抑制肺转移肿瘤生长的siRNA及其寡聚核酸组合与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制肺转移肿瘤生长的siRNA及其寡聚核酸组合与应用。本发明专利技术所述的寡聚核酸是如下1)-4)中任一所述的双链RNA：1)序列表中序列1和序列2组成的寡聚核酸；2)所述1)的寡聚核酸与PTN-siRNA组成的双寡聚核酸，所述PTN-siRNA是序列表中序列3和序列4组成的寡聚核酸；3)所述1)的寡聚核酸与miR-34a组成的双寡聚核酸，所述miR-34a是序列表中序列5和序列6组成的寡聚核酸；4)所述1)的寡聚核酸与VEGF-siRNA组成的双寡聚核酸，所述VEGF-siRNA是序列表中序列7和序列8组成的寡聚核酸。上述寡聚核酸作为新型小核酸类的抗肿瘤药物，化学合成并修饰的所述寡聚核酸不易被降解，有较长的效应半衰期，能用于体外实验，更能用于体内治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抑制肺转移肿瘤生长的SiRNA及其寡聚核酸组合与应用。
技术介绍
微小核酸(miRNA)是一类高度保守的非编码小核酸，广泛存在于动物植物和病毒中。miRNA通过转录后调控基因的表达，进而调节机体重要的生理与病理过程。微小核酸与肿瘤的发生密切相关。近年来的研究发现，miRNA在肿瘤组织和与正常组织间的表达明显不同。miRNA既可以作为原癌基因促进肿瘤的发生发展，又能作为抑癌基因抑制肿瘤的发生发展，根据miRNA调节肿瘤发生发展的不同机理，将它们组成不同的配方或将它们与其它抗肿瘤的小干扰RNA(siRNA)组成不同的配方，将比单一的miRNA更能有效地治疗肿瘤性疾病。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种寡聚核酸在制备抑制肺转移肿瘤生长的试剂中的应用。本专利技术所述的寡聚核酸是如下1)-4)中任一所述的双链RNA 1)序列表中序列1和序列2组成的寡聚核酸；2)所述1)的寡聚核酸与PTN-siRNA组成的双寡聚核酸，所述PTN_siRNA是序列表中序列3和序列4组成的寡聚核酸；3)所述1)的寡聚核酸与mil^Ma组成的双寡聚核酸，所述mil^Ma是序列表中序列5和序列6组成的寡聚核酸；4)所述1)的寡聚核酸与VEGF-siRNA组成的双寡聚核酸，所述VEGF_siRNA是序列表中序列7和序列8组成的寡聚核酸。上述2)的双寡聚核酸中，所述1)的寡聚核酸与PTN-siRNA的质量比是 (0.5-2) (0.5-2)，优选是 1 1。上述3)的双寡聚核酸中，所述1)的寡聚核酸与miR_34a的质量比是 (0.5-2) (0.5-2)，优选是 1 1。上述4)的双寡聚核酸中，所述1)的寡聚核酸与VEGF-SiRNA的质量比是 (0.5-2) (0.5-2)，优选是 1 1。进一步，上述1)-4)中的寡聚核酸均是经过如下a)或b)或c)修饰得到的寡聚核酸a)对所述寡聚核酸的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰，优选将所述磷酸二酯键的氧用硫取代；b)对所述寡聚核酸的核糖的2’_0H的修饰，优选将所述2’_0H用甲氧基或氟取代或者对所述2’ -OH进行脱氧修饰；c)对所述寡聚核酸5’端连上胆固醇的修饰。上述序列表中序列1、3、5、7、9从左至右方向为5’ _3’，序列表中序列2、4、6、8、10 从左至右方向为3’ -5’。上述肿瘤是肠癌、鼻咽癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌或肺癌。上述试剂可以包含上述寡聚核酸分子中的至少一种以及至少一种药学上可接受的载体。本文所用的“药学上可接受的载体”应当与本专利技术试剂中的双链RNA分子相容。在一个优选实施例中，所述“药学上可接受的载体”是指体内转染试剂，如聚乙烯亚胺(PEI)， jetPEI (线性聚乙烯亚胺)，TF-PEI (转铁蛋白聚乙烯亚胺)脂质体，转铁蛋白，叶酸等。所述寡聚核酸为化学合成，可以进行2'氟代O' _F)、2'甲氧基O' -(Me)At 代(PQ和2'脱氧、2’ -deoxy)化学修饰，也可以在5’端连上胆固醇修饰。用化学合成并修饰的上述寡聚核酸分子转染鼻咽癌细胞株CNE形成的肺转移瘤肿瘤细胞的实验结果表明 miR-210、siPTN、miR-210+siVEGF、miR-34a+miR_210、 miR-210+siPTN这几组均可以有效的抑制肺转移瘤的生长。作为新型小核酸类的抗肿瘤药物，化学合成并修饰的所述寡聚核酸不易被降解， 有较长的效应半衰期，能用于体外实验，更能用于体内治疗。附图说明图1为2' -F-siPTN及其寡聚核酸治疗抑制肺转移瘤形成的肺部压片效果图。图2为2 ‘ -F-siPTN及其寡聚核酸组合治疗鼻炎癌肺转移6次以后肺部转移灶统计柱形图。图3为2' -F-siPTN及其寡聚核酸组合治疗鼻炎癌肺转移组织切片图。 具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术并不限于以下实施例。