本发明专利技术公开了一种邻苯二甲酸二庚酯完全抗原及其制备方法：以4-硝基邻苯二甲酸为原料，经过酯化、还原及重氮化反应后，再与牛血清蛋白（BSA）或卵清白蛋白（OVA）偶联等一系列步骤后，合成了邻苯二甲酸二庚酯人工抗原。本发明专利技术的制备方法简单可行，制备的完全抗原可用于免疫分析。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种邻苯二甲酸二庚酯完全抗原及其制备方法，属于小分子有机物的免疫化学生物
技术介绍
邻苯二甲酸二庚酯(DHP)作为一种主要的增塑剂，用于塑料、橡胶以及化妆品、香料、印染、涂料等行业，而邻苯二甲酸二庚酯(DHP)也是一种环境雌激素，近几年来的研究发现，邻苯二甲酸二庚酯(DHP)物质对环境、生物与食品能造成污染，它可以通过饮食、呼吸和皮肤透过等途径被人体吸收，主要危害人体的雄性生殖系统，邻苯二甲酸二庚酯(DHP) 具有类雌激素活性，少量就能够对人类的生殖系统产生损害，导致睾丸萎缩、尿道下裂、降低精子活性。商品化使用的邻苯二甲酸酯约有14种，其中6种被美国EPA列为重点控制的污染物，3种被我国列为优先控制污染物名单，8种被列为世界野生动物基金会(WffF)的环境激素名单中，欧盟曾于1999年规定市场销售的PVC玩具的邻苯二甲酸酯含量不得超过0.1%。在塑料中邻苯二甲酸二庚酯(DHP)与聚烯烃类塑料分子之间由氢键或范德华力相连结，彼此保留相对独立的化学性质，当遇到油脂、唾液和温度升高时，通过咀嚼或弯曲等机械压力即可溶出。随着塑料制品的使用规模不断扩大，邻苯二甲酸二庚酯(DHP)环境激素造成的环境影响和对人类健康的慢性和长期效应，日益受到人们的关注和担忧。目前对邻苯二甲酸二庚酯(DHP)环境激素的检测主要有液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)和气液-质谱联用(GC-MS)等色谱技术，但由于色谱技术本身的限制，测定前必须进行衍生化， 使得试样的前处理十分复杂，操作繁琐，所用的仪器昂贵，而且要求有熟练的操作人员和较长的分析周期，方法的灵敏度也受到限制，难以适应对邻苯二甲酸二庚酯(DHP)环境激素的野外检测和实验室内进行大批量的筛选实验的进行等。因此，有必要制备邻苯二甲酸二庚酯人工抗原，用于进行免疫检测。公开号CN 1013^204A(申请号200810022244. 4)的中国专利文献公开了一种邻苯二甲酸二辛酯人工抗原的制备方法，是以4-硝基邻苯二甲酸为原料，在浓硫酸的催化下与正辛醇发生酯化反应，然后利用铁粉还原法使4-硝基邻苯二甲酸二辛酯苯环上的硝基还原为胺基，制备半抗原，利用重氮化法对半抗原上的胺基进行重氮化并使之与牛清蛋白结合，制备邻苯二甲酸二辛酯的人工抗原。公开号CN 101328217A (申请号200810021411. 3) 的中国专利文献公开了一种邻苯二甲酸二己酯人工抗原的制备方法，是以4-硝基邻苯二甲酸为原料，在浓硫酸的催化下与正己醇发生酯化反应，然后利用铁粉还原法使4-硝基邻苯二甲酸二己酯苯环上的硝基还原为胺基，制备半抗原，利用重氮化法对半抗原上的胺基进行重氮化并使之与牛血清蛋白结合，制备邻苯二甲酸二己酯的人工抗原。公开号CN 101328218A (申请号200810021412. 8)的中国专利文献公开了一种邻苯二甲酸二异辛酯人工抗原的制备方法，是以4-硝基邻苯二甲酸为原料，在浓硫酸的催化下与异辛醇发生酯化反应，然后利用铁粉还原法使4-硝基邻苯二甲酸二异辛酯苯环上的硝基还原为胺基，制备半抗原，利用重氮化法对半抗原上的胺基进行重氮化并使之与牛血清蛋自结合，制备邻苯二甲酸二异辛酯的人工抗原。邻苯二甲酸二庚酯的相对分子质量较小，不具有免疫原性，必须和大分子的载体蛋白如牛血清白蛋白(BSA)、卵血清白蛋白(OVA)等偶联之后构成完全人工抗原，才能用于动物免疫。但现有技术中尚未有邻苯二甲酸二庚酯的完全抗原。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供了一种邻苯二甲酸二庚酯完全抗原、制备方法，所制备的产品可用于邻苯二甲酸二庚酯免疫分析方法研究。本专利技术的方案是，邻苯二甲酸二庚酯完全抗原，结构式如下权利要求1.邻苯二甲酸二庚酯完全抗原，其特征是，结构式如下2.