和温和气单胞菌均显示出较好的抑菌效果，其抑菌效果与10ppm浓度的庆大霉素对相同病原菌的抑菌效果基本相同。抑菌效果大小依次为嗜水气单胞菌＞点状气单胞菌＞温和气单胞菌，见附图1和表1。表1 三种气单胞菌的抑菌圈大小比较嗜水气单胞菌点状气单胞菌温和气单胞菌抑菌圈(mm)31±1 27±121±12.水花生粗提物的最小抑菌浓度(MIC)药物的最小抑菌浓度MIC的测定结果见表2。从表中可以得出水花生粗提物对三种气单胞菌都具有较好的抑菌效果，它们对嗜水气单胞菌、点状气单胞菌和温和气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为133.3、166.7和166.7μl/ml。表2 水花生粗提物的最小抑菌浓度(MIC)嗜水气单胞菌点状气单胞菌温和气单胞菌MIC(μl/ml) 133.3 166.7 166.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防治水生动物病害的药物，其特征是水花生粗提物。

【技术特征摘要】
1.一种防治水生动物病害的药物，其特征是水花生粗提物。2.根据权利要求1所述水花生粗提物的制备方法，其特征是称取水花生干草粉，加入一定量蒸馏水，用微波加热5分钟，然后加入乙醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘长安，钦佩，周文宗，王光，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]