敬钊缨毛蛛毒素的新用途制造技术

本发明专利技术公开了一种敬钊缨毛蛛毒素的新用途，具体涉及敬钊缨毛蛛毒素在治疗和/或预防脑卒中(中风)的药物中的应用，以及敬钊缨毛蛛毒素在制备预防和/或治疗神经损伤的药物中的应用。本发明专利技术发现敬钊缨毛蛛毒素对神经损伤的具有明显的修复作用，如抗凝血、清除自由基(包括增强SOD的活性以及降低MDA水平、降低炎症炎症COX-2转录水平等作用途径)、缓解缺血性中风症状、减少脑梗死面积等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种敬钊缨毛蛛毒素的新用途，具体涉及敬钊缨毛蛛毒素在治疗和/ 或预防脑卒中(中风)的药物中的应用，以及敬钊缨毛蛛毒素在制备预防和/或治疗神经损伤的药物中的应用。
技术介绍
伴随着世界范围人口老龄化速度的加快，脑卒中发病率呈逐年增高的趋势。近年来，脑中风已成为世界范围内第一位的致残原因和第二位致死原因。世界卫生组织MONICA 计划调查显示，脑中风平均发病率东方要高于西方，日本等亚洲国家脑中风发病率位于世界前位；同时，该计划对我国约500万人进行长达8年的监测结果显示我国的脑中风发病率为250/10万，仅次于俄罗斯西伯利亚地区300/10万的发病率。由于脑中风愈后效果差，大多数患者会有轻重不等的偏瘫、失语或痴呆等后遗症，严重影响着患者的生活质量，同时也给家庭和社会带来沉重的经济负担。缺血性脑中风是一个复杂的病理过程，包括缺血期的原发性损伤和再灌注期的继发性损伤，是由多种病理过程相互影响或互为因果形成的病变，与损伤级联反应有关。脑中风的有效治疗时间仅为发病后6小时或更短，如果在这段时间内无法有效打通栓塞或清除出血，脑损伤将无法挽回，但目前从发病到完成手术融栓或清血治疗一般需要20小时。 因此，延长治疗时间窗，增强神经细胞对缺血缺氧的耐受性，抵御缺血再灌注引起的继发损伤，将有效提高脑中风的治愈程度。神经生物学的基础研究为神经损伤性疾病治疗方法的发展提供了理论基础，众多新的与神经损伤相关机制以及相关因子相继被发现，为神经损伤治疗以及神经功能恢复提供了理论依据。脑中风主要分为三类①缺血性脑中风；②出血性脑中风(脑出血或蛛网膜下腔出血)；③混合型脑中风。缺血性脑中风占到59.8%，常在睡眠或安静条件下发病，由于血管阻塞引起脑缺血损伤而致局部或全脑的功能障碍，主要引发大脑神经元损伤，涉及兴奋性毒性、钙超载、细胞凋亡、炎症、自由基、一氧化氮以及线粒体的损伤等机制，包括神经细胞、胶质细胞及联系纤维由于供血障碍所发生的变性、坏死或易过性的功能丧失。神经保护剂已逐渐成为临床使用中的热门药物。其中具有自由基的清除、保护、修复与激活神经元的优势的脑循环代谢保护剂已成为研发的新热点。此类药物具有降低血黏度和抑制血小板聚集，延长细胞生存能力、改善脑循环系统等功能。生物毒素是一大类生物活性物质的总称，是由动物、植物和微生物等产生的对其他生物有毒害作用并不可复制的化学物质。部分毒素具有明显的降低血液黏度，溶解血栓等功能，应用于临床，有较明显的治疗效果。目前国外有两种蛇毒镇痛药=Cobroxin和 Nyloxin，均为神经毒素，用于治疗各种顽固性疼痛和恶性肿瘤疼痛。国内有“克痛宁注射液”和“蛇毒新克痛宁，，两种蛇毒镇痛药，均来自于眼镜蛇毒，使用剂量小，一般没有严重的副作用。默克制药公司的研究人员在栖息于美国南方的小响尾蛇毒液中分离出一种抗凝血素。他们根据该分子的结构开发出两种环型多肽类新药Eptifi-tatide和tirofitan，抗凝血效果远胜于阿司匹林，成为有效治疗心肌梗塞等严重心血管疾病的新一代抗凝血药。我国对蜘蛛毒的研究有着很长的历史，在《本草拾遗》中就已经有了蜘蛛的药用价值，性味甘、微苦、微寒、有大毒，具有解毒消炎之功效，主治疮疡、毒虫咬伤、中风口斜、小儿惊风等症。而且我国的蜘蛛资源非常丰富，其中许多物种为我国所特有，因此对蜘蛛药用价值的研究有着得天独厚的优势。敬钊缨毛蛛就是分布于我国南方的特有大型毒蜘蛛，此蜘蛛隶属狒蛛科，棒刺蛛亚科，缨毛蛛属，是近年在海南发现蜘蛛新种，个体较大，毒性较强， 毒液采集相对容易。