一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，本发明专利技术的技术方案是：首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混匀，室温裂解。加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。本发明专利技术从大豆分离蛋白中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，其浓度为1558μg/ml，OD260/OD280的值为1.666。本发明专利技术操作简单、耗时短、利于快速检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，是一种适用于PCR扩增的大豆分离蛋白的基因组DNA 的提取方法。
技术介绍
目前，关于植物全基因组DNA的提取已有不少研究和报道，但由于不同的植物或同一种植物的不同组织材料的组分各异，所适宜的提取方法也有所不同。大豆分离蛋白蛋白含量高，不利于DNA的溶出与提取。一般的植物基因组DNA提取方法无法从大豆分离蛋白中提取到基因组DNA，为下一步的以基因为基础的生物检测带来困难。现有大豆基因组DNA 提取方法的是以大豆幼苗叶片、大豆干种子、鼓粒期鲜豆荚为材料进行提取，上述提取方法无法从富含蛋白质的大豆分离蛋白中提取到基因组DNA。
技术实现思路
本专利技术的目的是为解决现有大豆基因组DNA提取方法的是以大豆幼苗叶片、大豆干种子、鼓粒期鲜豆荚为材料进行提取，上述提取方法无法从富含蛋白质的大豆分离蛋白中提取到基因组DNA的问题，进而提供一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法。本专利技术解决其技术问题所采用的方案是首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混勻，室温裂解。 加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。本专利技术的有益效果是可以从大豆分离蛋白中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，操作简单、耗时短、利于快速检测。用本专利技术的方法得到的DNA的浓度为 1558 μ g/ml，DNA 的 OD260/OD28。的值为 1. 666。具体实施例方式本专利技术较佳的实施方式是首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混勻，室温裂解。加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤， 室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。所述的TE混合液中大豆分离蛋白为30 80mg，TE缓冲液为120 320 μ L。较佳的范围为大豆分离蛋白50mg，TE缓冲液200 μ L。所述的异硫氰酸胍裂解液其中50 IOOmM ρΗ 6. 0 8. OTris-HCl ；10 IOOmM ρΗ 8. OEDTA ;5Μ 异硫氰酸胍；1. 3% Triton X-100。较佳的范围 50mM ρΗ 6. 5Tris-HCl ； 20mMpH 8. OEDTA ；5M 异硫氰酸胍；1. 3% Triton X-100。所述的室温裂解时间为20 60min，较佳的裂解时间为30min。所述的酚、氯仿/异戊醇的比例为25 24 1。所述的氯仿/异戊醇的比例为24 1。 所述的洗涤DNA沉淀的乙醇浓度为70 95%，较佳洗涤DNA的乙醇浓度为70%。所述异丙醇的沉淀温度为-20 30°C，较佳的沉淀温度为-20°C。所述异丙醇的沉淀时间为20 60min。所述室温晾干的时间为10 15min。权利要求1.一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，首先将大豆分离蛋白与TE 缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混勻，室温裂解，加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。2.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的TE混合液中大豆分离蛋白为30 80mg，TE缓冲液为120 320 μ L。3.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的异硫氰酸胍裂解液其中50 IOOmM ρΗ 6. 0 8. OTris-HCl ；10 IOOmM ρΗ 8. OEDTA ； 5Μ 异硫氰酸胍；1. 3% Triton X-IOO04.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的室温裂解时间为20 60min。5.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的酚、氯仿/异戊醇的比例为25 24 1。6.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的氯仿/异戊醇的比例为24 1。7.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的洗涤DNA沉淀的乙醇浓度为70 95%。8.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述异丙醇的沉淀温度为-20 30°C。9.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述异丙醇的沉淀时间为20 60min。10.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述室温晾干的时间为10 15min。全文摘要本专利技术公开了一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，本专利技术的技术方案是首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混匀，室温裂解。加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。本专利技术从大豆分离蛋白中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，其浓度为1558μg/ml，OD260/OD280的值为1.666。本专利技术操作简单、耗时短、利于快速检测。文档编号C12N15/10GK102206628SQ20111008161公开日2011年10月5日 申请日期2011年4月1日 优先权日2011年4月1日专利技术者徐伟丽, 李启明, 马莺 申请人:哈尔滨工业大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种大豆分离蛋白基因组ＤＮＡ的提取方法，其特征在于，首先将大豆分离蛋白与ＴＥ缓冲液充分混合制成ＴＥ混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混匀，室温裂解，加入等体积的酚、氯仿／异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿／异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于ＴＥ缓冲液中即可基因组ＤＮＡ的ＴＥ溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐伟丽，马莺，李启明，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：93