一种表面展示家蚕乙醇脱氢酶重组芽孢及其制备方法技术

将家蚕乙醇脱氢酶作为外源蛋白展示在枯草芽孢杆菌表面，属于重组融合蛋白技术领域。本发明专利技术以枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因cotC为分子载体，与家蚕乙醇脱氢酶基因Bmadh重组，构建出融合表达家蚕乙醇脱氢酶BmADH的整合型重组质粒。以之转化枯草芽孢杆菌，通过同源重组使外源基因整合于染色体上特定位点的淀粉酶基因amyE中，使淀粉酶基因被破坏而导致重组菌株无淀粉酶活性，以此成功地筛选出含有融合表达CotC-BmADH的重组枯草芽孢杆菌菌株。通过诱导表达该重组菌株得到表面展示有家蚕乙醇脱氢酶融合蛋白的芽孢。本发明专利技术使原本对温度和pH不稳定的乙醇脱氢酶成为可在不同环境条件下具有相对稳定活性的乙醇脱氢酶融合蛋白，所产生的重组芽孢可用于动物直接口服。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于重组融合蛋白
具体涉及将乙醇脱氢酶作为外源活性蛋白展示在枯草芽孢杆菌表面的方法和重组芽孢。而言是指利用枯草芽孢杆菌在极端的温度、干燥以及暴露于有机溶剂和其他毒性化学物质等不利条件下能长期存活的性质，通过分子生物学方法将有活性的乙醇脱氢酶基因与芽孢衣壳蛋白基因重组后进行表达，使原先对温度和PH不稳定的乙醇脱氢酶成为可在不同环境条件下具有相对稳定活性的乙醇脱氢酶融合蛋白。
技术介绍
乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)属于氧化还原酶家族，能够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide, NAD)为辅酶，催化伯醇和醛之间的可逆反应。ADHs在很多生理过程中都起着重要作用，参与例如类固醇、类维生素A、脂质过氧化产物、脂肪酸、乙醇等代谢过程。在人和哺乳动物体内，ADH与乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase, ALDH)构成了乙醇脱氢酶系，参与体内乙醇代谢，是人和动物体内重要的代谢酶。目前，ADH的应用研究主要体现在以下几个方面①ADH生物电极和乙醇生物传感器，可用于工业分析乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种表面展示家蚕乙醇脱氢酶重组芽孢的制备方法，其特征在于：利用枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因为分子载体，与家蚕乙醇脱氢酶基因重组，构建融合表达的整合型重组质粒，并转化枯草芽孢杆菌得到枯草芽孢杆菌重组菌株，诱导重组菌株产生的芽孢表面展示家蚕乙醇脱氢酶的重组芽孢。

【技术特征摘要】
1.一种表面展示家蚕乙醇脱氢酶重组芽孢的制备方法，其特征在于利用枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因为分子载体，与家蚕乙醇脱氢酶基因重组，构建融合表达的整合型重组质粒，并转化枯草芽孢杆菌得到枯草芽孢杆菌重组菌株，诱导重组菌株产生的芽孢表面展示家蚕乙醇脱氢酶的重组芽孢。2.按照权利要求1所述的表面展示家蚕乙醇脱氢酶重组芽孢的制备方法，其特征在于所述的枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因为⑶^。3.按照权利要求2所述的表面展示家蚕乙醇脱氢酶的重组芽孢的制备方法，其特征在于所述的融合表达的整合型重组质粒是将枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因⑶M与家蚕乙醇脱氢酶基因重组构建的质粒。4.按照权利要求3所述的表面展示家蚕乙醇脱氢酶的重组芽孢的制备方法，其特征在于所述的枯草芽孢杆菌重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈克平，王楠，宁德刚，李国辉，姚勤，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：32