本发明专利技术涉及结合于HER-3的结合蛋白及其编码的核苷酸，也提供了用于生产本发明专利技术结合蛋白的表达载体和宿主细胞。此外，本发明专利技术还提供了用于诊断和治疗与HER-3介导的信号传导和/或其配体heregulin相关疾病的组分和方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及结合蛋白，包括结合于HER-3的抗体及其结合片段以及编码它们的多核苷酸序列。本专利技术也提供了用于生产本专利技术结合蛋白的表达载体和包含该表达载体的宿主细胞。此外，本专利技术还提供了用于诊断和治疗与HER-3介导的信号转导和/或其配体调蛋白(heregulin)相关疾病的组合物和方法。
技术介绍
人类表皮生长因子受体3 (HER-3，也称为ErbB!3)是一种受体蛋白酪氨酸激酶，属于受体蛋白酪氨酸激酶的表皮生长因子受体(EGFR)亚家族，该家族还包括HER-1(也称为 EGFR)、HER-2 和 HER-4 (Plowman 等人的 Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 87 (1990)，4905-4909 ； Kraus 等人的 Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 86 (1989)，9193-9197 ；以及 Kraus 等人的 Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 90 (1993)，2900-2904)。与典型的表皮生长因子受体一样，跨膜受体 HER-3由+胞外配体结合结构域(ECD)、ECD内的二聚体结构域、跨膜结构域，胞内蛋白酪氨酸激酶结构域(TKD)和C端磷酸化结构域组成。配体调蛋白(HRG)与HER-3的胞外结构域结合，并且通过促进其与其他人类表皮生长因子受体(HER)家族成员的二聚化，并且使HER-3的跨膜结构域磷酸化，从而激活受体介导的信号通路。HER家族成员间的二聚体放大了 HER-3的信号电位，它既是信号多样化的方式也是信号放大的方式。例如，在HER家族成员中，HER-2/HER-3的异源二聚体诱导了最重要的促有丝分裂信号中的一个。HER-3已被发现在一些类型的癌症如乳腺癌、胃肠癌和胰腺癌中过表达。有趣的是，已有研究表明HER-2/HER-3的表达和癌症从非侵袭阶段发展到侵袭阶段有相关性 (Alimandi 等人的 Oncogene 10,1813-1821 ；deFazio 等人的 Cancer 87，487-498 ;Naidu 等人的Br. J. Cancer 78，1385-1390)。因此，干扰HER-3介导的信号转导的制剂是令人期望的。已经报道了鼠源或嵌合型HER-3抗体，比如在专利US596851UUS5480968和W003013602 中。最近研究表明，一种针对HER-2的人源化单克隆抗体赫赛Hercept in ) ，干扰了 HER-2介导的信号转导，对人类癌症有治疗效果(Fendly等人的Hybridoma 6， 359-370 ；Hudziak 等人的 MoI. Cell. Biol. 9，1165-1172 ；Stebbing 等人的 Cancer Treat. Rev. 26,287-290)。已表明赫赛打 可以通过两种不同的机制起作用，也就是免疫系统的效应细胞的参与和直接的细胞毒及凋亡诱导作用。但是，只有那些高表达HER-2的患者对赫赛彡丁 的治疗反应显著，因此，限制了适合治疗的患者数目。而且，耐药性的发展或是肿瘤细胞中HER-2表达或其表位序列的改变可能会使那些有希望被治疗的患者不能与抗体反应从而消除了其治疗作用。因此，需要有更多的靶向治疗药物涉及HER家族的其它成员，如HER-3。附图简要说明附图说明图1表示了 HER-3在一系列人类癌细胞系中的表达程度，表明HER-3在多种人类癌症均表达。图2表示了 FACS分析HER-3抗体与稳定表达HER家族不同成员的Rati细胞或仅含有空载体的Rati细胞的结合情况。图3表示的是抗体竞争bins定位于HER3结构域。图4表示的是利用本专利技术的抗HER-3抗体进行间接的FACSkatchard抗体亲和分析的结果。分析表明本专利技术的抗HER-3抗体对表达于细胞表面的HER-3具有高亲和力和高结合常数。图5表示的是本专利技术的抗HER-3抗体加速了 HER-3的内吞作用。图6a_e表示的是利用本专利技术的抗HER-3抗体进行的配体竞争分析的结果。这些结果表明，本专利技术的抗体特异地降低了 4-服6/-3-服6与表达内源冊1 -3的细胞的结合。图7a表示的是利用本专利技术的抗HER-3抗体进行HER-3磷酸酪氨酸酶联免疫吸附实验(ELISA)的结果。本专利技术的抗体能够抑制β-HRG介导的HER-3活化，表现为受体酪氨酸磷酸化程度增加。