本发明专利技术公开了一种CdTe量子点标记过氧化氢酶荧光探针的制备方法，其步骤：A、制备碲氢化钾溶液：通过硼氢化钾还原碲粉制备；B、称取氯化镉晶体，用高纯水溶解定容，得氯化镉溶液；C、称取巯基乙酸，用高纯水稀释定容，得巯基乙酸溶液；D、取无氧高纯水，在搅拌和不断通入高纯氮气，分别加入氯化镉溶液、巯基乙酸溶液，用氢氧化钠溶液调节pH值，加入碲氢化钾溶液；E、将混合液分装于聚四氟乙烯消解罐中，氯化镉、碲氢化钾、巯基乙酸的摩尔比率；F、取CdTe量子点，加入N-羟基琥珀酰亚胺于恒温振荡，得量子点标记过氧化氢酶荧光探针。工艺简单，工艺参数易控制；具有很好的生物相容性；具有双重检测性能，同时可进行荧光检测与酶活性检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及量子点的生物应用，更具体涉及一种CdTe，该探针可用于检测污染物、毒物与酶的作用效应。
技术介绍
有机相合成的量子点不具备亲水性，因此不能直接应用于生物体系，必须对其进行表面修饰，其操作过程复杂，条件要求高。水相合成法制备的量子点能够直接用于生物探针， 对其研究愈来愈受到重视，有关这方面的研究进展很快。但由于水相合成的量子点所选用的配体多为简单的巯基化合物，表面的活性基团比较少且表面积很小，难以与目标物质结合，因此水相量子点的直接应用存在局限性。因此，将量子点与生物大分子结合既增大了量子点的表面积，又增加了量子点表面活性基团，克服了水相量子点的应用局限性。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了一种CdTe， 该制备方法工艺快速简单，工艺参数易控制。该探针水溶性和生物相容性好，检测功能应用广泛，性价比高，在保持了过氧化氢酶(CAT)—定活性的同时，修饰了量子点表面，使其具有较高的荧光强度。为了实现上述的目的，本专利技术采用以下技术措施其技术构思是一种CdTe量子点标记过氧化氢酶荧光探针，它包括CdTe量子点(自制， 请见A E步骤)、过氧化氢酶(CAT，SIGMA-AL0RICH)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS，上海延长生化公司)、L-甘氨酸(Glycine，凌飞科技)，其余为Tris缓冲溶液。所述的CdTe量子点中，氯化镉(CdCl2*2. 5H20,国药集团化学试剂有限公司)、碲氢化钾(KTeH4,请见A步骤)、巯基乙酸(TGA, Japan)的摩尔比率分别为2. 5 1 :3，100°C条件下加热l(T20min。所述的Tris缓冲溶液pH值为6. 8-7. 6。—种CdTe，其步骤如下A、制备碲氢化钾(KH4Te)溶液通过硼氢化钾(KBH4，天津市天大化学试剂厂)还原碲粉(Te，国药集团化学试剂有限公司)制备，反应方程式如下4KBH4 + 2Te + 7H20 — 2KH4Te + K2B4O7 +IlH2 分别称取0. 337g的硼氢化钾(KBH4)和0. 319g的碲粉(Te)于具塞试管中。向硼氢化钾 (KBH4)中加入5mL高纯水，至白色粉末完全溶解，后与碲粉(Te)混合，塞上塞子，于3__5°C 下反应纩16h，得紫黑色液体，取上清部分Iml，用无氧高纯水定容至IOOml，即为0. 005mol/ L的碲氢化钾(KH4Te)溶液；B、称取0.228g氯化镉(CdCl,2. 5H20)晶体，用高纯水溶解定容至IOOmL, U 0. Olmol/ L的氯化镉(CdCl2)溶液；C、称取0.092g巯基乙酸(TGA)，用高纯水稀释定容至IOOmL,得0. 01mol/L的巯基乙酸 (TGA)溶液。