用于诊断食管癌的组合物及方法技术

本发明专利技术涉及用于诊断食管癌的组合物及方法，具体而言，本发明专利技术涉及含有多核苷酸作为探针的组合物、试剂盒及DNA芯片及使用上述物质检测、确定或预测食管癌的存在的方法，所述探针用于检测、确定或预测食管癌的存在。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于诊断(即检测、确定或预测)食管癌及食管癌转移的组合物、利用该组合物检测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法、及使用了该组合物的食管癌及食管癌转移诊断用试剂盒。
技术介绍
食管是连接咽和胃的管腔状器官，大部分存在于胸腔，一部分存在于颈部和腹腔。 在胸腔上部，食管位于气管和脊椎之间，在胸腔下部，食管被心脏、大动脉和肺包围。食管具有将从口摄入的食物输送到胃的作用。2001年日本人的癌死亡率为10万人中有238. 8人。死亡原因中食管癌所占的比例逐年增加，2001年男性的食管癌死亡例占到所有癌症死亡例的5. 0%、女性占到1. 4%0 食管癌的发病年龄的高峰在60 70岁，男性发病较多。另外，吸烟、饮酒、嗜好热食品等环境因素与发病密切相关。并且，一般认为由于在食管壁内部或周围，血管和淋巴管丰富，所以发生的癌症多出现转移。食管癌的治疗根据进展程度(日本食管疾病研究会编临床 病理食管癌治疗规范 1999年)或转移、及全身状况而决定。食管癌的标准治疗方法记载于日本食管疾病研究会编“食管癌治疗方针”(2002年)。目前最普通的治疗方法是手术疗法，即切除含有癌细胞的食管和包括淋巴结的周围组织(淋巴结清扫(lymph node dissection))，并利用胃等其他器官重建食管。但是，手术疗法、特别是大范围的淋巴结清扫给患者带来很大的负担，还必须考虑手术后的生活质量评分OiOL)降低的问题。对于粘膜内的早期癌症，有时可以在内窥镜下实施粘膜剥除术。另外，从根治疗法、对症疗法两方面考虑，有时可以进行放射线照射。还可以与手术疗法或放射线疗法组合，进行化学疗法。目前，一般认为在化学疗法中， 并用5-氟尿嘧啶和顺钼的治疗方法是最有效的。食管癌通常是在患者感觉吞咽时有不适感、吞咽困难、胸骨后部疼痛及胸部不适感等自觉症状进行就诊时被发现。但是，上述症状的出现是由癌在食管内生长导致的，患者因自我检测而就诊时发现的癌已经扩散或转移到食管壁外，通常预后不良。所以，手术时一般清扫食管周围的淋巴结，此时如果能预见癌是否发生转移，则可以在术前准确决定清扫范围或限定清扫范围，从而有助于术后患者的Q0L。食管癌可以通过食管造影检查、内窥镜检查及活组织检查进行确定。在进行内窥镜检查时或手术时采集活组织检查标本，制作病理标本，并且通过病理组织学分类加以诊断。此时，需要开发一种快速简便的诊断方法，该方法能根据内窥镜检查得到的细胞的性质预测癌是否向食管外转移。至今为止，已有人提出使用食管癌组织中特异性含有的标记物的分子生物学诊断方法。该方法能快速地得到客观的结果，有助于快速诊断。目前，作为食管癌临床检查用标记物，除了使用作为血清中的蛋白质标记物的 SCC、CYFRA21-1、CEA等之外，还报道了专利文献1、2中记载的蛋白质等。但是，上述标记物缺少灵敏度、特异性，即使是灵敏度最高的CYFRA21-1，其灵敏度也只是33. 9% (非专利文献1) 43. 9% (非专利文献幻左右。所以，尚不能达到通过对上述血清中的标记物及其组合进行检测来确定食管癌细胞是否存在的阶段，使用上述标记物也不能诊断食管癌的转移。另一方面，作为使用了用于特异性判断从受试者采集的活检试样中是否含有食管癌细胞的基因的标记物，公开了染色体异常(例如参见专利文献3，4)或基因的后生序列 (epigenetic sequences)(例如专利文献5)，除此之外，还报道了多个利用DNA芯片全面解析基因表达的结果(例如，参见非专利文献3 8)。另外，作为以单独的基因表达作为指标的标记物，报道了专利文献6、非专利文献9、10中记载的SPRR3基因(Small proline-rich protein 3)、非专利文献11中记载的fgf3基因、专利文献6、非专利文献12中记载的CSTB 基因(cystatin BUiver thiol proteinase inhibitor)、专利文献 7 中记载的 UCP2 基因 (mitochondrial uncoupling protein 2)、专禾丨J文献 6 中记载的 UPK IA 基因(uroplakin 1A)、非专利文献 13 中记载的 HSPA IB 基因(Heat Shock 70kDa Protein 1)等。