图7b表示了利用滴定过的抗体进行本实验的代表性结果。图8表示的是利用本专利技术的抗HER-3抗体与p42/p44MAP激酶进行酶联免疫吸附实验的结果。本专利技术的抗体能够降低β -HRG介导的ρ42/ρ44ΜΑΡ-激酶活化，表现为MAP-激酶磷酸化程度增加。图9表示的是利用本专利技术的抗HER-3抗体与磷酸AKT进行酶联免疫吸附实验的结果。本专利技术的抗体能够降低β-HRG介导的AKT活化，表现为AKT的磷酸化。图10表示的是本专利技术的人抗HER-3抗体抑制了 MCF7细胞增值。本专利技术的抗体抑制了人类癌细胞中HRG诱导的细胞增值。图11表示的是本专利技术的人抗HER-3抗体抑制了 MCF7细胞的转移。图lh-i表示的是本专利技术的人抗HER-3抗体抑制了非贴壁依赖性细胞的生长。图13表示的是本专利技术的人抗HER-3抗体对T47D人类乳腺癌细胞的异种移植生长的抑制。图14表示的是通过对小鼠施用抗Her3(Ul_59 and U1-53)或抗EGFR(爱必妥) 抗体，减少了小鼠中BxPC3人类胰腺癌细胞数量。图15表示的是本专利技术的人类抗HER-3抗体以及与抗EGFR(爱必妥)的抗体的联合，降低了人类胰腺癌细胞BxPC3的异种移植生长。图16表明本专利技术的抗体延缓了黑色素瘤细胞(HT144)在nu/nu小鼠中的生长。图17表示的是本专利技术的人类HER-3抗体(U1_53，U1_59 and U1-7)降低了人类结肠癌细胞HT-29的异种移植生长。图18表示的是本专利技术的人类抗HER-3抗体(Ul-59，Ul-53 andUl-7)降低了人类肺癌细胞Calu-3的异种移植生长。图19表示的是本专利技术的人类抗HER-3抗体(Ul-7，Ul-59 andUl-53)降低了人类胰腺癌细胞BxPC3的异种移植生长。图20表明本专利技术的抗体(U1-59)导致HER-3在BxPC3人类胰腺癌异种移植中受到抑制。专利技术_既述本专利技术的首要方面涉及一种结合于HER-3的分离的结合蛋白。在本专利技术的一个实施方案中，本专利技术的一种分离的结合蛋白包括重链氨基酸序列，其包含至少一个互补决定区(CDR)，该CDR选自以下序列组成的群组(a)SEQ ID NOs :2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、 74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、 154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230所示的CDRHl ；(b)SEQ ID NOs :2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、4本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种结合于ＨＥＲ－３的分离的抗体，其选自下述之一：（１）抗体，其特征在于其重链ＣＤＲ１由序列ＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳ构成，重链ＣＤＲ２由序列ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ构成，重链ＣＤＲ３由序列ＤＫＷＴＷＹＦＤＬ构成；且其轻链ＣＤＲ１由序列ＲＳＳＱＳＶＬＹＳＳＳＮＲＮＹＬＡ构成，轻链ＣＤＲ２由序列ＷＡＳＴＲＥＳ构成，轻链ＣＤＲ３由序列ＱＱＹＹＳＴＰＲＴ构成；（２）抗体，其特征在于其重链ＣＤＲ１由序列ＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨ构成，重链ＣＤＲ２由序列ＷＩＮＰＮＩＧＧＴＮＣＡＱＫＦＱＧ构成，重链ＣＤＲ３由序列ＧＧＲＹＳＳＳＷＳＹＹＹＹＧＭＤＶ构成；且其轻链ＣＤＲ１由序列ＫＳＳＱＳＬＬＬＳＤＧＧＴＹＬＹ构成，轻链ＣＤＲ２由序列ＥＶＳＮＲＦＳ构成，轻链ＣＤＲ３由序列ＭＱＳＭＱＬＰＩＴ构成，和（３）抗体，其特征在于其重链ＣＤＲ１由序列ＧＦＴＦＳＩＹＳＭＮ构成，重链ＣＤＲ２由序列ＹＩＳＳＳＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ构成，重链ＣＤＲ３由序列ＤＲＧＤＦＤＡＦＤＩ构成；且其轻链ＣＤＲ１由序列ＱＡＳＱＤＩＴＮＹＬＸＮ构成，轻链ＣＤＲ２由序列ＤＡＳＮＬＥＴ构成，轻链ＣＤＲ３由序列ＱＱＣＥＮＦＰＩＴ构成。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·罗瑟，M·特里德，S·哈特曼，D·弗里曼，B·拉丁斯基，E·伯吉斯，
申请(专利权)人：U三制药有限公司，安进公司，
类型：发明
国别省市：DE
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