D、取无氧高纯水250mL，在中速搅拌和不断通入高纯氮气(N2)的条件下，依次分别加入50mL0. 01mol/L的氯化镉(CdCl2)溶液、60mL0. 01mol/L的巯基乙酸(TGA)溶液，用 5mol/L的氢氧化钠(NaOH)溶液调节pH值为10. 5^11. 5，后加入40mL碲氢化钾(KH4Te)溶液,反应4-6min。Ε、将D步骤的混合液以每罐50ml分装于聚四氟乙烯消解罐中，于100°C下微波加热10-20min，即制得浓度为1 mmol/L (以Cd2+计)CdTe量子点。氯化镉(CdCl2)、碲氢化钾 (KH4Te)、巯基乙酸(TGA)的摩尔比率分别为2. 5 1 :3。F、取4mL制备好的浓度为1 mmol/L (以Cd2+计)CdTe量子点，加入0. 2mL0. 5g/L 的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)于37°C恒温振荡0. 5-lh，使偶联剂N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 的羟胺基与CdTe量子点的羧酸基充分进行酯化反应，后加入0. 5mL4X10-10 mol/L的过氧化氢酶(CAT)溶液，于25 35°C下振荡4(T60min后，加入0. 3mL、0. lmol/L的L-甘氨酸 (Glycine)终止交联。制得量子点标记过氧化氢酶荧光探针，该探针在保持了一定酶活性的同时，使量子点的荧光强度得到较大提高(309Γ509Ο。所述的CdTe量子点如何制备的过程请见步骤A E。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果1.该探针主要原料大部分来源丰富，价格低廉；过氧化氢酶虽价格较贵，但添加量少， 对总体价格影响不大。2.该探针制备工艺快速简单，工艺参数易控制。3.该探针水溶性和生物相容性好，检测功能应用广泛，性价比高。具体实施例方式下面通过实施例，进一步阐明本专利技术的突出特点，仅在于说明本专利技术而决不限制本专利技术。实施例1 一种CdTe量子点标记过氧化氢酶荧光探针，它包括CdTe量子点、过氧化氢酶(CAT， SIGMA-AL0RICH)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS，上海延长生化公司)、L-甘氨酸(Glycine，凌飞科技)，其余为Tris缓冲溶液。所述的CdTe量子点中，氯化镉(CdCl2*2. 5H20,国药集团化学试剂有限公司)、碲氢化钾(KTeH4,)、巯基乙酸(TGA，Japan)的摩尔比率分别为2. 5 1 :3，100°C条件下加热 10 20min。所述的Tris缓冲溶液pH值为6. 8-7. 6。一种CdTe，其步骤如下A、制备碲氢化钾(KH4Te)溶液通过硼氢化钾(KBH4)还原碲粉(Te)制备，反应方程式如下4KBH4 + 2Te + 7H20 — 2KH4Te + K2B4O7 +IlH2 分别称取0. 337g的硼氢化钾(KBH4)和0. 319g的碲粉(Te)于具塞试管中。向硼氢化钾(KBH4)中加入5mL高纯水，至白色粉末完全溶解，后与碲粉(Te)混合，塞上塞子，于3°C、 或 1°C、或-1°C、或-2°C、或-3°C、或-4°C、或-5°C下反应 8 h、或 10 h、或 12 h、或 14 h、或 16h，得紫黑色液体，取上清部分1ml，用无氧高纯水定容至100ml，即为0. 005mol/L的碲氢化钾(KH4Te)溶液；B、称取0.228g氯化镉(CdCl,2. 