以单环刺螠总RNA为模板，克隆得到了单环刺螠纤维蛋白溶解酶基因全长cDNA序列，该序列的开放阅读框(ORF)共792个碱基，起始于起始密码子ATG，终止于终止密码子TAA。由该纤维蛋白溶解酶基因的cDNA原始编码序列，翻译得到单环刺螠纤维蛋白溶解酶的氨基酸序列，该氨基酸序列共263个氨基酸。单环刺螠纤维蛋白溶解酶基因的cDNA序列，可以通过构建不同的重组质粒载体，构建如大肠杆菌或酵母菌等不同受体的纤维蛋白溶解酶基因工程菌，使之在基因工程菌中进行表达，从而制备纤维蛋白溶解酶。制备的纤维蛋白溶解酶可应用于制备治疗心脑血管疾病的抗凝血药物或溶解血栓药物，具有很好的研究开发前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种编码纤维蛋白溶解酶的cDNA序列和氨基酸序列，特别是一种编码单环刺螆纤维蛋白溶解酶的cDNA序列和氨基酸序列及其应用，属于生物技术和生物医药领域。
技术介绍
单环刺螆Urechis unicinctuss为真体腔原口动物，分布于俄罗斯、日本、 朝鲜和我国的黄渤海沿岸，生活在沿海泥沙底质的底栖动物，其分类为螆虫动物门 (Echiurioidea)，螆纲(Echiurida)，无管螆目(Xenopneusta)，刺螆科(Urchidae)。目前对单环刺螆的研究还处于基础生物学研究阶段，如形态结构、胚胎发育、生活史、人工育苗技术及营养成分分析等，由于其能耐受高浓度硫化物，其代谢研究也是学术界研究的一个方在专利号为ZL200610043371. 3的专利技术专利中，专利技术人以单环刺螆为材料，通过生物化学的提取、分离、纯化、冷冻干燥的方法，制备了一种血栓溶解酶，该血栓溶解酶具有抗凝血活性和溶解血栓活性。在该专利技术专利中，专利技术人没有披露血栓溶解酶的分子量、氨基酸序列以及相关DNA序列。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种编码纤维蛋白溶解酶的cDNA序列及其氨基酸序列，并用它进行纤维蛋白酶基因工程菌的构建和新型抗凝血、溶解血栓药物开发。一种编码纤维蛋白溶解酶的cDNA序列的开放阅读框，其特征是ATGAAGACACTGTTGCTCATTTCATTGGCCGCTCTTGCCACTGCTGCGCCAGCCACATTCGATGCTGTGCGTGCACTGAGCGTTGAATCCCGTATCATTGGTGGCTCACCGGCTGACATCACCAACTTCCCCTATCAACTGTCTCTGAGATTCATTGGCTCTCATACATGTGGTGCCGTAGTTGTGTCGGTCAACAGGGCTCTGACAGCTGCCCATTGTACTGATGGACGTGTTATCGGTGGTTTCACACTTTATGCTGGATCTACAAGTAGACTATCGGATGGTGTACTGTACACCAATTT GGCAAAGGACGAGCACAGCGACTACAACAATGGTCAATGCACTTTCTGTAATGATATCTGCATGCTCTCTCTATTAACCAACATGGACACGAGCAATCCCGGTATTGGAGCAATCAGTATAGCAGCTACCAGTGATTTTGCAGGAACAACTTGCACTTTGAGTGGATGGGGCCGCACATCCAGCAGCATTGATCTCCCCACTAATCTGCAACAGGTCGACGTGGGTGTTATTTCCAATATTGAATGCCAAAGCCGAATGTCAGCAGCTGGAGCCAGTGTAGGAATTCAACATATCTGCATCTTCAGCAGCAGCCAGGGATCTTGCAATGGTGACAATGGTGGTCCCATGAGATGCACAGAGGGCGGCATTGGTGTATTGGCAGGAATCACCTCCTGGGGAATCTCTGTTGGAGGGGAATGCAGCACTATCTACCCATCCGTCTACGTCAGAGTCACAACCTTTCGGCCATGGATTGCCGAACGCATGTAA一种编码纤维蛋白溶解酶的氨基酸序列，其特征是MKTLLLISLAALATAAPATFDAVRALSVESRIIGGSPADITNFPYQLSLRFIGSHTCGAVVVSVNRALTAAHCTDGRVIGGFTLYAGSTSRLSDGVLYTNLAKDEHSDYNNGQCTFCNDICMLSLLTNMDTSNPGIGAISIAATSDFAGTTCTLSGWGRTSSSIDLPTNLQQVDVGVISNIECQSRMSAAGASVGIQHICIFSSSQGSCNGDNGGPMRCTEGGIGVLAGITSWGISVGGECSTIYPSVYVRVTTFRPffIAERM上述编码纤维蛋白溶解酶的cDNA序列在构建纤维蛋白溶解酶基因工程菌中的应用。上述编码纤维蛋白溶解酶的氨基酸序列在制备治疗心脑血管疾病的抗凝血药物或溶解血栓药物中的应用。附图说明图1纤维蛋白平板检测上清液的纤维蛋白酶活性其中1-6为阳性重组菌株X-33/pPCZ α AuffeEX的发酵上清液，7为空质粒重组菌株X-33/pPICZciA发酵上清液具体实施例方式实施例1 单环刺螆总RNA提取从青岛海边潮间带沙滩采集鲜活单环刺螆约IKg(采集人毕庆庆；电话 13698668750)，用新鲜海水暂养，取适量单环刺螆体壁及肠道组织用异硫氰酸胍法提取虫体总RNA，具体方法如下(1)配制溶液D 称取异硫氰酸胍48g，月桂肌酸钠0.5g，置250ml烧杯中，加入 0. 75M柠檬酸钠溶液3. 33ml，加少量DEPC水20ml，搅拌溶解，全部转移至IOOml容量瓶中， 加入DEPC水定容，得溶液D。 正向引物128611，2111 ； 10口] 反向引物1231^丨，2111 ；ddH20，35. 75ul ；TaKaRa Ex Taq, 0. 25μ 1，构成50ul反应体系。