本发明专利技术公开了属于医学肿瘤学技术领域的一种肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白疫苗及其应用。本发明专利技术的蛋白疫苗包括HCA587蛋白、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、ISCOM佐剂、CpG?ODN-1826。本发明专利技术的HCA587蛋白疫苗能够诱导CD4和CD8T细胞免疫应答和体液免疫应答，并且能够预防小鼠肿瘤的生长，对已建立肿瘤的荷瘤小鼠可延长其存活期，抑制肿瘤的生长速度，具有很好的抗肿瘤效果，为HCA587蛋白疫苗的临床应用奠定了科学基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学肿瘤学
，具体涉及一种肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白疫苗及其应用。
技术介绍
肿瘤发病率、死亡率呈逐年上升趋势，目前癌症已经成为严重威胁人类健康的头号杀手。尽管肿瘤的手术治疗、化疗和放射治疗不断取得进展，但仍然有相当比例的患者不治。近年来，随着人们对肿瘤的分子机理和免疫机制的不断揭示，肿瘤特异的免疫治疗日益受到重视。肿瘤特异性抗原的鉴定是开发有效的肿瘤免疫治疗途径的先决条件。肿瘤-睾丸抗原(简称CT抗原)是一种主要的肿瘤特异性抗原，其主要表达于正常的睾丸组织以及不同类型的肿瘤组织中。由于肿瘤-睾丸抗原高度的组织限制性表达模式，目前这类抗原被认为是癌症免疫治疗的理想靶点。迄今为止，已收录入CT数据库的CT基因家族成员已达到110个。很多CT抗原蛋白疫苗在小鼠模型中展现了强而特异的免疫应答，并能产生抗肿瘤效应。在含ISC0MATRIX佐剂的重组NY-ES0-1蛋白疫苗的临床前试验中，该疫苗在小鼠体内诱导产生了 NY-ES0-1特异的细胞免疫应答和体液免疫应答；接种了 NY-ES0-1疫苗的小鼠，当注射稳定表达NY-ES0-1蛋白的B16黑色素瘤细胞后，能很长时间处于无瘤状态。在小鼠模型中，重组HPV16来源的E6E7或E7GST融合蛋白与ISC0MATRIX佐剂共免疫， 诱导产生E7特异的细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答和抗体应答，并能在体内保护机体免受肿瘤攻击。现已有一些CT抗原的蛋白疫苗处于临床试验阶段，如NY-ES0-1、MAGE-A3的蛋白疫苗。NY-ES0-1蛋白疫苗的临床试验报告显示，其能在多数肿瘤患者诱导产生很强的抗体应答及⑶4+T、⑶8+T细胞应答。另外，在含纳18名肿瘤患者的MAGE-A3蛋白疫苗临床试验中，8名患者接种MAGE-A3蛋白疫苗(含佐剂)后，有7名能产生高滴度的抗体，4名能产生强烈的⑶4+T细胞应答，并有1名产生了⑶8+T细胞应答。自最后一次免疫后的3年内，18 名患者中有14名未见肿瘤复发；并且在再次免疫后，很高比例的患者能立即产生高峰度的 MAGE-A3特异性抗体。这些临床试验结果说明肿瘤抗原的重组蛋白疫苗能有效地诱导特异性的T细胞应答和B细胞应答，并能维持长时的记忆性，在二次遭遇抗原时，免疫细胞能快速地再活化，产生特异的免疫应答。肝细胞癌相关抗原(Hepatocellular carcinoma associated antigen, HCA) HCA587(又称 MAGE-C2)，是利用 SEREX(serological analysis of recombinant cDNA expression 1 ibraries)方法从HCC患者的肝癌组织cDNA表达文库中克隆出来的一种新的 CT抗原(Genbank AF 239802)。HCA587表达于多种肿瘤组织，如肝癌，肺癌，黑色素瘤等， 在正常组织中仅表达于睾丸，而睾丸属于免疫豁免区，不会产生免疫应答。此外，HCA587具有很好的免疫原性在肿瘤患者血清中能检测到自发的抗HCA587抗体的产生；在体外，用 HCA587重组蛋白可以从正常人外周血中成功地诱导出HCA587特异的⑶8+T细胞及⑶4+T细胞应答。鉴于HCA587抗原具有很好的肿瘤组织表达特异性，且免疫原性强，因此是作为肿瘤疫苗的理想的候选抗原。以往的研究工作主要集中在HCA587蛋白的MHC I类分子表位的鉴定，虽然表位肽疫苗在体内能诱导产生细胞免疫应答，但荷瘤小鼠的动物实验却未见表位肽疫苗的抗肿瘤效果(表现在对肿瘤生长速度和荷瘤小鼠的存活期均未见影响)。蛋白疫苗除可克服表位肽疫苗的MHC限制性外，还具有较强的诱导机体同时产生细胞免疫应答和体液免疫应答的作用，是具有较好临床应用前景的候选疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白疫苗。本专利技术的目的还在于提供肿瘤-睾丸抗原HCA587在制备抗肿瘤药物方面的应用。