下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1、寡聚核酸的制备本专利技术中所述寡聚核酸miR-210正义链为5，-CU⑶GC⑶⑶GACAGCGGCUGA-3 ，(SEQ ID No. 1)；反义链为 3，-UUGACACGCACACU(iUCGCCGA-5，序列(SEQ ID No. 2)； PTN-siRNA 序列正义链为5，-GCCCAAACCUCAAGCAGAATT-3，(SEQ ID No. 3)；反义链为 3，-TTCGGGUUUGGA⑶UC⑶CUU-5，(SEQ ID No. 4)；本专利技术中 miR_34a 正义链为 5，-UGGCA⑶ ⑶CUUAGCUG⑶UGU-3，(SEQ ID No. 5)；反义链为 3，-UUACC⑶CACAGAAUCGACCAA-5，(SEQ ID No. 6)；本专利技术中 VEGF-siRNA 正义链为 5，-GGAGUACCCUGAUGAGAUCTT-3，(SEQ ID No. 7)；反义链为3，-TTCXUCAUGGGACUA⑶CUAG-5，(SEQ ID No. 8)；本专利技术中所述随机序列作为阴性对照(NC)，NC 的正义链序列为5，-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’ (SEQ ID No. 9)，反义链序列为3，-TTAAGAGGCUUGCACAGUGCA-5，(SEQ IDNo. 10)。所述寡聚核酸和 NC 序列中的 A、G、 C、U表示腺嘌呤核糖核苷酸、鸟嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸和尿嘧啶核糖核苷酸，T 表示胸腺嘧啶脱氧核苷酸。所述寡聚核酸和NC委托上海吉玛(GenePharma)制药技术有限公司合成并进行如下任意一种化学修饰2'甲氧基O' -OMe),2'氟代O' -F)、硫代和2'-脱氧 (2' -deoxy), 5'胆固醇(5' -Cholesterol)。然后经冻干处理得到寡聚核酸粉末，用于实施例2中的实验。其中miR-210经2'氟代修饰后命名为2' -F_miR-210 ;miIKMa经2 ‘氟代修饰后命名为2' -F-miR-34a ;PTN-siRNA经2 ‘甲氧基修饰后命名为2' -F-SiPTN0 VEGF-siRNA经2 ‘甲氧基修饰后命名为2' _F_siVEGF ;NC经2 ‘氟代修饰后命名为 2' -F-NC。上述合成方法源自一篇1995年公开的文献Wincott F，DiRenzo A, Shaffer C, GrimmS, Tracz D, Workman C, Sweedler D, Gonzalez C, Scaringe S and Usman N. Synthesis, deprotection, analysis and purification of RNA and ribozymes. Nucleic Acids Res. 1995,23 2677-840整个化学合成可大致分成四个的过程(1)寡聚核糖核酸的合成；⑵脱保护；⑶纯化分离；⑷脱盐退火无菌消毒。(1)寡聚核糖核苷酸的合成在自动DNA/RNA 合成仪(例如，AppliedBiosystems EXPEDITE8909)上设定合成1毫摩尔的RNA，同时设定每个循环的偶联时间为10-15分钟，起始物为固相连接的 5'-O-对二甲氧基-胸苷支持物，第一个循环在固相支本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．寡聚核酸在制备抑制肺转移肿瘤生长的试剂中的应用；所述寡聚核酸是如下１）－４）中任一所述的双链ＲＮＡ：１）序列表中序列１和序列２组成的寡聚核酸；２）所述１）的寡聚核酸与ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ组成的双寡聚核酸，所述ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ是序列表中序列３和序列４组成的寡聚核酸；３）所述１）的寡聚核酸与ｍｉＲ－３４ａ组成的双寡聚核酸，所述ｍｉＲ－３４ａ是序列表中序列５和序列６组成的寡聚核酸；４）所述１）的寡聚核酸与ＶＥＧＦ－ｓｉＲＮＡ组成的双寡聚核酸，所述ＶＥＧＦ－ｓｉＲＮＡ是序列表中序列７和序列８组成的寡聚核酸。

【技术特征摘要】
1.寡聚核酸在制备抑制肺转移肿瘤生长的试剂中的应用；所述寡聚核酸是如下1)-4) 中任一所述的双链RNA 1)序列表中序列1和序列2组成的寡聚核酸；2)所述1)的寡聚核酸与PTN-siRNA组成的双寡聚核酸，所述PTN-siRNA是序列表中序列3和序列4组成的寡聚核酸；3)所述1)的寡聚核酸与mil^Ma组成的双寡聚核酸，所述mil^Ma是序列表中序列5 和序列6组成的寡聚核酸；4)所述1)的寡聚核酸与VEGF-siRNA组成的双寡聚核酸，所述VEGF_siRNA是序列表中序列7和序列8组成的寡聚核酸。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述2)的双寡聚核酸中，所述1)的寡聚核酸与PTN-siRNA的质量比是(0.5-2) (0.5-2)，优选是1 1。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述3)的双寡聚核酸中，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建娜，张雅鸥，谢伟东，何杰，张佩琢，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，上海吉玛制药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：94