上述反应体系在PCR仪上进行PCR反应，反应条件为94°C 预变性2min ；94°C变性30s，55°C退火lmin，72°C延伸lmin，35个循环；72°C延伸lOmin，得到PCR产物。PCR产物用(3)中所述方法进行克隆，阳性菌株测序，得到下列cDNA序列GAAAACTAATTGTGAAAAGACTCCTGCATTATGAAGACACTGTTGCTCATTTCATTGGCCGCTCTTGCCACTGCTGCGCCAGCCACATTCGATGCTGTGCGTGCACTGAGCGTTGAATCCCGTATCATTGGTGGCTCACCGGCTGACATCACCAACTTCCCCTATCAACTGTCTCTGAGATTCATTGGCTCTCATACATGTGGTGCCGTAGTTGTGTCGGTCAACAGGGCTCTGACAGCTGCCCATTGTACTGATGGACGTGTTATCGGTGGTTTCACACTTTATGCTGGATCTACAAGTAGACTATCGGATGGTGTACTGTACACCAATTTGGCAAAGGACGAGCACAGCGACTACAACAATGGTCAATGCACTTTCTGTAATGATATCTGCATGCTCTCTCTATTAACCAACATGGACACGAGCAATCCCGGTATTGGAGCAATCAGTATAGCAGCTACCAGTGATTTTGCAGGAACAACTTGCACTTTGAGTGGATGGGGCCGCACATCCAGCAGCATTGATCTCCCCACTAATCTGCAACAGGTCGACGTGGGTGTTATTTCCAATATTGAATGCCAAAGCCGAATGTCAGCAGCTGGAGCCAGTGTAGGAATTCAACATATCTGCATCTTCAGCAGCAGCCAGGGATCTTGCAATGGTGACAATGGTGGTCCCATGAGATGCACAGAGGGCGGCATTGGTGTATTGGCAGGAATCACCTCCTGGGGAATCTCTGTTGGAGGG本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种编码纤维蛋白溶解酶的ｃＤＮＡ序列的开放阅读框，其特征是：ＡＴＧＡＡＧＡＣＡＣＴＧＴＴＧＣＴＣＡＴＴＴＣＡＴＴＧＧＣＣＧＣＴＣＴＴＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＴＴＣＧＡＴＧＣＴＧＴＧＣＧＴＧＣＡＣＴＧＡＧＣＧＴＴＧＡＡＴＣＣＣＧＴＡＴＣＡＴＴＧＧＴＧＧＣＴＣＡＣＣＧＧＣＴＧＡＣＡＴＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＣＴＡＴＣＡＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＴＴＣＡＴＴＧＧＣＴＣＴＣＡＴＡＣＡＴＧＴＧＧＴＧＣＣＧＴＡＧＴＴＧＴＧＴＣＧＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＣＴＧＡＣＡＧＣＴＧＣＣＣＡＴＴＧＴＡＣＴＧＡＴＧＧＡＣＧＴＧＴＴＡＴＣＧＧＴＧＧＴＴＴＣＡＣＡＣＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＧＡＣＴＡＴＣＧＧＡＴＧＧＴＧＴＡＣＴＧＴＡＣＡＣＣＡＡＴＴＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＡＴＧＣＡＣＴＴＴＣＴＧＴＡＡＴＧＡＴＡＴＣＴＧＣＡＴＧＣＴＣＴＣＴＣＴＡＴＴＡＡＣＣＡＡＣＡＴＧＧＡＣＡＣＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＴＡＴＴＧＧＡＧＣＡＡＴＣＡＧＴＡＴＡＧＣＡＧＣＴＡＣＣＡＧＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＧＡＡＣＡＡＣＴＴＧＣＡＣＴＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＧＣＣＧＣＡＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＴＴＧＡＴＣＴＣＣＣＣＡＣＴＡＡＴＣＴＧＣＡＡＣＡＧＧＴＣＧＡＣＧＴＧＧＧＴＧＴＴＡＴＴＴＣＣＡＡＴＡＴＴＧＡＡＴＧＣＣＡＡＡＧＣＣＧＡＡＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＣＡＧＴＧＴＡＧＧＡＡＴＴＣＡＡＣＡＴＡＴＣＴＧＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＧＧＧＡＴＣＴＴＧＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＡＡＴＧＧＴＧＧＴＣＣＣＡＴＧＡＧＡＴＧＣＡＣＡＧＡＧＧＧＣＧＧＣＡＴＴＧＧＴＧＴＡＴＴＧＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＣＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＡＴＣＴＣＴＧＴＴＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＣＡＧＣＡＣＴＡＴＣＴＡＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＡＣＧＴＣＡＧＡＧＴＣＡＣＡＡＣＣＴＴＴＣＧＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＧＣＣＧＡＡＣＧＣＡＴＧＴＡＡ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩宝芹，刘万顺，冯伊琳，杨艳，董文，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。