专利文献1 特开2003-259872号公报专利文献2 特表2000-511536号公报专利文献3 特开2001-17200号公报专利文献4 特开2002-272497号公报专利文献5 特表2004-505612号公报专利文献6 国际公开第2003/042661号说明书专利文献7 国际公开第2003/076594号说明书非专利文献 1 :Nakamura，T.等，1998，Diseases of the Esophagus，第 11 卷， p. 35-39非专利文献2 :Kawaguchi，H.等，2000，Cancer，第 89 卷，p. 1413-1417非专利文献3 :Luo, Α.等，2004 年，Oncogene，第 23 卷，p. 1291-1299非专利文献4:Zhi，H.等，2003年，International Journal of Cancer，第 106卷， p. 327-333非专利文献5 :Lu, J.等，2001 年，International Journal of Cancer，第 91 卷， p. 288-294非专禾Ij文献 6 :Kazemi-Noureini，S.等，2004 年，World Journal of Gastroenterology,第 10 卷，p.1716-1721非专利文献7 :Xu, S. H.等，2003 年，World Journal of Gastroenterology，第 9 卷，p. 417-422非专利文献8 :Su, H.等，2003 年，Cancer Research,第 63 卷，p. 3872-3876非专利文献9 =Chen, B. S.等，2000 年，Carcinogenesis，第 21 卷，ρ· 2147-2150非专利文献10 =Abraham, J. Μ.等，1996 年，Cell Growth & Differentiation，第7 卷，p. 855-860非专利文献11 :Kitagawa,Y.等，1991 年，Cancer Research，第51 卷，p. 1504-1508非专利文献 12 =Shiraishi, T.等，1998 年，International Journal of Cancer, 第 79 卷，p. 175-178非专利文献13 Kawanishi, K.等，1999 年，Cancer，第 85 卷，p. 1649-1657
技术实现思路
但是，由于上述现有的指标缺少特异性及/或灵敏性，或尚未确立从生物试样中有效地检出的方法，所以通常不应用于临床，另外，认为目前还不能使用诊断标记物检测作为决定患者预后的重要因素的食管癌是否转移。所以迫切希望开发出特异性及灵敏性高的食管癌转移的标记物。本专利技术的目的在于提供在食管癌的诊断、食管癌转移的诊断、及食管癌的治疗中有用的疾病确定用组合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用于体外检测、确定或预测受试者食管癌的存在的组合物，所述组合物含有选自下述ＩＩ组中的１种或２种以上探针，ＩＩ组：由下述（ｆ）～（ｊ）组成的多核苷酸，（ｆ）由序列号１４２～１５５、１５７～１６１表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有１５个以上连续碱基的片段，（ｇ）含有序列号１４２～１５５、１５７～１６１表示的碱基序列的多核苷酸，（ｈ）由与序列号１４２～１５５、１５７～１６１表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有１５个以上连续碱基的片段，（ｉ）含有与序列号１４２～１５５、１５７～１６１表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，及（ｊ）在严格条件下与所述（ｆ）～（ｉ）中的任一种多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有１５个以上连续碱基的片段。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：秋山英雄，小园聪子，妙本阳，野村修，信正均，田中祥德，友田史绪里，岛田裕，辻本豪三，
申请(专利权)人：东丽株式会社，国立大学法人京都大学，
类型：发明
国别省市：JP