慢性伤口护理中的活性氧物质的还原制造技术

一种用于增进伤口愈合的方法，其包括如下步骤：　　　　提供医药上有效的ｐＨ值基本为中性的金属离子水溶液，所述金属离子选自由钾离子、锌离子、钙离子和铷离子组成的群组，将所述溶液施加到所述伤口经一段足够使与所述伤口相关联的活性氧物质达成中和的时间，借此通过所述溶液对与所述伤口相关联的所述活性氧物质的所述中和作用增进所述伤口的愈合。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及伤口的护理，尤其涉及性质为褥疮、烧伤等的慢性(非反应性)伤口。
技术介绍
近年来，显而易见自由基在被损伤的伤口愈合中扮演重要角色。在局部和慢性伤口中，已知自由基导致细胞损坏并在愈合过程中充当抑制因子。在慢性伤口中，缺血性条件可将酶黄嘌呤脱氢酶转变成催化氧到超氧负离子的转变的黄嘌呤氧化酶。通过刺激多形核嗜中性粒细胞(PMN)在伤口中产生超氧负离子。超氧负离子为对组织有毒性的自由基，且其产生也可导致包括更有毒性的羟基和较强的非游离氧化剂次氯酸的其它活性氧物质(ROS)的形成。通过氧化氮，由巨噬细胞(伤口中的另一炎性细胞)超氧负离子产生的游离基很容易起反应形成对周围组织起最有害影响的过氧亚硝酸根。最后，超氧负离子也可诱发基质分子纤维素与纤维结合蛋白的交联，从而导致不太适合上皮生长的转化基质。
技术实现思路
根据本专利技术的一个方面，在以金属离子的合成组合物治疗之后，调制与伤口相关联的活性氧物质。已发现，向显示超氧负离子的伤口施加所述组合物通过减少与伤口相关联的超氧负离子的水平有效治疗和愈合这些伤口。本专利技术在慢性伤口的治疗和愈合中尤其有效。而且，已发现以本专利技术组合物治疗部分厚度切割伤和接触烧伤改良了这些伤口的上皮形成。除本专利技术的抗氧化活性外，采用本专利技术组合物治疗所述伤口将通过人类PMN而对R0S的产生产生抑制效应，并对人类补体激活产生抑制效应，且因此进一步有益于慢性伤口的护理。附图说明图1为如由超氧负离子清除剂检验所确定的天然橡树皮提取物与本专利技术合成溶液的IC50值的图形比较；图2为如由化学发光检验所确定的天然橡树皮提取物与本专利技术合成溶液的IC50值的图形比较；和图3为如由补体检验传统途径所确定的天然橡树皮提取物与本专利技术合成溶液的IC50值的图形比较。具体实施例方式本专利技术所采用的技术和方法材料一种适用于本专利技术的优选组合物包含10-80重量份的钾离子、0.00001-20重量份的锌离子、0.01-10重量份的钙离子和数量高达40重量份的铷离子I，所述溶液的pH值在约5与约7之间。在一个实施例中，所述金属离子衍生自其各自的盐，包括(例如)氯化物、硫酸盐、柠檬酸盐、氢氧化物。如所需，优选通过向所述溶液添加柠檬酸来实现所述组合物的pH值的调节。对于本专利技术目的而言，这一组合物在本文中有时称为PHI5(使用柠檬酸pH值调节到5的多水合物电解质)。已发现使用钾、锌和铷离子(不包括钙)的治疗价值。然而，钙可适用于某些类型伤口的治疗，而即使对特殊伤口并非医药上有效的，当治疗所述特殊伤口时，其存在于本专利技术的溶液中对优选溶液的疗效是无害的。通过人类嗜中性粒细胞抑制ROS产生的检验(化学发光检验) 从健康志愿者(Bloedbank Midden-Nederland，Utrecht，TheNetherlands)的静脉血中分离出多形核嗜中性粒细胞(PMN)。在白色96-孔平底微量滴定板(Costar，Badhoevedorp，The Netherlands)中，将试样连续稀释到最终容积50μL。在每孔中添加50μL PMN悬浮液(1×107细胞/毫升)和50μL鲁米诺(120μM)。通过添加50μL调理的酵母聚糖A(OPZ；最终浓度200μg/mL)来触发PMN。在30min期间使用Titertek Luminoskan光度计(TechGen International，ZelUk，Belgium)每2min监控化学发光0.5sec。将峰值水平用于计算与其相应对照组(无试样情况下的相同培养)相关的试样的活性。在以NaHCO3缓冲到pH 7.35并以0.1％(w/v)凝胶补充的Hank平衡盐溶液(I-IBSS)中执行实验，以避免细胞聚集(HBSS-凝胶)。通过在37℃下以1∶10稀释的人类混合血清(HPS)培养洗涤过的商业酵母聚糖A 30min而获得OPZ。洗涤后，经调理的产品再在HBSS中悬浮(最终浓度0.8mg/mL)。超氧负离子清除检验在白色96-孔平底微量滴定板中，以磷酸盐缓冲液(PBS；pH 7.4)将试样连续稀释到最终容积50μL。随后，添加次黄嘌呤(50μL；最终浓度1mM)和缓冲剂或超氧歧化酶(SOD；25μL；10U/mL)。