【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及通过敲除abrB基因提高枯草芽孢杆菌抗菌肽产量的方法,属于生物
技术介绍
枯草芽孢杆菌OfeCiBm ·5油^Vi1S)是目前公认的安全微生物之一,其抗菌代谢产物丰富多样,尤其是脂肽类抗菌物质,不仅抗菌谱广而且还具有生物表面活性剂的功能,因此不仅可以在农业上用于进行生物防治,而且在工业和环境保护上也有着广泛的应用。枯草芽孢杆菌(feci/^Assubtil is) ATCC 9943 是一种可以分泌 surfactin, fengycin等抗菌月太物质的枯草芽孢杆菌(Val6rie Leclere, Romain Marti, Max Bechet. The lipopeptides mycosubtilin and surfactin enhance spreading of Bacillus subtilis strains by their surface-active properties. Arch Microbiol. (2006) 186: 475-483)。其中,surfactin作为一种生物表面活性剂,与化学表面活性剂相比,其具有拥有生物降解能力,低毒,结构丰富的优点,随着对工业原料的环境适应性要求的提高, 其应用于环境保护,石油开采方面潜力将会越来越大。但实际中,其并未在工业以及环境保护中广泛应用,究其原因,是因为它生产成本巨大,所以提高其产量便成为降低其生产成本的核心问题。目前,世界范围内,提高其产量的方法主要是筛选优良菌株,以及优化发酵条件, 而很少采用分子生物学技术对菌种进行改良的方法来提高其产抗菌物质的 ...
【技术保护点】
1.通过敲除abrB基因提高枯草芽孢杆菌抗菌肽产量的方法,其特征在于:(1)abrB基因敲除载体pAbrB-Cm的构建设计引物AbrB5’-F和AbrB5’-R,以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC 9943基因组DNA为模板PCR扩增部分5’端abrB基因及其上游基因,获得500bp基因片段;设计引物AbrB3’-F和AbrB3’-R,以枯草芽孢杆菌ATCC 9943基因组DNA为模板PCR扩增部分3’端abrB基因及其下游基因,获得500bp基因片段;设计引物CM-F和CM-R,以pHCMC04质粒为模板PCR扩增包括启动子和终止子的氯霉素抗性基因表达框,获得1500bp基因片段;扩增得到的三个基因分别克隆至pMD19-T载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5a,经验证、测序正确后,分别命名为pabrB5’-T、pabrB3’ -T、pCM-T,于-20℃条件下保存备用;pabrB5’-T用EcoRI/XbaI双酶切后获得abrB5’片段,与经过相同双酶切处理的pGEM-T载体,用T4 DNA连接酶连接,构建pGEM-abrB5’载体, ...
【技术特征摘要】
1.通过敲除a^ri 基因提高枯草芽孢杆菌抗菌肽产量的方法,其特征在于 (1) abrB基因敲除载体pAbrB-Cm的构建设计引物 AbrB5,-F 和 AbrB5,-R,以枯草芽孢杆菌 UaciBw1S subtil is、KKL 9943 基因组DNA为模板PCR扩增部分5’端 基因及其上游基因,获得500bp基因片段;设计引物AbrB3,-F和AbrB3,-R,以枯草芽孢杆菌ATCC 9943基因组DNA为模板PCR扩增部分3, 端abrB基因及其下游基因,获得500bp基因片段;设计引物CM-F和CM-R,以pHCMC04质粒为模板PCR扩增包括启动子和终止子的氯霉素抗性基因表达框,获得1500bp基因片段;扩增得到的三个基因分别克隆至PMD19-T载体,转化大肠杆菌(Mscherichia coli) DH5a,经验证、测序正确后,分别命名为vabrB5,-Τ、VabrB3' -Τ、pCM- ,于_20°C条件下保存备用; pabrB5 用EcoRI/XbaI双酶切后获得abrB5 片段,与经过相同双酶切处理的pGEM_T 载体,用T4 DNA连接酶连接,构建pGEM- Ρ载体,酶切验证...
【专利技术属性】
技术研发人员:陆兆新,曹国强,吕凤霞,别小妹,张充,钟蕾,
申请(专利权)人:南京农业大学,
类型:发明
国别省市:84
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