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种敬钊缨毛蛛毒素的新用途。本专利技术提供了敬钊缨毛蛛毒素的如下任一所述的用途(a)在制备治疗和/或预防脑卒中(中风)的药物中的应用；(b)在制备治疗和/或预防神经损伤的药物中的应用。本专利技术还提供了敬钊缨毛蛛毒素在制备具有如下至少一种功能的产品中的应用(1)脑保健作用和/或神经保护作用；(2)溶解血栓作用；(3)降低脑卒中动物血清中的谷氨酸含量；(4)提高脑卒中动物血清中的超氧化物歧化酶含量；(5)降低脑卒中动物血清中的丙二醛含量；(6)降低脑卒中动物脑组织中的环氧化酶2含量；(7)降低脑卒中动物大脑皮层中的Calpain蛋白含量。所述环氧化物酶2 (C0X-2)的氨基酸序列如序列表的序列1所示，核苷酸序列如序列表的序列2所示。所述脑卒中具体可为缺血性脑卒中。本专利技术还保护一种治疗和/或预防脑卒中的药物，它的活性成分为敬钊缨毛蛛毒ο本专利技术还保护一种治疗和/或预防神经损伤的药物，它的活性成分为敬钊缨毛蛛毒素。本专利技术还保护一种活性成分为敬钊缨毛蛛毒素的产品；所述产品具有如下至少一种功能(1)脑保健作用和/或神经保护作用；(2)溶解血栓作用；(3)降低脑卒中动物血清中的谷氨酸含量；(4)提高脑卒中动物血清中的超氧化物歧化酶含量；(5)降低脑卒中动物血清中的丙二醛含量；(6)降低脑卒中动物脑组织中的环氧化酶2含量；(7)降低脑卒中动物大脑皮层中的Calpain蛋白含量。所述脑卒中具体可为缺血性脑卒中。本专利技术公开了一种敬钊缨毛蛛毒素(YM)的新用途，具体涉及敬钊缨毛蛛毒素在治疗和/或预防脑卒中(中风)的药物中的应用，以及敬钊缨毛蛛毒素在制备预防和/或治疗神经损伤的药物中的应用。本专利技术发现敬钊缨毛蛛毒素对神经损伤的具有明显的修复作用，如抗凝血、清除自由基(包括增强SOD的活性以及降低MDA水平、降低炎症炎症C0X-2 转录水平等作用途径)、缓解缺血性中风症状、减少脑梗死面积等。附图说明图1为敬钊缨毛蛛毒素的平板实验。图2为TTC染色确定脑梗死面积的照片。图3为体现血清谷氨酸含量变化的峰面积结果。图4为体现血清中SOD和MDA变化的结果。图5为脑组织C0X_2mRNA表达量变化的结果。图6为脑组织中炎症因子C0X-2表达量变化的结果。图7为大脑皮层中Calpain含量变化的结果。具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。凝血酶北京鼎国昌盛生物技术有限公司，500u/50mg。人纤维蛋白原Sigma，F3879。 尿激酶丽珠集团丽珠制药厂，每瓶尿激酶的酶活力单位为25万单位。法舒地尔天津红日药业，每个包装为anl，其中含有30mg法舒地尔。敬钊缨毛蛛毒素购自海南生物制药研究中心。实施例中所用的PBS缓冲液的制备方法如下称取8g NaCl、0. 2g KCl、1.42g Na2HPO4和0. 27g KH2PO4,溶于800ml去离子水中，用HCl调pH值至7. 4，最后加去离子水定容至IL0实施例1、敬钊缨毛蛛毒素的体外溶栓活性一、纤维蛋白平板的制备1、把0. 04g人纤维蛋白原稀释到IOml灭菌的PBS缓冲液中，使之终浓度为^ig/ ml，即为纤维蛋白原溶液。2、凝血酶用Iml PBS缓冲液稀释至终浓度为lmg/ml，即为凝血酶溶液。3、称0. Ig琼脂糖溶于IOml PBS缓冲液中，加热溶解，即为琼脂糖溶液。4、将Iml的凝血酶溶液贴壁加入IOml纤维蛋白原溶液中，快速混勻本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．敬钊缨毛蛛毒素在制备治疗和／或预防脑卒中的药物中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：史小军，侯圣陶，李新明，张旭旭，米锡阳，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，
类型：发明
国别省市：94