如权利要求1所述的邻苯二甲酸二庚酯完全抗原的制备方法，其特征是，以4-硝基邻苯二甲酸为原料，经过酯化、还原和偶联反应合成。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征是，具体步骤如下(1)4-硝基邻苯二甲酸二庚酯的合成在4-硝基邻苯二甲酸中加入庚醇，搅拌条件下加入催化剂，在115-125 下搅拌回流，减压蒸去未反应的庚醇和反应生成的水，趁热倒入冰水中，在搅拌下滴加碳酸钠溶液，直到水层的PH值为6. 5-7. 2后，分离出油状物经后续处理，得到黄色油状液体4-硝基邻苯二甲酸二庚酯；(2)4-氨基邻苯二甲酸二庚酯的合成在4-硝基邻苯二甲酸二庚酯中加入甲苯或苯， 搅拌条件下加入还原剂，分次滴加浓盐酸，室温下反应20-40分钟后，继续加入还原剂，搅拌反应完成后，将溶液倾入冷水中，中和反应至碱性，分离出甲苯或苯层，水层再萃取一次， 合并萃取液，干燥、减压除去甲苯或苯，得到淡黄色油状液体4-氨基邻苯二甲酸二庚酯；(3)邻苯二甲酸二庚酯完全抗原的合成取4-氨基邻苯二甲酸二庚酯溶于盐酸中，放置冰水浴中冷却，搅拌并保持混合物的温度在4°C以下，避光条件下，滴入亚硝酸钠的水溶液，并随时补充冰块以保持溶液温度，继续搅拌反应20-40min，然后，向反应体系中逐渐加入溶有BSA或OVA的缓冲溶液，反应逐渐有橙红色溶液出现，继续反应1. 5-3小时，得到抗原粗产品，经后续处理得到橙红色产品邻苯二甲酸二庚酯完全抗原。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征是，步骤(1)所述的庚醇具体是正庚醇，优选的，正庚醇的用量与4-硝基邻苯二甲酸的物质的量比为2:1 3:1，优选为2.5:1。5.如权利要求3所述的制备方法，其特征是，步骤(1)所述的催化剂为浓盐酸或浓硫酸，优选的，催化剂的用量与4-硝基邻苯二甲酸物质量比为1:7 2:7，优选1.5:7。6.如权利要求3所述的制备方法，其特征是，步骤(1)所述的碳酸钠溶液质量分数为 10-15% (优选 12-14%，更优选 13%)。7.如权利要求3所述的制备方法，其特征是，步骤(2)所述还原剂为锌粉、铁粉、Sn+HCl 或LiAlH4，优选的，所述还原剂的用量与4-硝基邻苯二甲酸二庚酯质量的比例为3:1 2.6:1 (优选 2. 8:1)。8.如权利要求3所述的制备方法，其特征是，步骤(2)所述中和反应使用lmol/ L的氢氧化钠溶液，萃取时使用甲苯或苯，干燥时使用无水硫酸钠，优选的，步骤(2)所述甲苯或苯与4-硝基邻苯二甲酸二庚酯质量的比例为30 1 M 1 (优选26 1)。9.如权利要求3所述的制备方法，其特征是，步骤(3)所述缓冲溶液为BSA或OVA的硼酸钠或PBS缓冲溶液，pH为7. 4-9. 5，优选BSA的硼酸钠缓冲液，pH为9. 2。10.如权利要求1所述的邻苯二甲酸二庚酯完全抗原在监测邻苯二甲酸二庚酯含量时的用途。全文摘要本专利技术公开了一种邻苯二甲酸二庚酯完全抗原及其制备方法以4-硝基邻苯二甲酸为原料，经过酯化、还原及重氮化反应后，再与牛血清蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联等一系列步骤后，合成了邻苯二甲酸二庚酯人工抗原。本专利技术的制备方法简单可行，制备的完全抗原可用于免疫分析。文档编号C07K14/765GK102206269SQ20111011494公开日2011年10月5日 申请日期2011年5月5日 优先权日2011年5月5日专利技术者宋于燕, 庞玉波, 张霞, 杜凌云, 王术皓 申请人:聊本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．邻苯二甲酸二庚酯完全抗原，其特征是，结构式如下：式中的Ｐｒｏｔｅｉｎ为牛血清白蛋白ＢＳＡ或卵血清白蛋白ＯＶＡ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王术皓，宋于燕，杜凌云，张霞，庞玉波，
申请(专利权)人：聊城大学，
类型：发明
国别省市：37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。