5H20)晶体，用高纯水溶解定容至IOOmL,得0. Olmol/ L的氯化镉(CdCl2)溶液；C、称取0.092g巯基乙酸(TGA)，用高纯水稀释定容至IOOmL,得0. Olmol/L的巯基乙酸 (TGA)溶液。D、取无氧水250mL，在中速搅拌和不断通入高纯氮气( )的条件下，依次分别加入 50mL0. 01mol/L 的氯化镉(CdCl2)溶液、60mL0. 01mol/L 的巯基乙酸(TGA)，用 5mol/L 的氢氧化钠溶液(NaOH)调节pH值为10. 5、或11、或11. 3、或11. 5，后加入40mL碲氢化钾(KH4Te) 溶液，反应5min。Ε、将D步骤的混合液以每罐50ml分装于聚四氟乙烯消解罐中，于100°C下微波加热10或12或14或16或18或20min，即制得浓度为1 mmol/L (以Cd2+计)CdTe量子点。 氯化镉(CdCl2)、碲氢化钾(KH4Te)、巯基乙酸(TGA)的摩尔比率分别为2.5 1 :3。F、取4mL制备好的浓度为1 mmol/L (以Cd2+计)CdTe量子点，加入0. 2mL0. 5g/L的 N-羟基琥珀酰亚胺本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种ＣｄＴｅ量子点标记过氧化氢酶荧光探针的制备方法，其步骤如下：制备碲氢化钾溶液：通过硼氢化钾还原碲粉制备，反应方程式如下： ４ＫＢＨ４ ＋ ２Ｔｅ ＋ ７Ｈ２Ｏ → ２ＫＨ４Ｔｅ ＋ Ｋ２Ｂ４Ｏ７ ＋１１Ｈ２↑分别称取０．振荡４０～６０ｍｉｎ后，加入０．３ｍＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌ的Ｌ－甘氨酸终止交联，制得量子点标记过氧化氢酶荧光探针。ＣｄＴｅ量子点，加入０．２ｍＬ０．５ｇ／Ｌ的Ｎ－羟基琥珀酰亚胺于３７℃恒温振荡０．５－１ｈ，使偶联剂Ｎ－羟基琥珀酰亚胺的羟胺基与ＣｄＴｅ量子点的羧酸基进行酯化反应，后加入０．５ｍＬ４×１０－１０ ｍｏｌ／Ｌ的过氧化氢酶溶液，于２５～３５℃下步骤的混合液以每罐５０ｍｌ分装于聚四氟乙烯消解罐中，于１００℃下微波加热１０－２０ｍｉｎ，即制得浓度为１ ｍｍｏｌ／Ｌ ＣｄＴｅ量子点，氯化镉、碲氢化钾、巯基乙酸的摩尔比率分别为 ２．５：１：３；Ｆ、取４ｍＬ制备好的浓度为１ ｍｍｏｌ／Ｌ不断通入高纯氮气的条件下，依次分别加入５０ｍＬ０．０１ｍｏｌ／Ｌ的氯化镉溶液、６０ｍＬ０．０１ｍｏｌ／Ｌ的巯基乙酸溶液，用５ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠溶液调节ｐＨ值为１０．５～１１．５，后加入４０ｍＬ碲氢化钾 溶液，反应４－６ｍｉｎ；Ｅ、将（Ｄ）氢化钾溶液；Ｂ、称取０．２２８ｇ氯化镉晶体，用高纯水溶解定容至１００ｍＬ，得０．０１ｍｏｌ／Ｌ的氯化镉溶液；Ｃ、称取０．０９２ｇ巯基乙酸，用高纯水稀释定容至１００ｍＬ，得０．０１ｍｏｌ／Ｌ的巯基乙酸溶液；Ｄ、取无氧高纯水２５０ｍＬ，在搅拌和３３７ｇ的硼氢化钾和０．３１９ｇ的碲粉于具塞试管中，向硼氢化钾中加入５ｍＬ高纯水，至白色粉末完全溶解，后与碲粉混合，塞上塞子，于３－－５℃下反应８～１６ｈ，得紫黑色液体，取上清１ｍｌ，用无氧高纯水定容至１００ｍｌ，为０．００５ｍｏｌ／Ｌ的碲...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周培疆，陈驰，何振宇，史广宇，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：83
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