通过添加25μL的黄嘌呤氧化酶(10mU/mL)来引进超氧负离子-O2(自由基产物)，并在15min期间，使用Fluoroskan Ascent FL光度计(Labsystems，Breda，TheNetherlands)每毫米监控化学发光0.5sec。从所述化学发光信号的SOD-可抑制部分计算所述测试化合物的活性。为排除试样对黄嘌呤氧化酶活性的直接影响，在290nm分光光度地确定尿酸的形成。人类补体活性的溶血检验(传统途径和替代途径)通过Klerx等人(Klerx，J.P.A.M.，Beukelman，C.J.，Van Dijk，H.等人，Microassay for colorimetric estimation of complement activityin guinea pig，human and mouse serum.J.Immunlol Methods 1983，63215-220)所描述的微量检验修改版本确定试样对人体补体的传统和替代途径(分别为CP和AP)的抑制活性。在U型孔微量滴定板(GreinerLabortechnik，Nortingen，Germany)中，将试样系列稀释于(1)以0.15mM Ca2+和0.5mM Mg2+补充到最终容积50μl(CP)的VSB-CP(佛罗那(Veronal)盐水缓冲液，以5mM佛罗那、150mM盐水制备；pH 7.35)，或(2)以上述佛罗那盐水缓冲液制备且以0.5m Mg2+和0.8mM EGTA补充到最终容积100μl(AP)的VSB-AP中。随后，添加50μl(CP)或25μl(AP)人类混合血清(HPS；从健康提供者获得)的适当稀释物，并将所述板在37℃下培养30min。在添加50μl敏化绵羊红血球(CP)或25μl家兔红血球(见下文)之后，再在37℃下将所述板培养1h。存于阿氏溶液(Alsever solution)中的绵羊或家兔血液是红血球的来源。在使用之前，用盐水将红血球洗涤三次。绵羊红血球通过与稀释溶血素(1∶800)一起培养10min而敏化；洗涤之后，将所述经敏化的红血球再悬浮在VSB-CP中(4×108细胞/ml)。将家兔红血球悬浮在VSB-AP中(3×108细胞/毫升)。最后，将所述微量滴定板离心分离(900xg，5min)以使完整的细胞和碎片旋转沉降下来，并将50μl上清液转移到每个孔含有200μl水的96-孔平底微量滴定板。在后板中，使用上述在405nm下工作的自动ELISA读出器以分光光度测定法测量由红血球溶解所释放的血红蛋白量。对照组由与水(100％溶血)或缓冲液(VSB-CP或VSB-AP；0％溶血)一起培养的经类似处理的红血球上清液和其中HPS由热灭活HPS(56℃，30min；校正试样的背景色)代替的培养物组成。确定细胞毒性制备5-羧基二乙酸萤光素的丙酮储备溶液(CFDA；10mg/ml)并在-20℃下存储。使用前，以缓冲剂将所述储备溶液稀释为1∶1000。在10ml的磷酸盐缓冲液(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于增进伤口愈合的方法，其包括如下步骤提供医药上有效的pH值基本为中性的金属离子水溶液，所述金属离子选自由钾离子、锌离子、钙离子和铷离子组成的群组，将所述溶液施加到所述伤口经一段足够使与所述伤口相关联的活性氧物质达成中和的时间，借此通过所述溶液对与所述伤口相关联的所述活性氧物质的所述中和作用增进所述伤口的愈合。2.根据权利要求1所述的方法，其包括以柠檬酸调节所述溶液的所述pH值的步骤。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述溶液的所述pH值为约5和约7。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述溶液显示一约为33/ml的超氧清除IC50值。5.一种用于增进伤口愈合的方法，其包括如下步骤提供医药上有效的pH值在约5与约7之间的金属离子水溶液，所述金属离子选自由钾离子、锌离子、钙离子和铷离子组成的群组，将所述溶液施加到所述伤口，借此所述溶液通过受激多形核嗜中性粒细胞来抑制与所述伤口相关联的活性氧物质的产生、清除超氧负离子、抑制吸引或刺激多形核嗜中性粒细胞的因子、或达成所述作用的组合，及所述伤口愈合。6.根据权利要求5所述的方法，其中采用柠檬酸将所...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·H·门罗，汉斯·胡克斯特拉，A·J·J·范登伯格，
申请(专利权)人：格雷斯通医疗集团有限公司，
类型：发明
国别省市：