一种肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白疫苗，其特征在于，该蛋白疫苗为HCA587蛋白与完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、ISCOM佐剂、CpG ODN-IS^中的一种或多种的混合乳化物。所述HCA587蛋白疫苗的总体积为100 μ 1，其中HCA587蛋白的用量为10 μ g， ISCOM 佐剂用量为 12 μ g, CpG 0DN-1826 用量为 12 μ g。肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白疫苗在制备抗肿瘤药物方面的应用。本专利技术的有益效果本专利技术的肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白疫苗能够诱导CD4和 CD8T细胞免疫应答和体液免疫应答；诱导分泌多种Thl类细胞因子，并且能够预防小鼠肿瘤的生长，对已建立肿瘤的荷瘤小鼠可延长其存活期，抑制肿瘤的生长速度，具有很好的抗肿瘤效果，为HCA587蛋白疫苗的临床应用奠定了科学基础。附图说明图1免疫小鼠脾细胞中产生IFN- γ的细胞频数检测；图中，medium-培基阴性对照、OVAprotein-阴性对照蛋白、HCA587protein_肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白。图2HCA587蛋白联合ISCOM、CpG免疫后小鼠⑶4+T细胞产生细胞因子的检测；图中，Isotype-荧光标记抗体的同型对照、OVA protein-阴性对照蛋白、 HCA587protein-肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白。图3HCA587蛋白联合ISCOM、CpG免疫后小鼠⑶8+T细胞产生细胞因子的检测；图中，I sotype-荧光标记抗体的同型对照、OVA protein-阴性对照蛋白、 HCA587protein-肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白。图4免疫后小鼠脾细胞在不同抗原刺激下分泌细胞因子IFN- γ的检测；图中，medium-培基阴性对照、OVA-阴性对照蛋白、HCA587-肿瘤-睾丸抗原 HCA587 蛋白、HCA587+CpG+ISC0M-HCA587 蛋白联合 ISC0M，CpG 免疫组、CpG+ISCOM-ISCOM 加 CpG免疫的佐剂对照组、PBS-PBS免疫的对照组。图5免疫后小鼠脾细胞在不同抗原刺激下分泌细胞因子IL-2的检测；图中，medium-培基阴性对照、OVA-阴性对照蛋白、HCA587-肿瘤-睾丸抗原 HCA587 蛋白、HCA587+CpG+ISC0M-HCA587 蛋白联合 ISC0M，CpG 免疫组、CpG+ISCOM-ISCOM 加 CpG免疫的佐剂对照组、PBS-PBS免疫的对照组。图6免疫后小鼠脾细胞在不同抗原刺激下分泌细胞因子TNF-α的检测；图中，medium-培基阴性对照、OVA-阴性对照蛋白、HCA587-肿瘤-睾丸抗原HCA587 蛋白、HCA587+CpG+ISC0M-HCA587 蛋白联合 ISC0M，CpG 免疫组、CpG+ISCOM-ISCOM 加 CpG免疫的佐剂对照组、PBS-PBS免疫的对照组。图7免疫后小鼠脾细胞的增殖能力检测；图中，medium-培基阴性对照、OVA-阴性对照蛋白、HCA587-肿瘤-睾丸抗原 HCA587 蛋白、HCA587+CpG+ISC0M-HCA587 蛋白联合 ISC0M，CpG 免疫组、CpG+ISCOM-ISCOM 加 CpG免疫的佐剂对照组、PBS-PBS免疫的对照组。图8小鼠二本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种肿瘤－睾丸抗原ＨＣＡ５８７蛋白疫苗，其特征在于，该蛋白疫苗为ＨＣＡ５８７蛋白与完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、ＩＳＣＯＭ佐剂、ＣｐＧ ＯＤＮ－１８２６中的一种或多种的混合乳化物。
【技术特征摘要】
1.一种肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白疫苗，其特征在于，该蛋白疫苗为HCA587蛋白与完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、ISCOM佐剂、CpG 0DN-1826中的一种或多种的混合乳化物。2.根据权利要求1所述一种肿瘤-睾丸抗原HCA587蛋白疫苗，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：张毓，尹艳慧，陈娟娟，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11
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